腦膠質(zhì)瘤術(shù)后放療靶區(qū)的ct灌注與fmri

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1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要第一部分大鼠C6腦膠質(zhì)瘤模型的建立目的采用不同的留置時(shí)間建立大鼠C6膠質(zhì)瘤模型，比較不同留置時(shí)間對(duì)于模型成功率的影響，提高腫瘤種植成功率。材料與方法模型制作：（1）細(xì)胞培養(yǎng)采用含10％小牛血清的1640培養(yǎng)液行常規(guī)培養(yǎng)，每2～3d行傳代培養(yǎng)。采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板行細(xì)胞計(jì)數(shù)，連作5次，取平均值，6收獲指數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞，加入細(xì)胞懸浮介質(zhì)，使細(xì)胞濃度為10個(gè)／μl，置于冰水浴中保存。（2）大鼠以10％水合氯醛0.4ml／100g腹腔注射，麻醉后將大鼠固定于深圳瑞沃德生命科技有限公司生產(chǎn)的立體定位儀上，10％Na2S脫去前囟附近的毛發(fā)，常規(guī)消毒，于中線處眼裂后

2、作1～1.5cm垂直切口，暴露前囟，于右側(cè)冠狀縫距中線3mm處以電鉆鉆直徑約1.0mm小骨窗。（3）從冰水浴中取出配好的細(xì)胞懸液，微量注射器固定于立體定位儀上。調(diào)整移動(dòng)架位置，使針尖位于右側(cè)冠狀縫上距中線3mm處，緩慢垂直進(jìn)針5mm(距硬膜)，后退1.0mm。36只大鼠按留置時(shí)間3min、5min、10min分為三組，注射時(shí)間5min，注射體積10微升。第一次未種植成功者再次種植。術(shù)后用骨蠟封骨窗并清創(chuàng)縫合。造模術(shù)后2周和3周分別行MRI平掃及增強(qiáng)證實(shí)模型腫瘤生長(zhǎng)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Fisher精確檢驗(yàn)。結(jié)果36只大鼠，16只第一次種植成功，20只種植失敗，改變條件再次種植，2只死于

3、麻醉意外，18只種植成功。留置時(shí)間3min組與5min組種植成功率比較，其0.01

4、灌注成像研究目的采用CT灌注成像結(jié)合VEFG檢測(cè)評(píng)價(jià)大鼠C6膠質(zhì)瘤的血流灌注及血管生成特點(diǎn)。材料與方法1.1SD大鼠30只，180～250g。雌雄不限，購(gòu)自武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，購(gòu)自中科院細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞懸浮介質(zhì)采用含1％低熔點(diǎn)瓊脂糖的無血清2倍1640。1.2C6細(xì)胞的接種將C6細(xì)胞接種于6孔板中，加入DMEM完全培養(yǎng)基，置入37℃，4％二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；C6細(xì)胞的收集：棄去上清后，用PBS洗細(xì)胞，加入胰酶消化，棄去胰酶，加入無血清DMEM培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至EP管，吹打混勻，進(jìn)行細(xì)4胞計(jì)數(shù)，取100～150×10個(gè)細(xì)胞離心，1500rpm/10min，棄上清

5、至管內(nèi)剩余培養(yǎng)基約10μL。1.3采用立體定向的方法在30只SD大鼠右側(cè)尾狀核注射C6細(xì)胞，于接種后6～8天、10～14天及16～20天分別行MX8000多層螺旋CT灌注成像，檢查后處死大鼠作病理檢查及免疫組織化學(xué)檢查VEGF表達(dá)，探討CT灌注參數(shù)值與VEGF表達(dá)的相關(guān)性。1.4模型的CT灌注成像：影像設(shè)備及方法：MSCT（MX8000多層螺旋CT），高TM壓注射器（MedradVistronCT）。30只大鼠膠質(zhì)瘤模型，隨機(jī)分為3組，分別于造模后6～8天、10～14天及16～20天分別行MX8000多層螺旋CT灌注成像。CT檢查前腹腔注射10％水合氯醛（0.3ml/100g）麻

6、醉大鼠，俯臥位用膠布固定于自制的固定架上。穿刺鼠尾靜脈，先掃描定位像，確定腫瘤的位置，選取腫瘤最大層面的4層進(jìn)行定床掃描，具體參數(shù)如下：CT灌注參數(shù)：層厚4′2.5mm，碘海醇1ml/100g，注射速率0.5ml/s，延遲時(shí)間2s，球管旋轉(zhuǎn)速率1s/圈，每次曝光間隔1s，共曝光30次，時(shí)間65s。90KV，80mAs，F(xiàn)OV10cm，CT劑量指數(shù)（CTDI）3.1mGy′30。評(píng)價(jià)大鼠腦腫瘤及腫瘤周圍水腫的（CBV、CBF）。5華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文1.5灌注圖像處理及參數(shù)計(jì)算所有灌注原始圖像經(jīng)BrainPerfusion灌注軟件處理，選取基底動(dòng)脈及頸內(nèi)動(dòng)脈作為流入動(dòng)脈，上矢狀

7、竇為流出靜脈，獲得軸位大鼠腦CBF、CBV等參數(shù)圖，并在圖中選取腫瘤最大灌注區(qū)、腫瘤周邊及對(duì)側(cè)正常腦組織等為感興趣區(qū)而獲得相應(yīng)的參數(shù)值，每個(gè)部位測(cè)量三次，求平均值。1.6大鼠膠質(zhì)瘤組織學(xué)檢查所有大鼠影像學(xué)檢查完后深度麻醉后，處死大鼠，完整取出鼠腦放入4％多聚甲醛溶液固定，采用常規(guī)HE染色及免疫組化，評(píng)價(jià)腫瘤與腫瘤鄰近的水腫區(qū)VEGF。評(píng)價(jià)CBV、CBF與VEGF之間的關(guān)系。結(jié)果（1）腫瘤中心：C6細(xì)胞接種后6～8天CBV、CBF均高于對(duì)側(cè)正常腦組織，P<0.05，差異具有顯著性意