白靈菇液體發(fā)酵及其胞外多糖生物活性的研究

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1、摘要白靈菇是一種珍貴的食藥兩用真菌，其多糖具有抗腫瘤、抗衰老、改善免疫系統(tǒng)功能等功效。本文對(duì)白靈菇菌株的液體深層發(fā)酵工藝、菌絲體成分、胞外多糖提取方法、胞外多糖的分離純化、理化性質(zhì)以及生物活性進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，為白靈菇發(fā)酵產(chǎn)品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。以獲取較高菌絲生物量為目的，通過(guò)正交試驗(yàn)，確定白靈菇的最適液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：玉米粉3．O％、葡萄糖1．O％、酵母粉0．1％、黃豆粉2．O％、KH2P04O．3％、MgS04’7H200+1％、CaS040．1％。在搖瓶培養(yǎng)條件試驗(yàn)中研究pH值、裝液量、接種量、搖床轉(zhuǎn)速等因素對(duì)生物量

2、的影響。結(jié)果表明最佳的搖瓶培養(yǎng)條件為：起始pH值6．5、裝液量80ml／250ml、接種量10％、搖床轉(zhuǎn)速160rpm，發(fā)酵周期為6d。在搖瓶培養(yǎng)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行發(fā)酵罐發(fā)酵試驗(yàn)，結(jié)果表明：利用5L發(fā)酵罐，在通氣量(v／v)為1：0．5、攪拌速度為100r／min、裝液量為3L，溫度25±1℃條件下，菌絲生物量達(dá)到2．9Ig／100ml。對(duì)自靈菇液體發(fā)酵的菌絲體與子實(shí)體成分分析，結(jié)果表明：發(fā)酵菌絲體和予實(shí)體的甲醇提取物，經(jīng)紫外掃描所得的峰形大致相同，均在210nm和260nm處有較強(qiáng)的吸收峰，兩者在成分上相似。發(fā)酵菌絲體在氨基

3、酸組成上與子實(shí)體一致，且菌絲體氨基酸總量、必需氨基酸總量均明顯高于子實(shí)體。胞外多糖提取的最佳工藝路線為：將離一th,除去菌絲體的發(fā)酵液pH調(diào)至6．0，60"C下濃縮至原體積的1／2，冷卻后加入預(yù)冷的95％乙醇至終濃度75％，4"C冰箱靜置至少24h。5000rpm離心收集沉淀，沉淀經(jīng)無(wú)水乙醇、丙酮反復(fù)洗滌，得粗多糖。用sevag試劑除去蛋白，低壓真空濃縮至小體積，透析除去小分子，真空冷凍干燥，得精制多糖。然后經(jīng)DEAE-DE52和SephadexG一100層析柱，得多糖純品，其多糖含量為90。5％，氣相色譜分析表明：多糖由D．

4、半乳糖、D．葡萄糖、D．甘露糖、D．木糖、D．阿拉伯糖等組成，摩爾比為2．448：1．466：0．684：0．700：0．586。分子量為2．79×105，紅外光譜測(cè)得其為B．型吡哺糖。通過(guò)體內(nèi)和體外試驗(yàn)對(duì)白靈菇胞外多糖生物活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明：胞外多糖具有較強(qiáng)的清除自由基能力，抑制·OH所致小鼠肝組織MDA生成和肝線粒體腫脹，在濃度為lmg／rnl時(shí)就達(dá)到極顯著的水平(P

5、在體內(nèi)和體外都具有較強(qiáng)的生物活性。關(guān)鍵詞：白靈菇液體發(fā)酵菌絲體胞外多糖分離純化生物活性StudiesonliquidfermentationofPleurotusnebrodensisandbioactivitiesofexopolysaccharidesAbstractPleurotusnebrodensisisakindofedibleandmedicalfungus．PolysaccharidesfromPleurotusnebrodensispossessawidevineryofphysiologicalactivi

6、ties，suchasantintmour,anti-aging，immunomodulating，etc．Inthispaper,astudywascarriedoutonthesubmergedfermentationprocess，activesubstancesofmyeeliaofPleurotusnebrodensis，extractionandpurificationofexopolysaccharides，andphysicalandchemicalpropeaiesofexopolysaccharidesfr

7、omPleurotusnebrodensis．Thebiologicalactivitiesofexopolysaccharideswerealsostudied．Byorthogonaltest，theoptimummediumcompositionhadbeenobtained．ItWasasfollows：glucose1．0％，cornpowder3．O％，yeastextract0．1％，soybeanpowder2．O％，KH2P040．3％，MgS04·7H200．1％，CaS040．1％．Alsotheeffe

8、ctsofpH，mediumcapacity，inoculationquantity，shakingfrequencyonthemyceliagrowthwerestudied．Theoptimumshakingcultureconditionwasasfollows：ini