SNT2868-2011-西尼羅病毒病檢疫技術(shù).pdf

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1、版權(quán)所有·禁止翻制、電子發(fā)售中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)犛犖／犜２８６８—２０１１西尼羅病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉狑犲狊狋狀犻犾犲犳犲狏犲狉２０１１０５３１發(fā)布２０１１１２０１實(shí)施中華人民共和國(guó)發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局版權(quán)所有·禁止翻制、電子發(fā)售犛犖／犜２８６８—２０１１前言本標(biāo)準(zhǔn)按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)參考了國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）的《診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)》（２００８版）（ＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＴｅｓｔａｎｄＶａｃｃ

2、ｉｎｅｓｆｏｒＴｅｒｒｅｓｔｒｉａｌＡｎｉｍａｌｓ）２．１．２０章和有關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)制定，補(bǔ)充了ＲＴＰＣＲ和實(shí)時(shí)熒光ＲＴＰＣＲ的檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)云南出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：邱璐、李健、姜焱、熊煒、周曉黎、蔣靜、胡永強(qiáng)。Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載版權(quán)所有·禁止翻制、電子發(fā)售犛犖／犜２８６８—２０１１西尼羅病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范１范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了西尼羅

3、病毒病臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷。本標(biāo)準(zhǔn)適用于西尼羅病毒病病原及抗體的檢測(cè)。２規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法３臨床診斷３．１發(fā)病癥狀人和馬感染后，多數(shù)不出現(xiàn)癥狀，部分感染者發(fā)生伴有類(lèi)似流感癥狀的西尼羅熱，少量嚴(yán)重的病例出現(xiàn)高熱、劇烈頭痛、頸項(xiàng)強(qiáng)直、昏迷、抽搐等中樞神經(jīng)系統(tǒng)體癥，發(fā)生西尼羅腦炎，甚至死亡。３．２流行病學(xué)西尼羅病毒（ｗｅｓｔｎｉｌ

4、ｅｖｉｒｕｓ，ＷＮＶ）為單鏈ＲＮＡ病毒，屬黃病毒科黃病毒屬。病毒呈球形，基因組編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白（Ｃ、ｐｒＭ和Ｅ蛋白）與七種非結(jié)構(gòu)蛋白。西尼羅病毒在抗原性上與同屬黃病毒的日本乙型腦炎病毒、圣路易斯腦炎病毒、Ｋｕｎｊｉｎ病毒、登革病毒相似，在血清學(xué)檢測(cè)時(shí)，易產(chǎn)生交叉反應(yīng)。西尼羅病毒于１９３７年首次分離，經(jīng)蚊媒傳播可引起人類(lèi)或動(dòng)物的西尼羅熱及西尼羅腦炎。鳥(niǎo)類(lèi)、馬、人等哺乳動(dòng)物都是易感動(dòng)物。其中鳥(niǎo)類(lèi)是主要的儲(chǔ)存宿主。該病在２０世紀(jì)５０年代～９０年代都曾有過(guò)流行，特別是２０世紀(jì)９０年代以后，流行區(qū)呈擴(kuò)大趨勢(shì)，范圍遍及非洲、歐洲

5、、中東、西亞、中亞、大洋洲和北美洲等廣大地區(qū)。目前我國(guó)尚無(wú)該病流行的報(bào)道，但隨著全球氣候變暖，疫源地旅行傳播以及生物媒介等潛在因素的存在，為西尼羅病毒的傳播提供了可能。加之該病毒目前在我國(guó)周邊國(guó)家如印度、俄羅斯南部、東南亞等國(guó)已有報(bào)道，我國(guó)人群普遍缺乏對(duì)該病毒的免疫力，一旦傳入，將導(dǎo)致嚴(yán)重的公共衛(wèi)生災(zāi)難。４實(shí)驗(yàn)室診斷４．１西尼羅病毒犚犜犘犆犚、實(shí)時(shí)熒光犚犜犘犆犚檢測(cè)及套式犘犆犚檢測(cè)４．１．１方法介紹可以進(jìn)行西尼羅病毒核酸檢測(cè)。本標(biāo)準(zhǔn)提供的三種核酸檢測(cè)方法可以根據(jù)具體情況選擇采用。ＰＣＲ試驗(yàn)的前處理操作可以在ＢＳＬ

6、２實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。在對(duì)人、活動(dòng)物或尸體進(jìn)行取樣時(shí)，采樣人員應(yīng)佩戴個(gè)人防護(hù)設(shè)施，穿戴防護(hù)衣，佩戴防護(hù)口罩、面罩、手套。１標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載版權(quán)所有·禁止翻制、電子發(fā)售犛犖／犜２８６８—２０１１４．１．２設(shè)備、材料和試劑４．１．２．１設(shè)備、材料４．１．２．１．１ＰＣＲ儀。４．１．２．１．２實(shí)時(shí)熒光ＰＣＲ檢測(cè)儀。４．１．２．１．３電泳儀。４．１．２．１．４凝膠成像分析系統(tǒng)。４．１．２．１．５高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)。４．１．２．１．６普通臺(tái)式離心機(jī)。４．１．２．１．７勻漿器。４．１．２．１．８微量可調(diào)移液

7、器。４．１．２．１．９無(wú)ＲＮａｓｅ的離心管、吸頭和無(wú)ＲＮａｓｅ的玻璃容器。４．１．２．２試劑除特別說(shuō)明以外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，所有試劑均用無(wú)ＲＮａｓｅ污染的容器（用ＤＥＰＣ水處理后高壓滅菌）分裝。試驗(yàn)用水應(yīng)符合ＧＢ／Ｔ６６８２規(guī)定。４．１．２．２．１裂解液：Ｔｒｉｚｏｌ或其他。４．１．２．２．２異丙醇。４．１．２．２．３犜犪狇ＤＮＡ酶。４．１．２．２．４７５％乙醇：用新開(kāi)啟的無(wú)水乙醇和ＤＥＰＣ水配制，－２０℃預(yù)冷。４．１．２．２．５ｄＮＴＰ：含ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ各１０ｍｍｏｌ／Ｌ。４．１．

8、２．２．６逆轉(zhuǎn)錄酶。４．１．２．２．７ＤＥＰＣ水：用ＤＥＰＣ處理后的水。４．１．２．２．８５０×ＴＡＥ緩沖液。４．１．３采樣、送檢和處理４．１．３．１人員樣本采集４．１．３．１．１采集來(lái)自于疫區(qū)的人員、入境可疑人員、申請(qǐng)檢驗(yàn)人員的血液。４．１．３．１．２采集懷疑死于西尼羅病人員的血液、腦髓液、組織樣品，特別是腦組織和神經(jīng)組織樣品。４．１．３．２