拮抗放線菌06-6的篩選鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化-論文.pdf

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1、江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2014年第42卷第6期·-——107-——郝永麗，宗兆鋒，高博，等．拮抗放線菌06—6的篩選鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(6)：107—109拮抗放線菌O6—6的篩選鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化郝永麗，宗兆鋒，高博，胡海波，曲寶茹(1．內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市農(nóng)牧科學(xué)研究院，內(nèi)蒙古赤峰024031；2．西北農(nóng)林科技大學(xué)植保學(xué)院／陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西咸陽(yáng)712100)摘要：從采集的土樣中分離出拮抗放線菌，并篩選出對(duì)4種靶標(biāo)菌均具有明顯拮抗效果的菌株06—6，對(duì)該菌株進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化及生理生化鑒定，從而確定該菌株的最佳發(fā)酵技術(shù)參數(shù)，通過(guò)鑒定初步將其歸類(lèi)為

2、灰紅紫類(lèi)群(Griseorubroviolaceus)。關(guān)鍵詞：拮抗放線菌；篩選；鑒定；發(fā)酵條件；優(yōu)化中圖分類(lèi)號(hào)：Q939．92文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002—1302(2014)06—0107—03拮抗菌作為一種具有豐富資源的微生物類(lèi)群，其產(chǎn)生的至、乾縣、戶(hù)縣及山東諸城。抗生素及其他次生代謝物質(zhì)在農(nóng)作物病蟲(chóng)害生物防治方面具1．1．2供試病原菌供試靶標(biāo)菌由西北農(nóng)林科技大學(xué)微生有重要作用，是具有使用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的一類(lèi)微生物，在植物實(shí)驗(yàn)室提供，包括番茄灰霉菌(Botrytiscinerea)、蘋(píng)果炭疽物病蟲(chóng)害生物防治中應(yīng)用前景廣“J。利用拮抗放線菌產(chǎn)生菌(Colletotrichumgloeo

3、sporioides)、西瓜枯萎菌(Fusariumoxys—的活性物質(zhì)進(jìn)行真菌病害防治，具有周期短、易于研究、便于porumf．sp．nweum)和粉紅聚端孢(Trichotheciumroseum)。生產(chǎn)、無(wú)毒害等優(yōu)點(diǎn)。本研究旨在從采集的土樣中分離篩選1．2篩選方法殺菌力強(qiáng)、抗菌譜廣的拮抗放線菌；并對(duì)其發(fā)酵條件和分類(lèi)進(jìn)1．2．1菌株的分離與純化采集的土壤過(guò)篩，研磨后稱(chēng)取行研究，為優(yōu)勢(shì)拮抗放線菌在生物防治中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。0．1g樣品，制備成不同濃度的稀釋液]。用移液器吸取特定稀釋濃度的液體20，滴在高氏培養(yǎng)基表面，涂勻。將皿1材料與方法倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，幾天后從皿內(nèi)分離出單菌落，用

4、1．1材料顯微鏡檢純化，保存于G氏斜面中。1．1．1土樣來(lái)源試驗(yàn)用土壤標(biāo)本分別采集于陜西商洛、周1．2．2拮抗放線菌的篩選用打孔器將培養(yǎng)好的放線菌菌苔打成直徑5mm的菌餅置于PDA平板中間，3d后將同樣大收稿日期：2013—09—25小的4種供試病原真菌菌餅對(duì)峙接于兩側(cè)，2l℃下培養(yǎng)，觀基金項(xiàng)目：教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(編號(hào)：200558)；國(guó)家高等學(xué)校察并測(cè)量抑菌圈的大小。將初篩得到的菌株于SNB培養(yǎng)液學(xué)科創(chuàng)新引智計(jì)劃(編號(hào)：B07049)。中振動(dòng)培養(yǎng)，發(fā)酵液離心后取上清液，采用微孔擴(kuò)散法測(cè)定發(fā)作者簡(jiǎn)介：郝永麗(1981一)，女，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士，助理研究員，從酵液及發(fā)酵濾液的抑菌活性，供

5、試靶標(biāo)菌為西瓜枯萎菌。事園藝植物病蟲(chóng)害防治研究。E—mail：yonglihao1981@163．com。據(jù)報(bào)道，芽孢桿菌屬的一些種類(lèi)對(duì)外界有害因子的抵抗力強(qiáng)，endophytesintheagriculturalcrops[J]．CanadianJournalofMicro—菌體生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的枯草菌素、制霉菌素等多種活性物質(zhì)biology，1997，43(10)：895—914．對(duì)植物病原菌有明顯的抑制作用J。蘇云金芽孢桿菌B．[2]KiersET，DenisonRF．Sanctions，cooperation，andthestabilityofplant—rhizospheremutua

6、lisms[J]．AnnualReviewofEcdogy，Evo—thuringiensis由于能產(chǎn)生6內(nèi)毒素，對(duì)鱗翅目等昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)有l(wèi)ution，andSystematics，2008，39：215—236．毒殺作用而被用以制造生物農(nóng)藥，是常用的生防資源菌。[3]RyanRP，GermaineK，F(xiàn)ranksA，eta1．Bacterialendophytes：recent芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、類(lèi)芽孢桿菌屬的許多菌株不僅可以developmentsandapplications[J]．FEMSMicrobiologyLetters，分泌吲哚乙酸或赤霉素等，從而有效促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，而且能2

7、008，278(1)：1—9．抑制多種病原菌的活性，從而顯著提高植物的抗病性。[4]牛西午．中國(guó)錦雞兒屬植物資源研究——分布及分種描述[J]．作為防風(fēng)固沙的先鋒物種，小葉錦雞兒的生態(tài)學(xué)意義遠(yuǎn)西北植物學(xué)報(bào)，1999，19(5)：107—133．大于其經(jīng)濟(jì)學(xué)意義，發(fā)掘與其共生的微生物資源不僅對(duì)探索[5]WeisburgWG，BarnsSM，Pdl~ierDA，eta1．16SribosomalDNA極