分離純化、結(jié)構(gòu)與抗氧化活性的研究

分離純化、結(jié)構(gòu)與抗氧化活性的研究

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1、福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文余甘多糖分離純化、結(jié)構(gòu)與抗氧化活性研究中文摘要摘要余甘(PhyllanthusemblicaL.)是大戟科葉下珠屬植物,是世界衛(wèi)生組織指定在世界范圍內(nèi)推廣種植的3種保健植物之一,2002年被我國衛(wèi)生部確定為藥食兩用植物,是我國的傳統(tǒng)民族用藥。余甘多糖是余甘的主要活性成分,具有抗腫瘤和抗氧化生物活性。目前對余甘多糖的研究主要側(cè)重于精多糖藥理活性探索,對其活性級分及結(jié)構(gòu)研究較少,且不夠深入。本文以余甘主栽品種“粉甘”果實為研究對象,對余甘多糖的提取技術(shù)、分離純化方法、結(jié)構(gòu)信息以及多糖抗氧化活性進行了系統(tǒng)研究,研究結(jié)果如下:從余甘中提取出粗多糖,其糖

2、含量為31.13%;粗多糖經(jīng)凍融分級、脫色素、除蛋白、透析和凝膠柱層析等初步分級純化后,得白色絲狀余甘精制多糖EPS,多糖收率10.33%;EPS的化學(xué)組成為:中性糖61.67%,糖醛酸26.04%,蛋白質(zhì)1.98%,中性糖由Gal、Rha、Ara、Glc、Xyl和少量Man組成,糖醛酸為GalA。研究了余甘多糖的超聲波強化提取和微波輔助萃取工藝。超聲波提取最佳工藝參數(shù):超聲波提取溫度80℃、超聲波時間70min、超聲波功率475W、料液比1:20;微波前處理-熱水浸提法最佳工藝參數(shù):微波前處理功率480W,微波處理時間60s,熱水浸提溫度90℃,浸提時間4h。對水提

3、余甘精多糖的分級純化方法和化學(xué)組成進行了研究。EPS經(jīng)DEAE-SepharoseCL-6B柱層析分級后得到2個多糖級分EPS1和EPS2;EPS1為中性多糖,經(jīng)HPGFC分級后得到2個多糖級分EPS1-1和EPS1-2;EPS2為分子量均一的酸性多糖,;EPS1-1、EPS1-2和EPS2分別占總洗脫量的3.39%、19.60%和77.01%,總回收率92.32%。EPS1-1是一種中性多糖,相對分子質(zhì)量約為123KDa,純度98.53%,總糖95.09%,主要由Gal、Glc組成;EPS1-2總糖含量96.66%,純度98.91%,分子量約為15KDa,是一種中性

4、多糖,主要由Gal、Glc和Xyl組成;IR光譜顯示EPS1-1和EPS1-2是β構(gòu)型的吡喃醛糖。EPS2是一種酸性多糖,含有79.01%的半乳糖醛酸,總糖含量97.53%,相對分子質(zhì)量約為140KDa,純度98.96%,主要由GalA、Gal和Rha組成,還有少量的Ara;單糖組成結(jié)合IR圖譜確定EPS2是一種果膠多糖,多糖分子以α-糖苷鍵為主,并含有一定量的β-糖苷鍵。III福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文余甘多糖分離純化、結(jié)構(gòu)與抗氧化活性研究中文摘要應(yīng)用NMR、GC-MS、FT-IR、GC、HPLC等儀器分析技術(shù),配合部分酸水解、甲基化分析等經(jīng)典化學(xué)方法研究了余甘多糖E

5、PS1-2和EPS2的化學(xué)結(jié)構(gòu)。EPS1-2的結(jié)構(gòu)特征為:糖殘基構(gòu)型主要是1,4-,1,6-β-D-Galp、T-,1,4-,1,3,6-β-D-Glcp以及1,3,6-,1,2-β-D-Manp;主鏈由Galp和Glcp連接形成半乳葡聚糖,(1→)-β-D-Glcp為主鏈的非還原性末端殘基,主鏈每五個糖殘基中有一個分支;由1,6-β-D-Glcp通過O-3位與1,3,6-,1,2-β-D-Manp等中性糖側(cè)鏈相連;Manp殘基處于支鏈位置,1,3,6-Manp處于支鏈的核心區(qū)域。EPS1-2主要由β-構(gòu)型構(gòu)成,含有少量α-構(gòu)型。部分糖殘基被乙?;〈?。EPS1-2重

6、復(fù)結(jié)構(gòu)單位可能為:→4)-β-D-Galp-(1→4)-β-D-Galp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→4)-β-D-Glcp-(1→4↑1β-D-Manp2↑1α-D-GlcpEPS2一種典型的果膠多糖,主鏈由1,4-D-GalpA線性連接形成半乳糖醛酸聚糖,由1,4-D-GalpA通過O-4位與1,2-、1,2,4-L-Rhap的O-1位交替連接形成含有較多分支的鼠李糖半乳糖醛酸聚糖。半乳糖醛酸聚糖鏈部分羧基被甲酯化,部分O-2或O-3位被乙?;〈-、1,6-、1,3,6-α-Galp和T-、1,5-α-Araf聚合形成的阿拉伯半乳聚糖以及半乳聚糖是E

7、PS2側(cè)鏈的主要組成,通過Rhap殘基的O-4位與主鏈相連。T-α-GalpA、T-α-L-Araf和T-β-Galp位于非還原性末端。EPS2可能的一種分子結(jié)構(gòu)為:→2)-α-L-Rhap-(1→[4)-α-D-GalpA-(1]n→2)-α-L-Rhap-(1→4)-α-D-GalpA-(1→2)-α-L-Rhap-(1→4)-α-D-GalpA-(1→44↑↑11β-D-Galpα-L-Araf65↑↑11α-D-GalpA-(1→3)-β-D-Galpβ-D-Galp6↑1β-D-GalpIV福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文余甘多糖分離純化、結(jié)構(gòu)與抗

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