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1、褐藻羊棲菜水通道蛋白基因SfLIP的克隆及其在淡水浸泡下的表達(dá)分析 摘要褐藻羊棲菜對(duì)淡水浸泡有很強(qiáng)的耐受能力，利用此特性，養(yǎng)殖戶們用淡水浸泡的方法清除沙蠶等敵害生物，而對(duì)羊棲菜幼苗則無(wú)不良影響，而藻類獨(dú)特的水通道蛋白在其中可能扮演重要角色。通過(guò)克隆得到了褐藻羊棲菜SfLIP基因編碼序列，其包含678bp的開(kāi)放閱讀框，編碼225個(gè)氨基酸，SfLIP蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)表明其含有6個(gè)跨膜區(qū)域并且含有2個(gè)NPA水通道特征性單元，但其中第二NPA被NPM取代；基因結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)SfLIP基因含有5個(gè)內(nèi)含子，與長(zhǎng)囊水云的同源性很高；SfLIP基因在淡水浸泡過(guò)程中的表達(dá)先升后降，但隨著
2、時(shí)間延長(zhǎng)則又顯著上升。上述結(jié)果表明，SfLIP屬于藻類中發(fā)現(xiàn)的一類新的水通道蛋白，其在羊棲菜耐受低滲脅迫中可能有種特殊的作用機(jī)制?！ ￡P(guān)鍵詞羊棲菜；水通道蛋白；基因克隆；淡水脅迫；基因表達(dá) 中圖分類號(hào)Q943.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1007-5739（2016）11-0228-04 AbstractDuetothestrongresistantabilitytohypotonicstressofSargassumfusiforme，farmersusefreshwaterimmersionmethodtoremoveNereisandotherharmfulorg
3、anismswithoutadverseeffectsonseedlings，wheretheuniqueaquaporinsinalgaemayplayimportantroles.Bycloning，thecodingsequenceofSfLIPwasobtainedfrom12Sargassumfusiforme，whichcontained678bpopenreadingframe，coding225aminoacids.SfLIPproteindomainpredictionshowedthatitcontained6transmembraneregion
4、and2NPAmotifs，however，wherethesecondonewasreplacedbyNPM.GenestructureanalysisfoundthatSfLIPgenecontained5introns，whichshowedhighsequencehomologytoEctocarpussiliculosus.Underfreshwaterimmersion，SfLIPgenewasfirstincreasedandthendecreased，however，astheprolongationoftime，whichwasremarkablyi
5、ncreased.TheresultsindicatedthatSfLIPbelongstouniquekindofaquaporinsfoundedinalgae，whichmayhaveaspecialmechanisminthetoleranceofS.fusiformetofresh-waterimmersion. KeywordsSargassumfusiforme；aquaporin；genecloning；fresh-waterstress；geneexpression 水通道蛋白（aquaporins，AQPs）是細(xì)胞膜上選擇性高效轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的特異
6、蛋白通道，屬主要內(nèi)在蛋白（majorintrinsicproteins，MIPs）家族成員，除水分子外，AQPs還能轉(zhuǎn)運(yùn)甘油、硼酸、二氧化碳、尿素和過(guò)氧化氫等多種小分子。高等植物中存在大量AQPs基因，如擬南芥（Arabidopsisthaliana，35個(gè)）[1]、水稻（Oryzasativa，34個(gè)）[2-3]、玉米（Zeamays，35個(gè)）[4]，根據(jù)亞細(xì)胞定位和轉(zhuǎn)運(yùn)能力的不同，主要分為PIP（plasmamembraneintrinsicprotein）、TIP（tonoplastintrinsicprotein）、NIP（nodulin-26likeintr
7、insicprotein）、SIP（smallintrinsicproteins）和XIP（Xintrinsic12proteins）等6類[5]。目前的研究較少關(guān)注低等植物――藻類的AQPs，它們的數(shù)量明顯少于高等植物，如長(zhǎng)囊水云（Ectocarpussiliculosus，3個(gè)）、三角褐指藻（Phaedactylumtricornutum，5個(gè)）、假微型海鏈藻（Thalass-iosirapseudonana，2個(gè)）等[6]。對(duì)高等植物而言，組織、器官高度分化，不同的膜、組織，甚至不同的外界條件及脅迫時(shí)間，都可能需要有不同的AQPs，因此目前高等
