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《高產(chǎn)ε聚賴氨酸白色鏈霉菌的原生質(zhì)體誘變選育與發(fā)酵研究論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要高產(chǎn)￡．聚賴氨酸白色鏈霉菌的原生質(zhì)體誘變選育及發(fā)酵研究學(xué)科、專業(yè)：食品科學(xué)入學(xué)時間：2007．09．01碩士研究生姓名：程傳榮答辯時間：2009．12．09指導(dǎo)教師：陳衛(wèi)教授授予學(xué)位時間：摘要￡．聚賴氨酸(￡．poly．L．1ysine，￡．PL)是由微生物合成的一種氨基酸同型聚合物，由人體必需氨基酸L．賴氨酸的￡．氨基和另一L．賴氨酸的a．羧基形成的酰胺鍵連接而成。￡．PL具有廣譜抑菌性，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌、耐熱芽孢桿菌和一些病毒都有抑制作用，且具有水溶性好、熱穩(wěn)定性高等特點(diǎn)，是一種安全高效的天然生物防腐劑。目前￡
2、．PL被廣泛用于食品防腐保鮮、可降解生物材料以及醫(yī)學(xué)研究中。為了建立一種快速方便的￡．聚賴氨酸檢測方法，本文基于￡．聚賴氨酸與Dragendorff's試劑的沉淀復(fù)合物可與硫脲產(chǎn)生顯色反應(yīng)，提出了一種利用分光光度計快速檢測￡．聚賴氨酸的新方法。￡．聚賴氨酸含量與反應(yīng)復(fù)合物吸光度在pH2．0～5．O，反應(yīng)時間在45min以內(nèi)，具有較高的線性相關(guān)性。分光光度計測定波長為435nm。濃度在0～1．509／L范圍內(nèi)，￡．聚賴氨酸工作曲線線性相關(guān)系數(shù)為R2=O．9999，RSD=3．63％，檢出限為0．019／L。該方法相比于Itzhaki法具有
3、較高的準(zhǔn)確性。最后以該方法為依據(jù)建立了一種利用96孔板高通量快速檢測￡．聚賴氨酸的方法。對白色鏈霉菌UN2．71的原生質(zhì)體進(jìn)行了制備和再生。確定了白色鏈霉菌UN2．71原生質(zhì)體制備和再生的最優(yōu)條件，即在含甘氨酸2％的菌絲培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h，收集菌絲體經(jīng)2．0mg／mL的溶菌酶，在30℃下酶解60min，可獲得大量的原生質(zhì)體。以白色鏈霉菌UN2．71為出發(fā)菌株，進(jìn)行了原生質(zhì)體的DES誘變實(shí)驗。首先研究了不同劑量的DES對結(jié)果的影響，然后繪制了致死率曲線，確定了0．1％DES，誘變38min和0．15％DES誘變18min最適誘變劑量。挑取
4、了514株再生菌落，應(yīng)用搖試管培養(yǎng)和高通量快速測定方法初篩得到26株高產(chǎn)菌，經(jīng)過復(fù)篩最終得到了一株高產(chǎn)菌株D3．32，￡．聚賴氨酸產(chǎn)量達(dá)到1．569／L，比出發(fā)菌株提高了49．43％。經(jīng)傳代發(fā)酵試驗，該突變株遺傳性狀穩(wěn)定。采用2．3L自動發(fā)酵罐，研究了突變菌株D3．32和原始菌株的發(fā)酵特性，可以得出突變株的菌體生長能力更高，￡．聚賴氨酸合成能力更高。調(diào)控pH4．0，有利于產(chǎn)物￡．聚賴氨酸的合成。突變株D3．32經(jīng)2．3L自控發(fā)酵罐發(fā)酵，發(fā)酵過程中調(diào)控pH4．0，發(fā)酵后期補(bǔ)充葡萄糖和硫酸銨，補(bǔ)料分批發(fā)酵并調(diào)控pH，采用不斷補(bǔ)充碳源來延長發(fā)
5、酵周期，發(fā)酵體系中菌體濃度達(dá)到了31．589／L，而￡．聚賴氨酸的產(chǎn)量則達(dá)到8．069／L，比原始菌株自然發(fā)酵下提高了近5倍。最后初步研究了發(fā)酵液中￡．聚賴氨酸的抑菌活性。關(guān)鍵詞：￡．聚賴氨酸，白色鏈霉菌，生物防腐劑，原生質(zhì)體誘變，發(fā)酵AbstractProtoplastMutationBreedingofHigh￡-polylysine--producingStreptomycesalbulusandstudiesonFermentationSubjectandSpeciality：Engineering，F(xiàn)oodScienceTim
6、eofenrollment：01-09—2007Mastergraduatestudent：ChuanrongChengTimeofdefense：00·-12--2009Facultyadviser：WeiChen，ProTimeofconferringdegree：e-poly—L—lysine(e—PL)isahomo—poly—aminoacidcharacterizedbythepeptidebondbetweenthea-carboxylande-aminogroupsoftheessentialaminoacidL—lys
7、ine．Itshowsawiderangeofantimicrobialactivityagainstmostgram-positiveandgram-negativebacteria，fungiandalsosomeviruses．Inaddition，￡-PLissolubleandattractiveheatstable．Atpresent，￡-PLhasbeenusedasfoodpreservativemainly,degradablebiologicalmaterialandmedicalresearch．Inorderto
8、developanewrapidandconvenientdetectionmethod，basedonthecolorreactionofthioureaandprecipitedcomplexofe-P
