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《釀酒酵母蛋白prp20p以與人源鋅指蛋白desr1的結(jié)構(gòu)的研究功能的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationfordoctor，SdegreeAuthor’sName：’FangmingWuspeciality：Biochemist叮andMolecularBiologySupervisor：Prof．YunyuShiProf．JihuiWhFinishedtime：Nov16lh，2010一de呵～?CR～‘L¨y、>
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7、論文原創(chuàng)性和授權(quán)使用聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明。本人授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)按有關(guān)規(guī)定向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后也遵守此規(guī)定。作者簽名：二吼矽fp年}y月呂日“銎％霄摘要在此論文中我們分別用X射線晶體
8、學(xué)(X．raycrystallography)和核磁共振波譜學(xué)(NMRspectroscopy)的方法解析了釀酒酵母蛋白Prp20p的13-propeller結(jié)構(gòu)域(13-propellerdomain)以及人源鋅指蛋白DESRl的三維結(jié)構(gòu)。本論文將分三個(gè)章節(jié)來(lái)闡述。第一章先介紹一下Prp20p所參與的核質(zhì)輸運(yùn)這一重要的細(xì)胞生理過(guò)程的背景綜述。在真核細(xì)胞中，核質(zhì)的不同物質(zhì)組成是由具有選擇性和方向性的大分子的跨膜運(yùn)輸所維持的。核蛋白經(jīng)由一類稱為輸入蛋白(importins)的核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋自(karyopherins)運(yùn)送至核內(nèi)，而大半部分的RNA則通過(guò)輸出蛋白(exportins
9、)轉(zhuǎn)運(yùn)出核。這種運(yùn)輸?shù)姆较蛐允怯蒖anGTP的梯度(核內(nèi)是高濃度的RanGTP，而細(xì)胞溶質(zhì)中則是低濃度的RanGTP)決定的。在胞質(zhì)中缺乏RanGTP的情況下結(jié)合貨物蛋白，然后在核質(zhì)中隨著RanGTP的結(jié)合而將貨物蛋白釋放。相反在核內(nèi)，輸出蛋白與RanGTP以及貨物蛋白形成復(fù)合物，運(yùn)送到胞質(zhì)中之后隨著GTP水解成GDP而解離。GTP的水解需要存在于細(xì)胞質(zhì)中的RanGAP(RanGTPase—activating12rotein)。反過(guò)來(lái)，GTP到GDP的交換是由鳥(niǎo)苷交換因子(GEF，在哺乳動(dòng)物中是RCCl，在釀酒酵母中是Prp20p)所催化，它存在于核內(nèi)并與染色質(zhì)相結(jié)合。第
10、二章則將著重介紹Prp20p這一蛋白質(zhì)的基本信息，然后是我們所用的實(shí)驗(yàn)方法以及隨后所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。Vrp20p是RCCl(RegulatorofChromosomeCondensation1)在釀酒酵母中的同源蛋白，它是小GTP酶Gsplp(Ran在釀酒酵母中的同源蛋白)的鳥(niǎo)苷交換因子(guaninenucleotideexchangefactor，GEF)。Prp20p主要由類RCCl結(jié)構(gòu)域(RCCl．1ikedomain，RLD)和N端的核定位信號(hào)序列(nuclearlocalizationsignal)所組成。Prp20p的類RCCl結(jié)構(gòu)域?yàn)榈湫偷钠呷~螺旋槳結(jié)構(gòu)(s
11、evenblades13-propeller)。在這個(gè)結(jié)構(gòu)中，我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)額外的p-wedge，而且隨后我們也證明了這個(gè)區(qū)域參與了Prp20p和Gsplp的相互作用。然后我們構(gòu)建了Prp20p．Gsplp的復(fù)合物模型，并用分子動(dòng)力學(xué)模擬(moleculardynamicssimulations)進(jìn)行了優(yōu)化。此外，我們還研究了Prp20p在體外條件下的組蛋白結(jié)合特性，意外地發(fā)現(xiàn)其更傾向于結(jié)合H3／H4，這與RCCl的組蛋白結(jié)合特性有顯著的區(qū)別。第三章則介紹人源鋅指蛋白DESRl的溶液結(jié)構(gòu)研究。人源DESRl屬于一個(gè)高度保守的CSL鋅指蛋白家族(Pfam：PF05207)。DE
12、SR參與了翻譯延伸因子2(translationelongationfactor2，eEF．2)的翻譯后修飾的第一步過(guò)程，使第715T摘要位的組蛋白(H715，在酵母中是H699)生成白喉酰胺(diphthamide)，這是ADP核糖基化(ribosylation)的靶位點(diǎn)。另外有實(shí)驗(yàn)證實(shí)了DESRl在鼠中對(duì)于胚胎和胎盤發(fā)育的重要性。我們用三維核磁共振波譜的方法解析了這個(gè)小蛋白的溶液結(jié)構(gòu)。隨后拿它跟其在鼠和酵母中的同源蛋白(mDESRl和KTlll)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)比較，顯示出結(jié)構(gòu)的保守性以及些許的微小差異。最后討論了這
