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1、學校代碼：10270分類號：Q945學號：112200878上夠腳范大誓碩士學位論文論文題目水蕨centrin基因的克隆表達與分析學院生命與環(huán)境科學學院專業(yè)植物學研究方向分子生物學研究生姓名秦召遠指導教師曹建國教授完成日期2014年4月碩士學位論文水蕨centrin基因的克隆表達與分析上海師范大學生命與環(huán)境科學學院二零一四年四月MasterDissertationCloning，ExI"gandCharacterizationoflonlngExpressinganaracterlz，CentrininCeratopteristhalictroidesC
2、ollegeofLifeandEnvironmentSciences，ShanghaiNormalUniversityApril2014論文題目：水蕨centrin基因的克隆表達與分析學科專業(yè)：植物學學位申請人：秦召遠指導教師：曹建國摘要中心蛋白(centrin)是EF．hand鈣結(jié)合蛋白，是鈣調(diào)蛋白超家族中的一員。它含有4個EF-hand結(jié)構(gòu)基元，每個結(jié)構(gòu)基元能結(jié)合一個鈣離子，是很多生物體(如藻類、酵母、原生動物、高等植物、哺乳動物等)的微管組織中心(中心體、基體或紡錘極體)的重要組成部分。中心蛋白在細胞的正常分裂以及包含中心蛋白的纖維系統(tǒng)收縮中起重要
3、作用。蕨類植物精子發(fā)生是生毛體、基體、鞭毛等運動細胞器重新發(fā)生和組織的過程，中心蛋白(centrin)是否參與蕨類運動細胞器發(fā)生尚不清楚。本實驗采用蕨類模式植物水蕨作為實驗材料，克隆了其centrin基因的完整序列，構(gòu)建其原核表達載體，并在大腸桿菌中有效表達，為后續(xù)研究centrin基因在蕨類精子運動細胞器發(fā)生中的作用具有重要的意義。選用水蕨(Ceratopteristhalictroides(L．)Brongn)作為實驗材料，以配子體中提取的RNA為模板，應用RACE(Rapid-amplificationofcDNAends)技術(shù)成功克隆出水蕨中ce
4、ntrin全長cDNA序列。通過生物信息學分析表明：該基因全長為1077bp，完整開放讀碼框(ORF)的長度為512bp，編碼127個氨基酸。把測序得到的序列進行Blast序列比對發(fā)現(xiàn)本實驗所獲得的centrin基因序列與與其他物種的該基因序列具有較高的同源性。應用Clustalx和MEGA5軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，并進行了同源性分析。結(jié)果顯示，水蕨centrin基因與蘋、小立碗蘚、雙鞭毛水藻聚為一類，表明它們相近的演化關(guān)系。將該centrin目的片段與pET-32a載體連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21，之后用lmM的IPTG誘導6h，表達形成一個大小60KD的
5、蛋白，與預計大小符合，用購買的人centrin蛋白抗體與得到的重組蛋白進行westernbolt鑒定，雜交條帶明顯，表明克隆到的centrin基因是水蕨編碼的基因，它編碼的蛋白在水蕨雄配子體內(nèi)特意表達，對水蕨精子的發(fā)生具有重要的作用。本研究為闡明蕨類植物精子發(fā)生的分子機制奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞iCentrin，水蕨，RACEThesistopic：Cloning，ExpressingandCharacterizationofCentrininCeratopteristhalictroidesProfessionaldisciplines：BotanyDegr
6、eeapplicant：QinZhaoyuanInstruction：CaoJianguoAbstractCentrin(caltractin)isamemberofthecalmodulin(CaM)superfamilyofEF．handcalcium-bindingproteins．Theseproteinscontainfourhelix—loop。helixdomains，theSO．calledEF．hands，whichmayeachbindoneCa+．Itisanessentialcomponentofcentrosomalstruct
7、ures(basalbodyorspindlepolebody)inawiderangeoforganisms，rangingfromalgalandyeastandprotozoatohigherplantsandhumans．Centrinisrequiredforpropercelldivision，andplaysimportantrolesincontractionofcentrin．basedfibersystemsineukaryoticcellsaswell．Duringspermatogenesisinferns，organelless
8、uchasblepharoplast，basalbody,flagella，ar
