小干擾RNA靶向沉默CXCR2基因抑制肝癌細胞的增殖-論文.pdf

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1、·438·工程雜志2013年l2月第19卷第期h』旦i塑Eg：旦b叢2Q1!：!Q：論著小干擾RNA靶向沉默CXCR2基因抑制肝癌細胞的增殖謝斌輝王小農(nóng)劉鳳恩何曉謝元康周奇【摘要】目的研究CXCR2一小干擾RNA(siRNA)基因體外抑制肝癌細胞增殖的作用。方法將CXCR2．siRNA以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染肝癌細胞hepG：，24h后熒光顯微鏡觀察細胞熒光含量。采用RT—PCR及免疫印跡法分別檢測正常肝Chang細胞、未轉(zhuǎn)染肝癌hepGz細胞以及轉(zhuǎn)染CXCR2一siRNA基因后hepG2細胞在轉(zhuǎn)染24、48、72hA的CXCR2mRNA和蛋白表達水平。以未轉(zhuǎn)染的hepG2細胞為對照．CCK8

2、法檢測轉(zhuǎn)染CXCR2。siRNA的hepG2細胞在轉(zhuǎn)染24、48、72h后的增殖。以未轉(zhuǎn)染的hepG：細胞為對照，檢測轉(zhuǎn)染CXCR2一siRNA24h后hepGz細胞與Transwell小室孵育24h時的侵襲能力。結(jié)果CXCR2一siRNA轉(zhuǎn)染hepG224h后鏡下可見大量綠色熒光，轉(zhuǎn)染率為80％。hepG2細胞CXCR2mRNA和蛋白表達水平高于Chang細胞(mRNA：1．69_+0．22比0．63_+0_31，蛋白：1．93_+0．25比0．84_+0．29，均P<0．05)。轉(zhuǎn)染CXCR2．siRNA24和48h后hepG2細胞CXCR2mRNA表達量低于未轉(zhuǎn)染的hepG2細胞(

3、0．75±0．24、0．83±0．21比1．78_+0．25，均P<0．05)，72h后CXCR2一siRNA雖然仍能抑制hepG2細胞CXCR2mRNA的表達，但與未轉(zhuǎn)染的hepG2細胞相比差異并無統(tǒng)計學意義(1．35_+0．18比1．78_+0．25，P>0．05)。轉(zhuǎn)染CXCR2一siRNA24和48h后的hepG2細胞CXCR2蛋白表達低于未轉(zhuǎn)染的hepG2細胞(0．91_+0．25、1．16_+0．23比1．98_+0．31，均P0．05)。轉(zhuǎn)染CXCR2一s

4、iRNA24、48、72h后hepG2細胞mRNA和蛋白表達差異均無統(tǒng)計學意義。與未轉(zhuǎn)染的hepG2細胞相比，轉(zhuǎn)染CXCR2一siRNA24、48、72h后hepG2細胞增殖受到抑制(均P<0．05)。轉(zhuǎn)染CXCR2一siRNA的hepG2細胞對Transwell小室的侵襲能力明顯低于未轉(zhuǎn)染的hepG：細胞[(36_+5)個／高倍視野(x200)比(526_+9)個／高倍視野(×200)，P<0．05]。結(jié)論siRNA沉默CXCR2基因體外可有效抑制肝癌細胞的增殖?！娟P(guān)鍵詞】RNA，小分子干擾；受體，白細胞介素8B；肝腫瘤，實驗性；基因沉默TargetedsilencingofCXCR2

5、viasmallinterferenceRNAforinhibitionoflivercarcinomacellsproliferationXIEBin—hui，WANGXiao—nong，LIU一en，HEXiao，XIEYuan—kang，ZHOUQi．DepartmentofGeneralSurgery，TheFintAffiliatedHospital，GannanMedicalUniversity，JiangxiGanzhou341000，ChinaCorrespondingauthor：ZHOUQi，DepartmentofHepatobiliarySurgery，TheFi

6、rstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China．Emaif：hnzhouqi@163．con【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectofsiRNA—CXCR2oninvitroproliferationofhepatocellularcarcinoma．MethodsCXCR2一siRNAplasmidwastransfectedbyusingtheliposometechniqueintohepG2，thehepatocellularcarci

7、nomacells，forthedeterminationoffluorescenceunderfluorescencemicroscopeathour24．TheexpressionofCXCR2mRNAandproteinintheChangcellsderivedfromnormallivertissues．untransfectedhepG2cellsandthehepG2cellstransfectedwithsiRNA—