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《草原龍膽耐鹽相關基因群的表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、摘要草原龍膽(Eustomagrandiflorum)屬龍膽科草本植物，是優(yōu)良的鮮切花材料，它具有一定的耐鹽性，在pH9鹽堿地中，植株仍然可以完成生活史。本試驗的目的是通過抑制消減雜交技術結合cDNA芯片技術分離草原龍膽赫脅迫誘導基因及耐赫相關基因群。抑制消減文庫采用鹽處理lh、3h、6h條件下草原龍膽等量混合的mRNA做為tester，未處理條件下草原龍膽的mRNA做為driver。將抑制消減雜交第2次PCR的產(chǎn)物連接至p(3EM．T載體中，隨后轉化到JMl09感受態(tài)細胞，經(jīng)藍白斑篩選、培養(yǎng)后提取質粒DNA。應用測序試劑盒(Amersham)進行質粒DNA測序PCR
2、反應，產(chǎn)物經(jīng)純化后在MegaBACE500測序儀上測序。得出的序列經(jīng)SeqClust2．1軟件去除冗余。結果共得到“53條200bp以上的序列，平均長度為375bp，去除載體和冗余序列，得到658條非重復序列。文庫的冗余度為42．9％。將得到的658條序列進行GO分類，在生物學途徑中分為有絲分裂檢查點、類泛素化蛋白修飾、氧化脅迫反應、轉運、電子傳遞等14類：分子功能中分為過氧化氫酶活性、催化活性、環(huán)氧化物酶活性、單氧化酶活性、谷胱甘肽脫氫酶活性等2l類；在細胞組件中分為線粒體、葉綠體、過氧化物酶體、乙醛酸循環(huán)體、細胞核等10類。以‘‘primerl”和“primer2
3、R'’為引物，通過PCR的方法將以上獲得的658個非重復基因片段從文庫的質?？寺≈袛U增出來用于芯片的制作。分別用Cy3、Cy5熒光染料標記鹽處理和未處理草原龍膽的mRNA，按照3DNAArray9000試劑盒(GenisphereInc．)的使用說明完成芯片雜交。用ScanArray40000芯片掃描儀掃描芯片。通過limma軟件包分析，結果顯示，顯著上調表達的基因為14條，顯著下調的基因為16條。其中功能已知的序列為5條，分別為硫氧還蛋白、類泛素化蛋白、縮氨酸轉運蛋白、脫氫抗壞血酸還原酶、細胞色素P450。關鍵詞草原龍膽耐鹽基因抑制消減文庫eDNA微陣列l(wèi)immaA
4、bstractEustomagrandiflorumisal【indofGentianaceaeherb∽cousplant．Itisverypopularasafleshcutflowerandhassalttolerance．Eustomagrandiflorum鋤grownormallyinthesaline-alkalinegrasslands(soilpHat9．∞．ThepurposeofthisstudywastogetsaltinducedgenesandgenesrelatedtosalttolerancefromEustomagrandifloru
5、musingthetechniqueofsuppressionsubtractivehybridization(SSH)andthetechniqueofcDNAmicroarray．ThelibraryusedEustomagrandiflorum’SmRNAtreatedwithNaClforl。3and6h．whereequallyeommixmat鰣alswereregardedastester,andthemRNAofnon-stressmaterialsasdriver．ThesecondaryPCRamplificationproductsofSSHli
6、brarywereinsertedinpGEM-Tvector,andthentransferredintocompetentJMl09cells．Afterscreeningbyblue／whitespottestandsubsequentcellculture，theplasmidDNAWasextracted．SequencingPCRreactionoftheplasmidDNAWasperformedusingDyllamicETDyeTerminatorCycleSequencingKit(Amersham)．PurifiedPCRproductseque
7、ncesWgl"ereadbyMegaBACE500DNAAnalysisSystems．ThesegeneswereclusteredbySeqClust2．1software．Asaresult,1153highqualitysequenceslongerthan200bpwe糟isolatedwiththeaveragelengthof375bp，removingthevectorandredundancysequencingandWegot658non-repeatseq∞nces．Thelibraryredundancywas42．9％．T
