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《重組多殺性巴氏桿菌細(xì)菌幽靈的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要摘要多殺性巴氏桿菌是幾種動物的重要病原菌，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本菌有5種不同的莢膜型和16種菌體型。引起牛和水牛出血性敗血癥的為B：2和E：2型，引起禽霍亂的為A：I和A：3型，在我國導(dǎo)致豬肺疫的菌株為B型，而國外致豬肺疫的是A型。能夠產(chǎn)生皮膚壞死毒素的A型和D型菌株是豬傳染性萎縮性鼻炎的重要病原菌之一，F(xiàn)型菌株則引起火雞不同程度的疾病。近年來，我國豬群由A型多殺性巴氏桿菌引起的豬肺炎病例逐漸增多。控制上述這些疾病的有效手段是免疫預(yù)防，但目前所有多殺性巴氏桿菌的疫苗都存在著免疫期短和保護(hù)率相對偏低的問題。同種弱毒活疫苗比
2、滅活疫苗免疫效力相對高些，這就預(yù)示著滅活疫苗在制備過程中的抗原決定族可能被物理和化學(xué)處理而破壞。通過遺傳滅活方法是保持天然抗原決定族的有效手段。為此，我們采用基因工程手段，從含有E基因的質(zhì)粒pHH43中提取E基因，并將其克隆到適合轉(zhuǎn)化野生型革蘭氏陰性菌的穿梭質(zhì)粒pPBAl100多克隆區(qū)，從而構(gòu)建新的裂解決質(zhì)粒，并以目前對養(yǎng)殖業(yè)危害較大的多殺性巴氏桿菌致病毒株為轉(zhuǎn)化對象，構(gòu)建細(xì)菌幽靈重組菌株。通過比色法、CFU和掃描電鏡等分析，了解E裂解基因表達(dá)效果。利用免疫試驗(yàn)和攻毒試驗(yàn)評價多殺性巴氏桿菌幽靈的安全性。結(jié)果如下：1．
3、經(jīng)大腸桿菌擴(kuò)繁后，帶有E基因和溫度誘導(dǎo)控制系統(tǒng)的質(zhì)粒pHH43，用限制性內(nèi)切酶EcoRI酶切鑒定，瓊脂糖電泳出現(xiàn)5條譜帶，各譜帶分子量與理論值相符，提示E．基因與控制系統(tǒng)重組成功。2．通過內(nèi)切酶SacI水解質(zhì)粒pHH43獲得2條酶切片斷，回收的E．基因盒片斷與穿梭質(zhì)粒pPBAll00雜交，構(gòu)建了E．基因表達(dá)質(zhì)粒pPBAll00．E。表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化構(gòu)建了多殺性巴氏桿菌重組菌株。內(nèi)切酶SacI對重組菌株表達(dá)質(zhì)粒酶切后，E．基因盒片段與質(zhì)粒pUCl9重組構(gòu)建了測序質(zhì)粒pUCl9．E。E．基因盒測序結(jié)果表明，測定序列中包含E基
4、因和控制系統(tǒng)ci857序列，同時表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)內(nèi)切酶酶切鑒定，證明重組菌株構(gòu)建成功。3．重組菌株誘導(dǎo)表達(dá)試驗(yàn)，經(jīng)生長曲線和掃描電鏡檢測證明E．基因能在重組菌株中表達(dá)，能形成多殺性巴氏桿菌細(xì)菌幽靈。4．重組菌株表達(dá)后，CFU檢測顯示重組菌的裂解率達(dá)到98．6％，免疫和攻毒試驗(yàn)表明，多殺性巴氏桿菌細(xì)菌幽靈可使小鼠產(chǎn)生較好的免疫保護(hù)，其保護(hù)摘要率高達(dá)100％。本研究對于改變傳統(tǒng)疫苗滅活方法、實(shí)現(xiàn)遺傳滅活新思路和研究新型疫苗以及開辟動物疫苗新途徑具有重要的理論和應(yīng)用意義。關(guān)鍵詞：噬菌體裂解基因E；多殺性巴氏桿菌；細(xì)菌幽靈；載體構(gòu)
5、建IIABSTRACTPasteurellamultocidaisanimportantpathogenofseveralanimalinfectiousdiseases．Fivedifferentcapsulartypesandsixteensomatictypesareidentifiedrecently．StrainscausinghaemorrhagicsepticemiaincattleandcarabaoareB：2andE：2．StrainscausingfowlcholeraareA：IandA：3．
6、StrainsofswineplagueappearinginourconntryarecapsulartypesBwhilthestrainsarecapsulartypesAinabroad．CapsulartypesAandBwhichcouldproducedermatonecrotictoxinsareoneofimportantpmhogensofinfectiousatrophicrhinitis．CapsulartypesFstrainscausediseaseofvaryingdegreetotur
7、keys．Oflateyears，thecaseofpneumoniabyPmultocidatypesAincreasegraduallyinourcountry．Immunoprophylaxisisefficiencymesanstocontrolabovethesediseases．However，theallvaccinesofPmultocidaexistenceaproblemrecentlythatimmunephaseisshortandProtectiveRateislowness．Theimmu
8、nogenicefficacyoflivevaccinesforsamestrainsishigherthaninactivatedvaccines．Yet，ininactivatedvaccinepreparationstheseepitopesmaybedestroyedbythephysicalandchemicalprocessingt
