禽多殺性巴氏桿菌病病原分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

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1、禽多殺性巴氏桿菌病病原分離鑒定與藥敏試驗(yàn)【摘要】本文通過(guò)研究從梧州送檢的疑似多殺性巴氏桿菌病死雞的肝臟中分離出了一株細(xì)菌，根據(jù)其培養(yǎng)特性與典型的染色特征并結(jié)合生化試驗(yàn)鑒定為巴氏桿菌?！娟P(guān)鍵詞】巴氏桿菌；多殺性巴氏桿菌；病原；生化試驗(yàn)；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)1巴氏桿菌屬概述巴氏桿菌［1］屬(Pasteurella)分類地位未定的1屬，為無(wú)芽胞，不運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧，菌體兩端常染色濃重的革蘭氏染色陰性小桿菌［2］,因1880年巴斯德氏首先自病雞分離到本屬中的多殺巴氏桿菌而得名。［3］該屬已確定的種有多殺巴氏桿菌、嗜肺巴氏桿菌、溶血巴氏桿菌、尿巴氏桿菌和鴨疫巴氏桿菌等。屬中的多殺巴氏桿菌危害

2、畜、禽最嚴(yán)重，主要引起動(dòng)物發(fā)生出血性敗血癥。從發(fā)病動(dòng)物體液或組織中培養(yǎng)分離到的菌落基本有兩型：一為在過(guò)45°折光，低倍顯微鏡下，呈現(xiàn)鮮明的藍(lán)綠色而帶金光，邊緣有狹窄的紅黃色帶的Fg菌落型，相當(dāng)于血清型乙型；另一為在45°折光下,低倍顯微鏡下，菌落呈現(xiàn)橘紅色、邊緣稍帶狹窄的黃綠光的FO菌落型，相當(dāng)于血清型甲型［4］。在中國(guó)，牛、豬、驢和馬的多殺巴氏桿菌病絕大多數(shù)為Fg型菌所致，家禽流行性巴氏桿菌病都是F0型菌所致［5］。多殺巴氏桿菌菌體抗原有12個(gè)型，莢膜抗原有5個(gè)型，前者以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，后者以英文大寫字母表示，如1：A,2；A,1：B等，已知組成的菌型有16個(gè)。本菌血清型與宿

3、主的分布有一定關(guān)系，其細(xì)胞壁含有明顯的內(nèi)毒素活性，但未發(fā)現(xiàn)外毒素。本菌可引■■■起家禽霍亂的暴發(fā)性流行，牛的出血性敗血病、原發(fā)性或繼發(fā)性肺炎等，國(guó)外免疫用的菌苗以加不同佐劑的滅活菌為主，也使用禽霍亂弱毒活菌，中國(guó)已于1959年使用弱毒活苗[6]o2多殺性巴氏桿菌及其危害多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida,Pro)是一種重要的病原菌，對(duì)多種動(dòng)物和人均有致病性，可以導(dǎo)致豬肺疫、禽霍亂、牛羊兔出血性敗血癥等危害嚴(yán)重的畜禽傳染病。多殺性巴氏桿菌正常存在于多種健康動(dòng)物的肺和咽喉部黏膜，當(dāng)動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)、機(jī)體抵抗力低下時(shí)，細(xì)菌侵入體內(nèi)，大量繁殖并致病，發(fā)生內(nèi)源性傳染

4、。此菌類在同種或不同種動(dòng)物間可相互傳染，蟬和蚤被認(rèn)為是自體傳播的媒介昆蟲［7］。本病的廣泛性及其傳染性，使得它在養(yǎng)禽業(yè)中造成的危害僅次于新城疫。3生化試驗(yàn)原理各種微生物細(xì)胞所含的酶系統(tǒng)不完全相同，這決定其在代謝類型上存在差異，對(duì)糖、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力也不一致，因而其代謝產(chǎn)物也有差異，即使針對(duì)同一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝途徑和代謝產(chǎn)物也會(huì)不同。因此通過(guò)生化反應(yīng)方法，根據(jù)微生物對(duì)糖，蛋白質(zhì)等基質(zhì)的利用情況及其不同的代謝產(chǎn)物的生化特性可以作為鑒定細(xì)菌的重要依據(jù)之一。3.1糖類分解試驗(yàn)細(xì)菌分解糖的能力與該菌是否含有分解某種糖的酶密切相關(guān)，是受遺傳基因所決定的，是細(xì)菌的重要表型特征，有助于

5、鑒定細(xì)菌，含糖培養(yǎng)基中加入指示劑，若細(xì)菌分解則產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使培養(yǎng)基顏色變化，從而判斷細(xì)菌是否分解某種糖或其他碳水化合物。細(xì)菌發(fā)酵糖類可以產(chǎn)生各種酸（乳酸、乙酸等）和氣體（甲烷、氫氣、二氧化碳），酸和氣的產(chǎn)生與否可根據(jù)培養(yǎng)后試管中指示劑的顏色變化和小套管中有無(wú)氣泡判定，指示劑酸性復(fù)紅在堿性環(huán)境呈黃色，酸性環(huán)境呈紅色。3.2石蕊牛乳試驗(yàn)石蕊是一種PH指示劑，當(dāng)pH值降至4.5時(shí)酸性顯紅色,PH值接近中性時(shí)，未接種的培養(yǎng)基為紫藍(lán)色故稱紫乳。石蕊也是一種氧化還原劑，可以還原為白色，所以石蕊牛乳（紫乳）是用來(lái)測(cè)定被檢細(xì)菌幾種代謝性質(zhì)的一種鑒別培養(yǎng)基。將被檢細(xì)菌接種于紫乳，置371溫箱

6、培養(yǎng)，觀察結(jié)果。若細(xì)菌分解乳糖產(chǎn)酸，指示劑變色（石蕊為紅色，漠甲酚紫為黃色）。若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使牛乳酸凝，氣體使凝塊中有裂隙；若為紫色，表示乳糖未分解；若為藍(lán)色表示乳糖雖未發(fā)酵，但細(xì)菌分解培養(yǎng)基中所出現(xiàn)的氮源物質(zhì)而產(chǎn)堿所致；若指示劑還原則為無(wú)色，常出現(xiàn)在酸凝塊出現(xiàn)后。4研究目的和意義禽巴氏桿菌?。ㄇ莼魜y）一年四季都有散發(fā)，以春秋節(jié)較多，在我國(guó)各地均有發(fā)生，是目前危害養(yǎng)禽業(yè)的重要細(xì)菌性傳染病之一。如何正確診斷以及合理用藥治療禽巴氏桿菌病是目前廣大學(xué)者十分關(guān)注的問(wèn)題。在廣西梧州送檢的一批6月齡病雞中出現(xiàn)呼吸急促、鼻和口中流出混有泡沫的黏液、劇烈腹瀉、糞便灰黃色或灰綠色等癥狀，發(fā)病雞群產(chǎn)

7、蛋量下降30%左右，剖檢病雞可見鼻腔內(nèi)有黏液，胸腔、腹腔、氣囊上有干枯樣滲出物，肝腫大、質(zhì)脆、呈棕黃色、表面有許多小米粒大小的灰白色壞死點(diǎn)，心冠脂肪有很多出血點(diǎn)，心包內(nèi)積有淡黃色液體，我們懷疑雞群患有雞霍亂，但用增效磺胺治療效果不理想，于是我們進(jìn)行了病原的分離鑒定，涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)典型兩極著色的巴氏桿菌，繼而結(jié)合生化試驗(yàn)結(jié)果對(duì)其進(jìn)行鑒定；由于不同的多殺性巴氏桿菌菌株對(duì)藥物的敏感性不同，有時(shí)甚至出現(xiàn)耐藥性，特別是在長(zhǎng)期使用相同的藥物的情況下，因此進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以了解該菌對(duì)各種抗生素的敏感程度。高度