rna干擾沉默hif1α對人乳腺癌細胞功能的影響

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1、中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士研究生論文HIF一1aVEGFAra—cMCF一7RT—PCR常見英文縮寫缺氧誘導因子一1Ⅱ短發(fā)夾RNA雙鏈RNA小干擾RNA轉(zhuǎn)錄后基因沉默RNA誘導的沉默復合體RNA依賴的RNA聚合酶dsRNA依賴的蛋白激酶RNA酶L非編碼區(qū)siRNA表達框架氯化鈷實時定量PCR血管內(nèi)皮生長因子阿糖胞苷人乳腺癌細胞系逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應撇MmscP艙sLRGSRARC獻艘婭m吣腓嗽眥m鋤眥中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士研究生論文RNA干擾胎牛血清磷酸鹽緩沖液DNA標準分子量Marker焦碳酸二乙酯缺氧反應元件促紅細胞生成素脯氨酸羥化酶氧依賴性降解結(jié)構(gòu)域促葡萄糖轉(zhuǎn)移子一l醛縮酶A

2、烯醇化酶1誘導型一氧化氮合酶多藥耐藥基因一1叔一丁基過氧化氫鼠胚胎纖維原細胞過氧化酶增殖體激活受體胚胎干細胞，bc卜A●01盼風ASrPEODUDOR酬F舶M麟

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4、室啪嘞咖馴枷啪m燃Ⅷ唧眥盼!里墊塑墨盟丕堂塑主翌墨蘭絲塞RNA干擾沉默HIF．1Q對人乳腺癌細胞功能的影響中文摘要研究背景缺氧誘導因子一t(hypoxia_induciblefactor一1，HIF—1)是缺氧條件下產(chǎn)生的一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，其誘導表達的基因與能量代謝、細胞周期阻滯、細胞生存與增殖、血管新生、血管舒縮、紅細胞生成、腫瘤生長，轉(zhuǎn)移以及腫瘤多藥耐藥等相關。多數(shù)腫瘤具有缺氧的微環(huán)境，在腫瘤形成過程

5、中一個關鍵的步驟是對缺氧的適應，HIF一1就在這個過程中發(fā)揮了重要的作用。HIF—l廣泛存在于動物及人體的多種腫瘤細胞中，其活性對維持腫瘤細胞的能量代謝，血管新生，促進腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移起到重要作用，因此成為腫瘤治療的重要靶點。新近發(fā)展起來的RNA干擾技術能夠高效特異地沉默靶基因的表達，成為基因治療的重要工具。目的研究靶向針對缺氧誘導因子1a(HIFln)的短發(fā)夾RNA(shRNA)對人乳腺癌細胞系McF一7細胞功能的影響。方法通過在細胞培養(yǎng)中加入150umol／L氯化鈷(cocl。)模擬低氧環(huán)境。采用RNA干擾技術，構(gòu)建靶向針對HI卜lo的shRNA真核表達載體，利用脂質(zhì)體1

6、ipofactamine2000將shRNA真核表達載體轉(zhuǎn)染入Mc卜7細胞中，經(jīng)G418(400Hg／m1)篩選得到抗性克隆。McF-7細胞經(jīng)150um01／L的cocl。處理24小時后，通過Rea卜timePcR和westernblot分別檢測HIF一1Ⅱ的mRN^和蛋白水平的變化。AnnexinV／PI熒光標記檢測細胞經(jīng)150pmol／L的Cocl，處理24小時后姬F一7細胞凋亡的熒光標記檢測細胞經(jīng)150pm01／L的cocl：處理24，J、時后姬F一7細胞凋亡的中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士研究生論文變化。同樣通過Rea卜timePCR和westernblot分別檢測轉(zhuǎn)染shR

7、NA后Mc卜7細胞中HIF-1QⅡ刪A水平和蛋白水平的變化。30ug／mlAra—c作為凋亡誘導劑，AnnexinV／PI熒光標記和DNAladder分別檢測Ara—c作用48小時后，同時加入150um01／L的cocl：，干擾組、對照組和未轉(zhuǎn)染組細胞凋亡的區(qū)別。用sub—G1測定未加任何凋亡誘導劑，只加入150ll硼01／L的coCl：后，干擾組、對照組和未轉(zhuǎn)染組細胞凋亡的區(qū)別。RT—PCR檢測RNA干擾HIF-lⅡ后，McF一7中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的變化。流式細胞儀檢測RNA干擾HIF—lQ后，McF一7細胞周期的變化。結(jié)果缺氧后，MCF-7細胞中的HIF

8、—la表達增加，而凋亡率較常氧降低。shRNA轉(zhuǎn)染MCF-7細胞后，HIF—lⅡ的表達下調(diào)91．63％(p

9、因子一1Q；短發(fā)夾RNA：人乳腺癌細胞系：細胞凋亡；血管內(nèi)皮生長因子：細胞周期中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士研究生論文EffectofSilencingHIF—l旺byRNAInterferenceonHumanBreastCarcinomaCellLineAbstractBackgroundH工F一1(hypoxia—induciblefactor一1)isanimportantoxygen—dependenttranscriptionalfactor．HIF一1contr01stheexpressionofavariet