植物病原真菌拮抗放線菌的篩選及其發(fā)酵條件研究

植物病原真菌拮抗放線菌的篩選及其發(fā)酵條件研究

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1、獨創(chuàng)性:聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)F進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中待鄹加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。也不包含為獲得沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貞獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:巷麗欠辱時問:2006年6月眵日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱,jF以采用影印、縮印或掃描

2、等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名:穗b麗雉時1.BJ:2DD6年6月心日導(dǎo)師簽名:‘拿莨移參時問:Ⅻ口歹年歹月礦同摘要本文為了適應(yīng)當(dāng)麗防治植物病害的發(fā)展方向.開發(fā)高效、低毒的農(nóng)用抗生素,從遼寧省沈陽市、大連市及吉林省四平市等地區(qū)采集土樣20份分離出放線菌,從所分離的放線菌中尋找具有高效抗真菌活性的農(nóng)用抗生素,并對其菌株的分類地位、發(fā)酵條件優(yōu)化、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定等方面進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,為今后的抗植物病原真菌病害的藥

3、劑開發(fā)提供實踐經(jīng)驗和理論依據(jù)。l、通過廣泛篩選,獲得了目的塵防菌株YZ5。利用稀釋分離法從遼寧省8個地區(qū)及吉林省四平市20份樣品的土壤中共分離到各種放線菌菌株156份,采用活體平板測定法共獲得對植物病原真菌具有拮抗作用的放線菌菌株14株:采用杯碟法測定篩選的各菌株發(fā)酵液抑菌活性,其中發(fā)酵液抑菌圈直徑超過15ram的菌株有4株。將這4株菌株進(jìn)行了進(jìn)一步的驗證試驗,結(jié)果表明,菌株YZ5無論是活體還是其發(fā)酵液對7種供試病原菌均表現(xiàn)較強的抑菌效果,發(fā)酵濾液稀釋lO倍后對番茄葉霉病菌的抑制率達(dá)81.8%。2、利用傳統(tǒng)分類法明確了菌株YZ

4、5的分類地位。通過對菌株YZ5的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特性進(jìn)行研究,推測YZ5屬于會色類群中的龜裂鏈霉菌(Streptomycesrimosus)的近源變種。3、研究明確了菌株YZ5的最佳發(fā)酵條件,為Yz菌素進(jìn)入中試階段奠定了良好的基礎(chǔ)。通過單因子試驗,菌株YZ5利用碳源產(chǎn)抗生素從高到低依次為蔗糖>葡萄糖>淀粉>麥芽糖>乳糖:利用氮源產(chǎn)抗塵素以玉米粉和黃豆粉為最好,其它依次為蛋白胨、酵母粉、(NH4)2S04、氨水。通過證交試驗設(shè)計,對菌株YZ5發(fā)酵條件的相關(guān)方程進(jìn)行回歸分析,其發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為蔗糖7.93%,玉米

5、粉2.23%,(NH4)2S040.233%,CaC030.442%,NaCl0.225%。選用最優(yōu)化的培養(yǎng)基配方,菌株YZ5的最佳發(fā)酵條件為289C,150r/min,20%的接種量,起始pH值為7,發(fā)酵培養(yǎng)120h,菌株YZ5產(chǎn)素最多。YZ菌素整個發(fā)酵過程中,總糖、總氮的含量逐漸減少。4、采用Doskochilova溶劑系統(tǒng)、pH紙層析和紙電泳,分析認(rèn)為YZ菌素屬于中性抗生素;采用硅膠層析法,得到Y(jié)z菌素淡黃色粗提品;通過紫外分析和一些定性化學(xué)反應(yīng)可初步判斷YZ菌素可能為四烯類抗生素。穩(wěn)定性試驗表明,Yz菌素具有較好的酸、

6、堿、光和熱穩(wěn)定性。具有丌發(fā)和生產(chǎn)價值。關(guān)鍵詞:農(nóng)用抗生素;抗真菌:菌種鑒定:發(fā)酵條件;分離純化AbstraetAbstractThenovelantifungalagriantibioticYZwasobtainedfromactinomycetesYZ5.Isolationofactinomycetesstrainsforbiocontrol,taxonomyofstrainTZ5,itsfermentationconditions,separationandpurificationprogressofYZwerestudi

7、edsystematically.Resultsshowedasfollows.Screeningbioeontrolstrainsisnecessarypreconditiontoobtainingagriculturalantibiotic.156aetinomycetesisolateswasseparatedfrom20soilsamples,14strainsshowedantagonismtopathogenicfungus.Antifungalactivitiesoffermentationwasmeasured

8、bymethodofcup-dish。thereare4strainswhichdiameterofinhibitionismorethan15mm.Theywereusedforthefurthertests.ItwasfoundthatbethstrainYZ5andit

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