海綿狀靜脈畸形的實驗與臨床研究

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1、博士學(xué)位論文lIIII1111111111111111111111111111LIIIIILlUIY2256855海綿狀靜脈畸形的實驗與臨床研究博士研究生：白南指導(dǎo)教師：柳大烈教授摘要海綿狀靜脈畸形源于血管形態(tài)發(fā)生的異常，擴張的靜脈包含薄的血管壁和異常的平滑肌。病變表現(xiàn)為藍色、柔軟、可被壓縮，或可觸及堅硬鈣化的靜脈石。靜脈畸形包括了小范圍局限性的皮膚靜脈畸形以及涉及重要結(jié)構(gòu)的多部位多層次的彌漫性畸形。因靜脈畸形有不斷發(fā)展的特征，使治療尤為困難；隨時間推移，尤其是在青春期，畸形會增大；靜脈畸形治療后容易

2、復(fù)發(fā)。經(jīng)皮穿刺硬化療法作為治療靜脈畸形的一線療法，和手術(shù)相比最大的優(yōu)點是沒有外部瘢痕、很少有嚴(yán)重并發(fā)癥，一般情況下比切除更安全有效。硬化療法是把組織硬化劑注射到病變處，引起細胞破壞、血栓形成以及強烈的炎癥反應(yīng)，局部纖維化導(dǎo)致病變收縮。75．90％的患者有良好的結(jié)果，包括病變體積的縮小和癥狀的減輕。硬化治療常需持續(xù)多次。在我國平陽霉素硬化治療靜脈畸形作為一種常規(guī)治療方式，療效確切。為指導(dǎo)應(yīng)用，中華口腔醫(yī)學(xué)會口腔頜面外科專業(yè)委員會脈管性疾病學(xué)組2011年建議了平陽霉素治療靜脈畸形方法，其中利多卡因作為一種

3、聯(lián)合用藥與平陽霉素配制成一定濃度藥液注入畸形靜脈中。利多卡因一方面作為酰胺類局麻藥物，用于不同部位以阻斷感覺神經(jīng)而產(chǎn)生麻醉，其穿透性和擴散性強。治療靜脈畸形可減輕平陽霉素栓塞過程中因疼痛引起的反射性血管痙攣，使硬化藥物更充分的填塞病灶。另_方面，利多卡因作為鈣調(diào)蛋白阻滯劑對抗腫瘤藥物有增敏作用。利多卡因、平陽霉素注入到畸形靜脈中對血管內(nèi)皮細胞的作用如何?利多摘要卡因是否在平陽霉素治療靜脈畸形過程中有協(xié)同作用?平陽霉素和利多卡因濃度的改變對臨床治療效果有何影響?本課題分為兩個部分，第一部分采用昆明小鼠脾

4、臟作為人海綿狀靜脈畸形的動物模型，通過石蠟切片光鏡觀察、超薄切片電鏡觀察、末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)標(biāo)記凋亡細胞，Image．ProPlus6．0病理細胞圖像分析系統(tǒng)比較細胞凋亡率，實時熒光定量PCR檢測細胞凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶．3(Caspase．3)的表達，觀察不同濃度利多卡因、不同濃度平陽霉素在不同時間對脾臟血管內(nèi)皮細胞的毒性作用以及平陽霉素與不同濃度利多卡因聯(lián)合用藥時在不同時間對血管內(nèi)皮細胞的毒性作用，探討利多卡因是否對平陽霉素治療海綿狀靜脈畸形有協(xié)同作用。第二部

5、分回顧性分析平陽霉素聯(lián)合不同濃度利多卡因治療海綿狀靜脈畸形，探討利多卡因濃度對療效的影響；回顧性分析不同濃度平陽霉素治療淺表海綿狀靜脈畸形，探討平陽霉素濃度對治療效果晦影響，指導(dǎo)臨床用藥；回顧性分析低濃度平陽霉素治療淺表靜脈畸形，總結(jié)治療效果。第一部分利多卡因影響平陽霉素治療海綿狀靜脈畸形的實驗研究實驗1不同濃度利多卡因?qū)π∈笃⑴K血管內(nèi)皮細胞的影響目的探討利多卡因?qū)ρ軆?nèi)皮細胞的細胞毒性。方法將88只雌性昆明小鼠按隨機區(qū)組設(shè)計原則隨機分為4組，其中A組16只，為生理鹽水對照組；實驗組72只，分為B、C

6、、D三組，每組24只，分別為0．1％利多卡因組、O．2％利多卡因組、0．4％利多卡因組。每組又隨機為4個日程組(2、5、8、14d組)，對照組每日程4只，實驗組每日程6只。將小鼠用10％水合氯醛(3ml／kg)腹腔注射麻醉后，常規(guī)消毒、鋪巾。分層切開皮膚、肌層、腹膜，切口長約1．0cm，將胃翻起顯露其背側(cè)的脾臟，鈍性牽拉固定，用4號半針頭沿脾臟長軸方向穿刺，對照組注射生理鹽水0．3ml，實驗組注射不同濃度鹽酸利多卡因溶液0．3ml，邊注射邊勻速退針，稍加壓迫針孔止血，分層縫合，繼續(xù)飼養(yǎng)。術(shù)后第2、5、

7、8、14d處理對照組的4只小鼠，實驗組B、C、Il博士學(xué)位論文D中的各6只小鼠。麻醉后，按照原切口再次開腹，游離并切斷結(jié)扎脾臟周圍血管及系膜，取出脾臟，去除脾臟頭尾，將脾臟中段分割后，分別投入10％中性福爾馬林及2．5％的戊二醛溶液中。HE染色，觀察不同濃度、不同時間標(biāo)本變化；TUNEL法檢測細胞凋亡，每例標(biāo)本制切片2張，用Image．ProPlus6．0病理細胞圖像分析系統(tǒng)，將各組TUNEL標(biāo)記切片進行分析。在400x光鏡下，每張切片隨機選擇6個高倍視野的圖片，分別計數(shù)每張切片中TUNEL陽性細胞比

8、率(=6個高倍視野的陽性細胞數(shù)／細胞總數(shù)x100％)并計算其平均值。電鏡下觀察血管內(nèi)皮細胞變化。統(tǒng)計方法：正態(tài)分布計量資料采用均數(shù)-t-標(biāo)準(zhǔn)差(xq-S)描述，時間與處理因素的效應(yīng)分析采用析因設(shè)計的方差分析，若交互作用有統(tǒng)計學(xué)差異，進一步分析單獨效應(yīng)。滿足正態(tài)且方差齊的數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析(One-wayANOVA)；非正態(tài)和(或)方差不齊的數(shù)據(jù)，采用Kruskal．WallisH秩和檢驗；若有統(tǒng)計學(xué)意義，用SNK法進一步做兩兩比較，P