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《GBT27518-2011西尼羅病毒病檢測方法.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、ICS11．220B41繕亙中華人民共和國國家標(biāo)準GB／T27518—20112011-11—21發(fā)布西尼羅病毒病檢測方法Diagnosticofwestnilevirusinfections2012-03-01實施豐瞀鸛鬻瓣警襻瞥霎發(fā)布中國國家標(biāo)準化管理委員會況19標(biāo)準分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費下載前言GB／T27518—2011本標(biāo)準按照GB／T1．12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準由全國動物防疫標(biāo)準化技術(shù)委員會(sAc／Tc181)歸口。本標(biāo)準起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、北京百歐賽地生物工程技術(shù)開發(fā)中心
2、。本標(biāo)準主要起草人：楊秀娟、孫福軍、丁若愚、田茵、田睿、王飛、楊靜。標(biāo)準分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費下載1范圍西尼羅病毒病檢測方法GB／T27518—2011本標(biāo)準規(guī)定了西尼羅病毒的反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscriptionPolymeraseChainRe—action，RT—PCR)、蝕斑減少中和試驗(PlaqueReductionNeutralizationTest，PRNT)和西尼羅病毒的分離方法。本標(biāo)準適用于易感動物的西尼羅病毒病的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于
3、本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB／T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3縮略語下列縮略語適用于本文件。ABTSdiammonium2，2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline一6一sulfonate)：2，2’一連氮基一雙一(3-乙基苯并二氫噻唑啉一6一磺酸)二銨鹽AMV：鳥類成髓細胞白血病病毒(avianmyeloblastosisvirus)BSA：牛血清白蛋白(bovineserumalbumin)CPE：細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect)cDNA：互補DNA(comp
4、lementaryDNA)DEPC：焦碳酸乙二酯(diethylpyrocarbonate)DNAdeoxyribonucleicacid：脫氧核糖核酸dH2O：雙蒸水(doubledistilledwater)dNTP：脫氧核苷酸三磷酸(deoxy—ribonucleosidetriphosphate)含有dCTP、dGTP、dATP、dTTP四種脫氧核糖核苷EDTA：乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)6一FAM：6一羧基熒光素(6一carboxyfluorescein)HEPES：羥乙基呱嗪乙硫磺酸(N一2一hydf。xy
5、ethylpiperazine—N—ethane-sulphonicaeid)MEM：基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimaessentialmedium)OligodT：多聚T再加上--4,段隨機堿基(幾個堿基)構(gòu)成的引物，用于RT-PCRPBS：磷酸鹽緩沖生理鹽水(phosphatebelancedsolution)PFU：蝕斑形成單位(plaqueformingunits)PRNT：蝕斑減少中和試驗(plaquereductionneutralizationtest)RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)RNasin：核酸酶抑制劑(RNAenzymeinhibit
6、or)TAE：醋酸鹽EDTA(tris-acetate—EDTATris)】標(biāo)準分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費下載GB／T27518—2011Taq酶：耐熱DNA聚合酶(thermusaquaticuspolymerase)TAMRA：四甲基羅丹明(carboxytetramethylrkodamine)TRIzul：一種新型總RNA抽提試劑(trizolreagent)，可以直接從細胞或組織中提取總RNAVero細胞：非洲綠猴腎細胞wNV：西尼羅病毒(westnilevirus)4試劑4．1水：符合GB／T6682中一級水的規(guī)格，用DEPC處理以除掉RNA酶。
7、4．2TRIzM試劑或其他等效的商品化RNA抽提試劑。4．3AMV逆轉(zhuǎn)錄酶：20U／uL，一20℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。4．45×AMVBuffer：AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的緩沖液。4．5RNasin：20U／uL，一20℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。4．6Oligo(dT)：FT--PCR的引物。4．710×TaqBuffer：Taq酶的緩沖液。4．8Taq酶：一20℃保存，不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化。4．9dNTP三磷酸脫氧核糖核苷，含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10mmoL／L。4．10瓊脂糖：電泳級。4．11三氯甲烷：分
