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《禽多殺性巴氏桿菌ptfa基因殼聚糖納米dna疫苗的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)碩士學(xué)位論文禽多殺性巴氏桿菌PtfA基因殼聚糖納米DNA疫苗的研究StudyOnthePtfANano-ChitosanVaccineAgainstAvianPasteurellamultocida學(xué)位申請(qǐng)人：孔梁宇指導(dǎo)教師：宮強(qiáng)副教授一級(jí)學(xué)科：生物學(xué)二級(jí)學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士2016年05月萬(wàn)方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得
2、河南科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的其他學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：日期：關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解河南科技大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校擁有對(duì)所有學(xué)位論文的復(fù)制權(quán)、傳播權(quán)、匯編權(quán)及其它使用權(quán)（特殊情況需要保密的論文應(yīng)提前說(shuō)明，但在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）。需要保密的論文請(qǐng)?zhí)顚懀罕緦W(xué)位論文在年月至年月期間需要保密，解密后適用本授權(quán)書。（需要保密的學(xué)位論文無(wú)須向圖書館提供論文的電子文檔）研究生簽名：導(dǎo)師簽名：日期：萬(wàn)方數(shù)據(jù)摘要摘
3、要禽多殺性巴氏桿菌是引起食源性動(dòng)物呼吸道感染的一種重要的病原菌，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，控制禽巴氏出血癥的疫苗主要有滅活疫苗和減毒活疫苗。但這些傳統(tǒng)疫苗的保護(hù)效果并不理想。DNA疫苗制備方便、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，可在動(dòng)物體內(nèi)持續(xù)誘導(dǎo)體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答。殼聚糖是一種生物可降解性的天然多糖，可保護(hù)DNA免受核酸酶的降解，在基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方面有巨大的潛力。因此殼聚糖DNA納米疫苗成為當(dāng)前DNA疫苗的研究熱點(diǎn)。PtfA基因編碼的IV型鞭毛蛋白是禽巴氏桿菌重要的毒力因子，本試驗(yàn)以該基因?yàn)檠芯繉?duì)象，通過(guò)PCR擴(kuò)增該基因，采用BamHⅠ
4、、EcoRⅠ進(jìn)行雙酶切，并將其導(dǎo)入真核表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建并擴(kuò)增該重組質(zhì)粒，與0.02%的殼聚糖溶液混合，通過(guò)復(fù)凝聚法制備殼聚糖-PtfA納米疫苗。采用凝膠阻滯試驗(yàn)、透射電鏡觀察，確定最佳N/P比；將該疫苗免疫小鼠，間接ELISA法檢測(cè)小鼠血清抗體水平、MTT法外周血淋巴細(xì)胞增殖率、試劑盒法測(cè)定IFN-γ分泌水平及該疫苗的免疫保護(hù)率。試驗(yàn)結(jié)果表明，以N/P比為2.5制備的殼聚糖-pcDNA3.1(+)/PtfA納米顆粒，85%的顆粒呈規(guī)則的球狀，包封率高、大小均一，其粒徑在200nm左右；免疫后，殼聚糖-重組質(zhì)粒組、
5、重組質(zhì)粒組小鼠血清抗體水平、淋巴細(xì)胞增殖率含量顯著高于生理鹽水組、空載體組及其殼聚糖復(fù)合物組（p<0.01），且殼聚糖-重組質(zhì)粒組略高于重組質(zhì)粒組；這兩組IFN-γ含量分別達(dá)到了359.31ng/L、310.14ng/L，極顯著高于另外三組；攻毒后，殼聚糖-重組質(zhì)粒組的免疫保護(hù)率達(dá)到了75%，顯著高于其它四組。表明本試驗(yàn)已成功構(gòu)建出殼聚糖-pcDNA3.1(+)/PtfA納米DNA疫苗，為禽巴氏桿菌病的治療奠定了一定的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：PtfA-pcDNA3.1(+)；殼聚糖；復(fù)凝聚法；納米顆粒；免疫；保護(hù)率論文類型：應(yīng)用基礎(chǔ)
6、研究選題來(lái)源：河南省教育廳科技重點(diǎn)研究項(xiàng)目(12A180009)；河南科技大學(xué)青年科學(xué)基金項(xiàng)目(2012QN002)I萬(wàn)方數(shù)據(jù)ABSTRACTABSTRACTAvianPasteurellamultocidaisoneofthemostimportantpathogensinfood-producinganimalsinvolvedintherespiratorytractinfections,whichhasbroughtsevereeconomiclosstothebreedingindustry.Currently,
7、thevaccinesconstructedtocontrolavainpasteurellosismainlycontaininactivatedvaccinesandattenuatedvaccines.However,theprotectiveefficacyofthesetraditionalvaccinesarenotideal.DNAvaccinehasbecomeaveryattractiveapproachfortriggeringasustainablehumoralandcellularimmunere
8、sponsesinanimals.ThequalityofDNAvaccineisstableandeasytocontrol.Chitosan,anaturalpolysaccharidewithbiologicaldegradability,hasagoodprospectintermsofgene
