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《昆蟲病原線蟲共生菌中plu4436基因克隆和表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、論文題目：專業(yè)：碩士生：指導(dǎo)老師：昆蟲病原線蟲共生菌中plu4436基因的克隆與表達(dá)農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治石微邱禮鴻副研究員摘要昆蟲病原線蟲(entomopathogenicnematodes，EN)現(xiàn)已成為一類新型生物殺蟲劑，己商品化并成功用于防治多種害蟲。昆蟲病原線蟲共生菌在EN對(duì)害蟲的致病力中起關(guān)鍵性作用。共生菌分泌的殺蟲毒素具有高效、殺蟲譜廣的優(yōu)點(diǎn)，已受到廣泛關(guān)注。對(duì)這類殺蟲毒素進(jìn)行深入研究，可將其基因轉(zhuǎn)入植物，或者構(gòu)建高效表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)殺蟲毒素直接用于害蟲防治，有助于延緩害蟲對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲作物的抗性壓力，擴(kuò)大轉(zhuǎn)基因抗蟲作物的抗蟲譜
2、。本研究用PCR方法從昆蟲病原線蟲共生菌株中擴(kuò)增到Tplu4436基因。將其連接至t]pQE30載體上，并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到了Plu4436蛋白。利用Ni．NTAagarose對(duì)該蛋白進(jìn)行純化，用Plu4436蛋白對(duì)四種鱗翅目昆蟲棉鈴蟲、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾以及粉紋夜蛾的初孵幼蟲進(jìn)行了口服毒力測(cè)定，發(fā)現(xiàn)Plu4436蛋白對(duì)以上四種試蟲均沒有毒性。這一結(jié)果說明Plu4436蛋白單獨(dú)表達(dá)可能沒有殺蟲活性，需要和其他蛋白聯(lián)合作用才具有殺蟲功效。關(guān)鍵詞：昆蟲病原線蟲共生菌，plu4436基因，克隆表達(dá)Title：CloningandE
3、xpressionofplu4436genefromSymbioticBacteriaofEntomopathogenicnemotodesMajor：AgricuturalinsectsandpestscontrolNalne：ShiWeiSupervisor：QiuLihong，Ph．D．AbstractEntomopathogenicnematodes(EN)havebeenusedasbiologicalcontrolagent．BacteriaofthegeneraXenorhabdusandPhotorhabdushavea
4、mutualsymbioticrelationshipwithentomopathogenicnematodesofthefamiliesSteinemematidaeandHeterorhabditidae，respectively．ThebacteriaplayanimportantroleinthepathogenicityoftheENandbacteriacomplextoinsectpests．ItwasfoundthatsometoxinsofENsymbioticbacteriacouldeffectivelykilla
5、widerangeofinsects．GenesencodingthesetoxinsthereforebecomepotentialalternativesoftoxingenesfromBacillusthuringiensisforthedevelopmentofnoveltransgenicinsect．resistantplants．Inthepresentstudy,plu4436genewasobtainedbyPCRamplificationfromPhotorhabdusluminescenesTT01．Itwasli
6、gasedtoplasmidpQE30，andthenexpressedinEcoli．ThePlu4436waspurifiedwithNi．NTAagarose．TheoraltoxicityoftheresultedPlu4436tOtheneonateofHelicoverpaarmigera，Spodopteraexigua，SpodopteralituraandTrichoplusianiwastested．’FheresultsshowedthatthePlu4436havenooraltoxicitytoallofthe
7、insectstested．Keyword：entomopathOgenicnematodes，symbioticbacteria，plu4436gent，cloneandexpression11石微中山大學(xué)碩士學(xué)位論文日IJ舌昆蟲病原線蟲．共生菌復(fù)合體由于具有殺蟲譜廣、主動(dòng)搜索害蟲的能力，已成為生物防治的方法之一?，F(xiàn)已描述的共生菌有兩個(gè)屬：致病桿菌屬(Xenorhabdus)和發(fā)光桿菌屬(Photorhabdus)。當(dāng)線蟲主動(dòng)侵染昆蟲后，其腸道中的共生菌被釋放入昆蟲血腔，共生菌在血腔中大量繁殖，釋放毒素，導(dǎo)致昆蟲迅速死亡(ffrenc
8、h．Constantetal．，2002)。由于發(fā)光桿菌屬和致病桿菌屬共生菌不能在土壤或水中長時(shí)間生存，所以它們不能直接作為生物殺蟲劑使用，但是可以將它們的毒素基因轉(zhuǎn)入其他細(xì)菌、微生物或植物中開發(fā)利用。近年
