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1、·l54·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Feb；49(2)RNA干擾沉默HOXA2基因表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞株行為的影響胡曉瑁，王一成，歐伶摘要目的研究同源異型盒A2(HOXA2)基因?qū)Ω伟┘?xì)在生物發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其異常表達(dá)參與胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期及凋亡的影響，探討其作為潛在肝癌治療人類多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后I4。HOX靶點(diǎn)的可行性。方法采取實(shí)時(shí)定量PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR檢基因分為HOXA、HOXB、HOXC和HOXD四簇，測(cè)HOXA2基因的表達(dá)情況；s
2、iRNA干擾HOXA2基因在肝癌各簇分別定位于不同染色體的特定區(qū)域，其中HOX細(xì)胞株P(guān)LC／PRF／5、MHCC一97L中表達(dá)，通過(guò)CCK一8評(píng)價(jià)肝A定位于7p15．3。該基因表達(dá)蛋白具有DNA細(xì)胞肝癌細(xì)胞株增殖情況，采用軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)錨結(jié)合及轉(zhuǎn)錄因子活性，通過(guò)結(jié)合在DNA相應(yīng)位置并泊非依賴生長(zhǎng)情況，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡。啟動(dòng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄從而調(diào)控胚胎及成體細(xì)胞增殖、結(jié)果實(shí)時(shí)定量PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)結(jié)果顯示HOXA2基因在肝癌組織中表達(dá)上調(diào)(P<0．05)。針對(duì)HOXA2基因分化。該基因異常表
3、達(dá)會(huì)導(dǎo)致異常形態(tài)結(jié)構(gòu)的形設(shè)計(jì)合成siRNAs能夠特異性沉默HOXA2基因在肝癌細(xì)胞成，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化為腫瘤。該文通過(guò)株P(guān)LC／PRF／5、MHCC一97L中的表達(dá)，在干擾了HOXA2基因?qū)OXA2基因在肝癌中功能研究，為進(jìn)一步研究表達(dá)后肝癌細(xì)胞株的軟瓊脂克隆形成能力和肝癌細(xì)胞增殖可能的肝癌分子標(biāo)志物或肝癌治療靶點(diǎn)提供理論依能力均受到不同程度的抑制。流式細(xì)胞結(jié)果表明，干擾據(jù)HOXA2基因表達(dá)能夠減緩細(xì)胞周期進(jìn)展，使肝癌細(xì)胞阻滯于G期，并且s期減少。AnnexinV和PI雙染色細(xì)胞凋亡1材料與方法實(shí)驗(yàn)表明，干擾
4、HOXA2基因能促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡。結(jié)論1．1標(biāo)本來(lái)源收集2006年1月～2011年11月HOXA2基因可以較顯著影響肝癌細(xì)胞增殖和凋亡。無(wú)錫市人民醫(yī)院部分住院肝癌患者手術(shù)切取病灶及關(guān)鍵詞RNA干擾；同源異型盒基因；肝癌；細(xì)胞周期；細(xì)胞周圍5cm以外的組織分別作為癌組織和相應(yīng)的癌凋亡旁組織，放入液氮中并移至一80℃冰箱保存。所獲中圖分類號(hào)Q291文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1000—1492(2014)02—0154—06取的原發(fā)性癌灶及癌旁的診斷均以病理診斷為最終依據(jù)。依據(jù)埃德曼(Edmondson)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，臨床手肝細(xì)胞
5、肝癌的發(fā)生發(fā)展多伴有逐步增加的遺傳術(shù)獲得的肝癌樣本大多數(shù)為Ⅱ一Ⅲ級(jí)。本研究所用不穩(wěn)定性，包括基因組不穩(wěn)定性和微衛(wèi)星不穩(wěn)定到的組織樣本(約1cm)均來(lái)源于患者的原發(fā)性癌性。同源異型盒基因(homeoboxgenes，HOX)，灶和癌旁組織，共63例，男52例，女11例，年齡30～75(60±8)歲。每例樣本的獲得均符合相關(guān)的倫2013—08—08接收理學(xué)規(guī)定。基金項(xiàng)目：上海市自然科學(xué)基金(編號(hào)：07ZR14082)1．2方法作者單位：。華東理工大學(xué)生物工程學(xué)院，．E海2002371．2．1組織RNA抽提首先將勻漿所用
6、器皿進(jìn)行上海南方模式生物研究中心，上海201203去除RNA酶處理，用焦碳酸二乙酯(DEPC)水浸泡作者簡(jiǎn)介：胡曉瑤，女，碩士研究生；歐伶，男，副教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E—mail：ouling數(shù)分鐘后，200c【=烘干4h；待器皿冷卻至室溫后，加@ecust．dt1cn入液氮預(yù)冷。將組織從液氮中迅速取出研磨成粉末SP600125remarkablyinhibitedtheactivationofJNK1／2andincreasedthecellgrowthinhibitoryrateandapoptosis
7、rateinMCF一7cellsinducedbyhighglucosecomparedwiththosetreatedwithhighglucoseonly．ConclusionHighglucosecanstimulatetheproliferationofMCF一7cellsinvitro．InhibitionofJNKsignalingpathwayinMCF一7cellscansignificantlyinhibitecellproliferationandpromoteapoptosis．JNKsign
8、alingpathwaymayplayanimpor—tantroleinthehighglucose·inducedproliferationofMCF-7cells．Keywordse-junN—terminalkinase(JNKl／2)；specificJNKinhibitor(SP600125)；breastcancer；cellapopto—si
