資源描述：
《cyp1a1基因多態(tài)性與食管癌遺傳易感性的-研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、山西I科大掌碩士掌位論文依據(jù)CYPIAl3’端非編碼區(qū)是否有MSPl酶切位點(diǎn)【4】，人群呈現(xiàn)A、B、C三種基因型。沒有MSPl酶切割位點(diǎn)的等位基因m，的純合子(ml／m1)為A基因型；有MSPl酶切割位點(diǎn)的等位基因的純合子(m加：)為C基因型；以及由m，和m2形成的雜合子(m，／m2)的B基因型。三種基因型在不同人群中的分布表現(xiàn)出較大的差異，研究表明，C基因型是易感基因型【5】。在CYPIAl第7外顯子heme-bmding區(qū)域發(fā)生A—G轉(zhuǎn)換時(shí)，人群中也呈現(xiàn)三種不同基因型：A型(1l朝le)、B型(Uemm)、C型(VaVV甜)[6J，其中C型活化多環(huán)芳烴(PA
2、n)能力最強(qiáng)，B型次之，A型最弱。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，細(xì)胞色素P4501A1可在鼠食管癌表達(dá)。長治地處太行山區(qū)，食管癌死亡率高達(dá)80～／10萬，因此對該地區(qū)人群進(jìn)行Exon7、MSPl基因的分子流行病學(xué)研究，并結(jié)合環(huán)境因素進(jìn)行分析，將有利于揭示食管癌發(fā)生的病因，提示對腫瘤易感者預(yù)測的水平。材料與方法l、研究對象：73例食管癌病例來自長治和平醫(yī)院和和濟(jì)醫(yī)院。病例由組織病理學(xué)、內(nèi)窺鏡檢查確診的2001年8月--2001年12月病人組成，并且要求無任何其它部位腫瘤，未經(jīng)放療和化療。75例對照來自同期同醫(yī)院的非腫瘤患者，如心血管疾病、外傷、支氣管炎患者等，兩組均為在長治地區(qū)生
3、活15年以上的常住居民，年齡、性別等分布均衡。竺!苧蘭查竺一————J竺掣蘭蘭魯2、調(diào)查內(nèi)容：包括一般人口學(xué)特征及環(huán)境因素(吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣等)。3、標(biāo)本收集及DNA提取：取病例和對照外周靜脈血5ml(用ACD抗凝)，用白細(xì)胞DNA快速提取法【刀提取白細(xì)胞的DNA。加NP40破壞核膜，用酚，氯仿抽提數(shù)次，乙醇沉淀，加消毒水溶解DNA于一20"C保存。4、試劑與材料所用試劑均由上海生物工程公司提供，Biofugel5R低溫離心機(jī)由德國Hemeus公司生產(chǎn)，PTC-100PCR儀由日本MJResearch公司生產(chǎn)，TH-II型PCR儀由華美生物工程公司生產(chǎn)，YJ
4、875醫(yī)用凈化工作臺由蘇州凈化設(shè)備廠，微波爐由美的公司生產(chǎn)，DY-W1型電泳儀由北京試驗(yàn)設(shè)備廠生產(chǎn)，WD．9403E型紫外分析儀由北京六一儀器廠。5、基因分型(1)MsPl基因分型：引物：Pl：5’一CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT-3’P2：5’-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-37PCR擴(kuò)增：反應(yīng)體系為25ul，其中200pmol／l心ⅡPs、10×Buffer緩沖液2．5ul、1．5mmol／1MgCl2，基因組DNAl0---100ng、引物P1、P2各O．5l,tmol／1、酶1．5u、97℃預(yù)變性7rain、95℃50s、60℃
5、50s、72℃60s、30個(gè)循環(huán)、終延伸72℃10rain。酶切：取20
6、IlPCR反應(yīng)產(chǎn)物加入10×buffer酶切緩沖液3ul，MSPI內(nèi)切酶2lll，在37℃消化3小時(shí)。山百醫(yī)科六攀硬士學(xué)位論文電泳：酶切產(chǎn)物在1．8％瓊脂糖凝膠電泳檢測。(2)Exon7基因分型：引物：P1：5’-丸蛔ACC．I℃CCJ蜒℃咖丸虹_37P!：57-GAACTGCCACTTCAGCTGTCT-3’P1’：57-AAGACC．I℃CCAGCGGGCAAC-3’PCR擴(kuò)增：Pl與P：，P】7與P2分別組成一對引物，分別編為a管和b管，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物為183bp片段。反應(yīng)體系
7、混合物各組分濃度同前，PCR循環(huán)條件除復(fù)性為66℃50s外，其余同前。電泳：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1．8％瓊脂糖凝膠電泳檢測。6、統(tǒng)計(jì)分析在SPSSl0．0統(tǒng)計(jì)軟件下，對病例組和對照組年齡、性別進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，應(yīng)用logistic回歸對可疑危險(xiǎn)因素進(jìn)行單因素、多因素和聯(lián)合作用分析。在聯(lián)合作用分析中聯(lián)合作用指數(shù)S=(RR++--D／(RR．一一1)+O汛一+一1)，聯(lián)合作用凈增部分用病因分?jǐn)?shù)EF表示=呲一RtL一一RR一++1)／礎(chǔ)艮．[sl。結(jié)果1、MSPl的電泳結(jié)果：模本顯示一條340bp條帶為A型；顯示兩條分別200、140bp條帶為C型；顯示三條分別為340、2
8、00、140bp條帶為B型。(圖1)坐!苧蘭查竺————!!三苧!竺!竺2、Exon7的電泳結(jié)果：模本只在a泳道顯示183bp條帶為A望e[(1le／1le純合體)；只在b泳道顯示183bp條帶為C型(vavvm純合體)；在a、b泳道均顯示183bp條帶為B型(1le／Val雜合體)。(圖2、3、MSPl三種基因型在食管癌病例和對照中的分布情況表1MSPl三種基因型在食管癌病例和對照中的分布情況Xz=-8．277P=O．016OR=2．53OR95％CI為(1．27—5．02)由表1可知食管癌MSPlA、B、C三種基因型頻率分別為27．40％、41．10％、31
9、．50％，與對照組(49
