pcr檢測(cè)螺類感染廣州管圓線蟲(chóng)方法的研究

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1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章廣州管圓線蟲(chóng)(病)及PCR、熒光PCR技術(shù)研究進(jìn)展1廣州管圓線蟲(chóng)的主要特性廣州管圓線蟲(chóng)(Angiostrongyluscantonensis,AC)從發(fā)現(xiàn)至今已經(jīng)歷70多年,在分類上隸屬于線形動(dòng)物門(Nemathelminthes)、線蟲(chóng)綱(Nematoda)、圓線蟲(chóng)目(Strongylida)、后圓線蟲(chóng)科(Metastrongyloidea)、絲線蟲(chóng)亞科、管圓線蟲(chóng)屬(Angiostrongylus)。雖然早在20世紀(jì)30年代即由我國(guó)學(xué)者陳心陶教授1935年首先在廣州黑家鼠和褐家鼠體內(nèi)肺部血管發(fā)現(xiàn)?,將其命名為廣州肺線蟲(chóng)(Pulmonemacontonensis)

2、。后由學(xué)者M(jìn)atsumoto1937年在臺(tái)灣報(bào)道,到1946年才由Dougherty訂正為本蟲(chóng)【21。據(jù)悉,這是國(guó)家新發(fā)傳染病中首個(gè)以地名命名的疾病。其成蟲(chóng)寄生于嚙齒動(dòng)物肺動(dòng)脈血管內(nèi),第Ⅲ期幼蟲(chóng)侵入人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起嗜酸性粒細(xì)胞增多性腦膜腦炎或腦膜炎‘3,51,稱為廣州管圓線蟲(chóng)病,簡(jiǎn)稱“酸腦”。1.1成蟲(chóng)形態(tài)結(jié)構(gòu)成蟲(chóng)呈線狀,雌雄異體。細(xì)長(zhǎng),活體呈白色,兩端略細(xì),角皮透明光滑,體表有微細(xì)環(huán)狀橫紋,頭端鈍圓,頭項(xiàng)中央有一小圓口,缺口囊??谥車协h(huán)狀的唇,外有感覺(jué)乳突2圈,每圈6個(gè)。在內(nèi)圈2個(gè)側(cè)乳突外緣各有1個(gè)頭感器開(kāi)口。雄蟲(chóng)長(zhǎng)11"--26ram,寬0.21~0.53mm,尾端略向腹部面彎曲,交

3、合傘對(duì)稱。腎形,內(nèi)有輻肋支撐。睪丸前端達(dá)蟲(chóng)體線I/4處,貯精囊與輸精管位于蟲(chóng)體后1/5處。泄殖腔開(kāi)口位于交合傘內(nèi)面中央,交合刺2根,等長(zhǎng),呈棕色,具橫紋,長(zhǎng)1.Omm~,1.2ram,引帶不明顯。交合傘肋的形態(tài)雖為鑒定種的主要依據(jù)之一,但應(yīng)注意存在個(gè)體和地區(qū)群體間的差異。雌蟲(chóng):蟲(chóng)體平均長(zhǎng)約30.38ram(0.3~0.7ram),寬0.47mm(0.3"--0.66mm),頭部略圓,尾端呈斜錐形。消化系統(tǒng)中咽管長(zhǎng)0.33mill(0.24"0.56nun).神經(jīng)系統(tǒng)位于食管前方1/3處,后端與腸管相連。子宮雙管型,呈白色,與充滿血液的腸管纏繞成紅(或黑褐)白相見(jiàn)的螺旋紋,十分醒目。鏡下子宮內(nèi)可

4、見(jiàn)單細(xì)胞蟲(chóng)卵,無(wú)色透明,橢圓形,大約70x30um.陰門開(kāi)口于肛孔之前,距尾端0.23mm(0.16~O.32mm):蟲(chóng)卵:多為橢圓形,或?qū)挋E圓形、長(zhǎng)橢圓形,還有一端尖細(xì),另一端較鈍圓,似“初生雞蛋”,大小64.2"-'82.1um)(33.8~48.3um,平均75.1x41.65um,卵殼薄福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文而透明,呈紅色。在試驗(yàn)感染過(guò)程中,楊發(fā)柱【q等觀察的到較大型的廣州管圓線蟲(chóng)。其成蟲(chóng)的大小與感染的時(shí)間長(zhǎng)短成正比,感染時(shí)間越長(zhǎng),蟲(chóng)體越大,雌蟲(chóng)可長(zhǎng)達(dá)43mm,雄蟲(chóng)29.5mm,廣州管圓線蟲(chóng)成蟲(chóng)的大小與寄生的數(shù)量無(wú)關(guān),與感染的時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān),寄生數(shù)量的多少與宿主存活時(shí)間還有待于進(jìn)一步研

5、究。何競(jìng)智等在調(diào)查廣州地區(qū)的廣州管圓線蟲(chóng)時(shí),觀察到蟲(chóng)體大小差異較大。有些雌蟲(chóng)達(dá)45mm,雄蟲(chóng)達(dá)26ram[rl,雌蟲(chóng)尾尖有微突起或無(wú)微突起,雄蟲(chóng)交合刺有等長(zhǎng)和不等長(zhǎng)兩種形態(tài),提出是否存在不同種群、株系問(wèn)題,有待于進(jìn)一步探討。廣州管圓線蟲(chóng)可寄生在幾十種哺乳動(dòng)物體內(nèi),包括嚙齒類、犬類、貓類和食蟲(chóng)類,其中主要是嚙齒類,尤其是鼠類;終宿主國(guó)內(nèi)外均以褐家鼠和家鼠較普遍,此外有白腹巨鼠、黃毛鼠、屋頂鼠、板齒鼠和蛛猴。鼠類是最主要的傳染源,我國(guó)臺(tái)灣省報(bào)告褐家鼠感染率為8%'--'71%,日本報(bào)告褐家鼠的感染率多數(shù)在14.3%"-'77.O%之間,廣州市褐家鼠平均感染率為2.8%,溫州褐家鼠平均感染率為20.

6、4%。1.2幼蟲(chóng)形態(tài)結(jié)構(gòu)1.2.1第1期幼蟲(chóng)可自終宿主的肺或糞內(nèi)檢出。蟲(chóng)體細(xì)長(zhǎng),活潑,體長(zhǎng)為0.25~0.29mmxO.014"-'0.018mm,側(cè)翼約與蟲(chóng)體等長(zhǎng)。咽管約為蟲(chóng)體長(zhǎng)度一半,約0.12~O.13mm,生殖原基約在腸中部稍前,尾稍尖,近尾端背側(cè)有一明顯凹陷為本蟲(chóng)之特征。在1957年Bhaibulaya測(cè)量的基礎(chǔ)上對(duì)第1、Ⅲ期幼蟲(chóng)作一比較,第1期幼蟲(chóng)與其他線蟲(chóng)幼蟲(chóng)鑒別的重要標(biāo)志主要依據(jù)廣州管圓線蟲(chóng)第1期幼蟲(chóng)的尾部突然趨尖,近末端的背側(cè)有一刀切樣的凹陷。1.2.2第1I期幼蟲(chóng)較第1期幼蟲(chóng)略為粗長(zhǎng),體表具有外鞘,體內(nèi)有許多折光顆粒,尤以腸道內(nèi)最為明顯。1.2.3第ⅡI期幼蟲(chóng)體表具有兩層外

7、鞘。頭部稍圓,尾部頂端驟變尖細(xì),排泄孔、肛孔及生殖器更為清晰可見(jiàn),同I期幼蟲(chóng)相比,個(gè)體明顯增大增粗,活動(dòng)遲緩,而近尾端缺刻淺淡僅具痕跡,非仔細(xì)觀察難以察覺(jué)。2福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2.4第Ⅳ期幼蟲(chóng)在宿主腦脊液中發(fā)現(xiàn),體長(zhǎng)約為第Ⅲ期幼蟲(chóng)的2倍,腸內(nèi)充滿折光顆粒。亞腹腺較短,位于咽腸聯(lián)結(jié)處的腹側(cè),該時(shí)期幼蟲(chóng)雌雄的區(qū)別逐漸顯示出來(lái)。雌蟲(chóng)前端有雙管型子宮,陰道位于蟲(chóng)體近末端肛孔處,雄蟲(chóng)后端膨大,發(fā)育

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