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《壞死梭桿菌保護性抗原確定與基因篩選研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、依據(jù)測出的氨基酸序列，設計簡并性引物投反向PcR引物。以簡并性引物與隨輥g
2、豹簿選、菠囊PcR簿選法、跌及囂戇基因鬻集筇選方法對抗原蒸囂進行爨選。對篩選出的序列利用NcBI和EBI中的BLAsT和clustal進行氨基酸序列的同潲性分析、序列比對及核苷酸序列拼接。通過對基閑產(chǎn)物的特性分析以及功能的預測，結(jié)臺生物學試驗結(jié)萊，穗定與其棱梭群蔻Alee4§256(gi278874l7)溶盎素其存91％同源性的基因為篩選的目的基因。關鍵讕壞死梭轷菌保護性抗原基因篩選{IseqHence(sequeneingtenaminoacids，justfirstisva
3、riant)，Cofrespondingsequence幫3sn母tf。Hnd{赴_senBank。下囊isPf毽ved￡矗a￡氌主sp∞￡einis巍novolpfo￡寄誰lnFN．Accordin囂tothesequGnceoftheaminoacids，pr{mersweredesigned．Thegeneoftheantigenwasselectedbyrandomp“merPCR，reVersePC拭andenriehingofpurpose菩毒矗e。囂。疆olo$onsanalyslsof氌e趣耀in。a￡i建se《娃enee，se黿班￡玨
4、eeco越}毫s}鑫n嬉撞econnoctionofribonucleot{desequencewerem齲kedusin鐾BLASTandClustalinNCBIand辯BI．Accordingtotheoonjectureofspecialityand“ctionofproductofgenoand￡矗尊fes娃】￡ofblo{o夸iealexp誓如氆。t￡，蠊e窯080攮拄￡h盎s9l毽ho塾oiog#玨ss棗qHe駐c搴彈i攮h(huán)e黼olysinofFusobacte姊“mATcc49256(gi27887417)isthepurposegon
5、e．Keyword：Fusobacteriumnocrophorum，proteo“veantigen十geneselectionlV第一章緒論1．1研究目的和意義壞死桿菌病是由壞死梭桿菌(Fusobacteriumnecrophorum)引起的牛、羊、鹿等家養(yǎng)動物和野生動物常見且發(fā)病率較高的一種危害嚴重的傳染病。其病原菌為壞死梭桿菌，壞死梭桿菌屬革蘭氏陰性專性厭氧多形態(tài)桿菌(長絲到短桿)，它廣泛存在于動物和人的口腔和胃腸道中，屬條件性致病菌。壞死桿菌病臨床上多呈慢性經(jīng)過，最終造成病畜嚴重消瘦、失去生產(chǎn)性能甚至死亡。懷畢付畜的陰道和于宦感染壞死梭桿苗時
6、，可導致流產(chǎn)。和仔卣嚴重發(fā)病。壞死灶常局限于肢蹄部，嚴重病例可感染唇部、面部、消化道、生殖道以及肝、肺等內(nèi)臟器官。引起肝臟、肺臟的壞死。壞死灶內(nèi)常端有代酣物和其它細菌”?，其中一些細菌可能是由于降低了壞死梭桿菌的最小盛染量而在最初的感染中起一定作用”?。壞北梭桿菌是多種壞死病(如動物的肝膿腫、腐蹄病、壞死性喉炎m446"61和人的Lemierre’s綜臺癥‘32421等)的主要或次要病原曲。尤其是胃肝膿腫綜合癥在動物飼養(yǎng)中危害最為嚴重[6?。壞死桿菌病的l臨床治療效果不佳，且復發(fā)率高，無法控制該病的發(fā)生。所以，利用有效的抗壞死梭桿崩疫苗來擰制養(yǎng)殖場、動
7、物園及野生動物保護區(qū)的壞死病具有重耍意義。國內(nèi)外研究人員直致力r該疫卣的研究，但進展緩慢，主要原因是壞歲匕梭桿菌免疫作用弱，無法產(chǎn)生保護性免疫。直到上世紀80年代末人們對壞死梭桿菌免疫研究有了新的突破，大量試驗hF明，壞死梭桿菌菌體及片代謝產(chǎn)物中存在壞死梭桿菌免疫原。俄羅斯初步研制山壞死梭桿菌疫茸，并經(jīng)小群牛試驗獲得成功¨引。本文驗通過建立壞死梭桿前小鼠感染模型，對壞死梭桿菌免疫原及保護性抗原進行篩選研究，依據(jù)保護性抗原的氨基酸序列測定和基網(wǎng)篩選研究結(jié)果，結(jié)合抗原的生物學試驗，確定壞死梭桿菌的保護性抗原性質(zhì)及其基岡結(jié)構，為壞死梭桿菌疫苗的研制及免疫機理
8、研究打下基礎。1．2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀1．2．1壞死梭桿菌免疫性及免疫作用的初始研究國內(nèi)外根多學者一直在從事壞死梭桿菌免疫性及免疫作用研究，起初一部分有治療、保護和預防的作用。這一階段實驗說明所有抗壞死梭桿菌疫苗和血清試驗，免疫作用弱，結(jié)果不理想。1．2．2壞死梭桿菌免疫原篩選研究一個多世紀以來，壞死梭桿菌作為動物和人的病原體被人們所認識”?。上世紀80年代末人們對壞死梭桿菌免疫研究有了突破性進展，大量試驗證明，壞死梭桿菌菌體及其代謝產(chǎn)物中存在壞死梭桿菌免疫原。c18k等“”利用完整細胞培養(yǎng)物“”1、細胞質(zhì)”?3“、外膜蛋白和培養(yǎng)物上清液”“誘導的壞死梭桿
9、菌保護性免疫實驗大部分取得了成功。但除培養(yǎng)物上清液中的主要免疫原被篩選出來(證明是白細胞毒索)
