白蠟蟲(chóng)多糖分離純化與抗氧化、免疫活性研究

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1、中國(guó)肄耋斜學(xué)斫憲院學(xué)位論文學(xué)位論文作者指導(dǎo)老師姓名申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別專業(yè)名稱研究方向論文答辯日期何釗馮穎研究員博士森林保護(hù)學(xué)藥用昆蟲(chóng)與昆蟲(chóng)生化2014年6月@中國(guó)·北京DissertationfortheDegreeAntioxidantandImmunomodulatoryActivitiesof．．PolysaccharideIsolatedfromWhit——eWa——xS——————c————a—．．——l———e———．．—Candidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExaminati

2、on：Degree-Conferring-Institution：HeZhaoProf．FengYingDoctorForestProtectionJune，2014ChineseAcademyofForestry獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得本研究生培養(yǎng)單位或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：f彳弘日期：加f許‘月J

3、6日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名：d睜cF年‘月吐6日導(dǎo)師簽名：瑪勿．矽7中年占月影日學(xué)位論文作者畢業(yè)聯(lián)系方式工作單位：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲(chóng)研究所聯(lián)系電話：0871．63861234電子郵件：he吐ao@163．corn通訊地址、郵

4、編：云南省昆明市白龍寺中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲(chóng)研究所，650224摘要白蠟蟲(chóng)(EriceruspelaChavanncss)屬同翅目(Homoptera)蠟蚧科(Coccidale)，是中國(guó)傳統(tǒng)資源昆蟲(chóng)，雄蟲(chóng)分泌的白蠟廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)。在傳統(tǒng)白蠟生產(chǎn)中，雄蟲(chóng)生產(chǎn)白蠟，大量懷卵的雌蟲(chóng)除用于繁殖后代外，未得到充分利用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)白蠟蟲(chóng)雌成蟲(chóng)含有豐富的蛋白質(zhì)等成分，營(yíng)養(yǎng)豐富、食用安全，動(dòng)物試驗(yàn)表明具有明顯的免疫調(diào)節(jié)和抗突變功能，其中多糖類物質(zhì)可能是其功效成分之一。本文以白蠟蟲(chóng)雌成蟲(chóng)為原料，采用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)水體醇沉得到粗多糖(wps)進(jìn)行脫色、脫蛋白，對(duì)脫色后多糖(d

5、wps)進(jìn)行離子交換層析，最后通過(guò)Sephacyl$300和Superdex200兩次凝膠層析對(duì)離子交換層析的中性多糖組分進(jìn)行分離，得到兩種具有相對(duì)均一分子量的多糖組分(wlslsup、wls2sup)。對(duì)兩種純化多糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)白蠟蟲(chóng)粗多糖及純化多糖進(jìn)行體外抗氧化、巨噬細(xì)胞免疫增強(qiáng)及小鼠體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了研究，表明白蠟蟲(chóng)多糖具有抗氧化及免疫調(diào)節(jié)功能。主要研究結(jié)果如下：(1)白蠟蟲(chóng)多糖分離純化：采用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)水提醇沉提取白蠟蟲(chóng)多糖進(jìn)行脫色，靜態(tài)吸附法篩選12種樹(shù)脂、比較不同吸附條件下樹(shù)脂的脫色率、脫蛋白率及多糖保留率，確定了NKA．9樹(shù)脂為白蠟蟲(chóng)水溶性多糖合適的脫

6、色樹(shù)脂；動(dòng)態(tài)吸附法確定脫色條件為30‘C下將1倍床層體積10mg／rrlLpH8．0的白蠟蟲(chóng)多糖溶液以1BV／h流速上樣，然后以5BV體積的去離子水洗脫，收集洗脫液濃縮干燥后得到脫色白蠟蟲(chóng)多糖，在此條件下其脫色率為71．4％、多糖收率60．O％，脫蛋白率51．9％。對(duì)脫色后的白蠟蟲(chóng)多糖進(jìn)行DEAE離子交換層析、選擇Sephacyl$300和Superdex200凝膠兩步層析，分離得到兩個(gè)白蠟蟲(chóng)純化中性多糖組分wlslsup和wls2sup。其中wlslsup、wls2sup多糖含量分別為84．3％及95．3％。(2)白蠟蟲(chóng)多糖結(jié)構(gòu)鑒定：高效凝膠色譜測(cè)定wlslsup、wls2s

7、up分子量為24．1和20．1kDa；柱前衍生．毛細(xì)管電泳測(cè)定多糖wlslsup的單糖組成為半乳糖：甘露糖：葡萄糖=10．8：10：l：wls2sup的單糖組成為半乳糖：甘露糖=1．36：1；紅外光譜及核磁共振顯示純化多糖含吡喃型甘露糖或半乳糖。wlslsup、wls2sup分別具有5和3種單糖殘基，分子內(nèi)均有a、B兩種類型糖苷鍵。(3)白蠟蟲(chóng)多糖的抗氧化活性：采用抗氧化能力指數(shù)、鐵離子還原能力、清除ABTS自由基、羥自由基及超氧陰離子能力以及對(duì)過(guò)氧化氫損傷細(xì)胞保護(hù)評(píng)價(jià)方法，對(duì)白蠟蟲(chóng)多糖組分