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《體外誘導(dǎo)脂肪來源干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的相關(guān)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，不包含本人或他人已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：日期：保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)聲明本人完全了解第四軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬第四軍醫(yī)大學(xué)。本人保證
2、畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位仍然為第四軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容（含電子版，保密內(nèi)容除外），可以采用影印，縮印或其他復(fù)制手段保存論文。學(xué)校有權(quán)允許論文被查閱和借閱，并在校園網(wǎng)上提供論文內(nèi)容的瀏覽和下載服務(wù)。論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文體外誘導(dǎo)脂肪來源干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的相關(guān)研究碩士研究生：彭華志導(dǎo)師：胡蘊(yùn)玉教授第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科，西安710032中文摘要骨缺損的修復(fù)一直是矯形外科的難題。利用自體骨、異體骨、異種骨、帶血管游離植骨進(jìn)行修復(fù)都存在這樣或那樣的問題。上世紀(jì)80年代開
3、始，骨缺損的修復(fù)進(jìn)入了組織工程修復(fù)研究的時(shí)代。支架材料、生長因子、種子細(xì)胞是組織工程的三要素，隨著制造技術(shù)的進(jìn)步，支架材料的研究已取得突飛猛進(jìn)的進(jìn)展，已有人工骨應(yīng)用于臨床。種子細(xì)胞是組織工程骨構(gòu)建和應(yīng)用研究中的重要環(huán)節(jié)和基本要素，同時(shí)也是保證骨組織工程學(xué)持續(xù)性深入研究的前提，如何獲取數(shù)量充足、功能良好的種子細(xì)胞是目前制約組織工程發(fā)展的瓶頸之一。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（bonemarrowstemcells，[1]BMSCs）作為骨組織工程種子細(xì)胞已經(jīng)廣泛應(yīng)用，但是在臨床研究中發(fā)現(xiàn)自骨髓取材獲取細(xì)胞數(shù)量有限，不能滿足需要，且大[2]量抽取骨髓會(huì)增加機(jī)體創(chuàng)
4、傷，有一定的并發(fā)癥。脂肪來源干細(xì)胞（adipose-derivedstemcells，ADSCs）是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)ADSCs細(xì)胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低，同時(shí)它具有-2-第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文取材容易、少量組織即可獲取大量干細(xì)胞，適宜大規(guī)模培養(yǎng)，對(duì)機(jī)體損傷小等優(yōu)點(diǎn)，而且其來源廣泛，體內(nèi)儲(chǔ)備量大，適宜自體移植，逐漸成為近年來新的研究熱點(diǎn)之一。構(gòu)建組織工程骨通常首先要對(duì)種子細(xì)胞向成骨細(xì)胞進(jìn)行礦化誘導(dǎo)，使其成為具有活性的組織工程細(xì)胞，因此，探索ADSCs的最佳礦化條件，使其在最短的時(shí)間內(nèi)成為具
5、有活性的成骨細(xì)胞是一個(gè)非常有實(shí)際意義的課題。本研究通過在不同誘導(dǎo)條件下使ADSCs向成骨細(xì)胞分化，初步摸索其最佳礦化條件，為骨組織工程提供種子細(xì)胞。1rhBMP-2誘導(dǎo)脂肪來源干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的量效作用探討體外條件下rhBMP-2誘導(dǎo)脂肪來源干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化和增殖的情況，并觀察其量效關(guān)系。從成年兔頸后部獲取脂肪組織，采用酶消化法分離并培養(yǎng)脂肪來源干細(xì)胞；穩(wěn)定傳代后，用不同濃度rhBMP-2對(duì)ADSCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化，采用堿性磷酸酶染色及I型膠原免疫組化染色進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定，采用堿性磷酸酶活性測定及MTT方法進(jìn)行分化和增殖活性比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)
6、，rhBMP-2誘導(dǎo)ADSCs后堿性磷酸酶及I型膠原免疫組織化學(xué)染色為陽性；當(dāng)rhBMP-2在100－400ng/ml時(shí)，各組堿性磷酸酶活性提高明顯（P<0.05），在400ng/ml以上各組則無明顯差別（P>0.05）；當(dāng)rhBMP-2在800ng/ml以下時(shí)，各組增殖活性無明顯差別（P>0.05），在800ng/ml以上則存在明顯的抑制作用，各組存在明顯差別（P<0.05）。研究表明，在體外條件下rhBMP-2能誘導(dǎo)脂肪來源干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化；并且rhBMP-2濃度在400－800ng/ml時(shí)，能促進(jìn)脂肪來源干細(xì)胞的增殖和分化。-3-第四
7、軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2脂肪來源干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的優(yōu)化研究探討脂肪來源干細(xì)胞在不同礦化誘導(dǎo)條件下的生物學(xué)特性，優(yōu)化最佳礦化條件。從成年兔頸后部分離并培養(yǎng)出脂肪來源干細(xì)胞，穩(wěn)定傳代后，采用普通礦化液誘導(dǎo)組、BMP誘導(dǎo)組、礦化液－BMP聯(lián)合誘導(dǎo)組體外誘導(dǎo)兔脂肪成體干細(xì)胞，以含10℅小牛血清的DMEM作為對(duì)照組，采用堿性磷酸酶染色及I型膠原免疫組化染色進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定，采用堿性磷酸酶活性測定及MTT方法進(jìn)行分化和增殖活性比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組堿性磷酸酶及I型膠原免疫組織化學(xué)染色為陽性，對(duì)照組則為陰性；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組脂肪來源干細(xì)胞的增殖均有所抑
8、制，而堿性磷酸酶活性增加，其中礦化液－BMP聯(lián)合誘導(dǎo)組產(chǎn)生的成骨細(xì)胞表型最為顯著。研究表明，在體外條件下聯(lián)合應(yīng)用礦化液和BMP能在較短時(shí)間內(nèi)有效誘導(dǎo)A
