體外腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞放化療抵抗性研究

《體外腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞放化療抵抗性研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、博士學(xué)位論文體外腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的放化療抵抗性研究博士研究生：蔡潤(rùn)指導(dǎo)教師：馬廉亭摘要在全身惡性腫瘤中，惡性膠質(zhì)瘤的5年死亡率就僅次于胰腺癌和肺癌，5年生存率不足5％。腦膠質(zhì)瘤約占顱內(nèi)腫瘤的半數(shù)以上，腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率為3?10／10萬(wàn)，占全身惡性腫瘤的1?3％。低級(jí)別膠質(zhì)瘤在病理上近于良性，侵襲性較小，即便如此，仍有將近一半的病人存活期不超過(guò)5年，腫瘤將從惡性程度較低的膠質(zhì)瘤發(fā)展到惡性程度較高的膠質(zhì)瘤，最后患者差不多都由于腫瘤復(fù)發(fā)和／或局部侵襲而死亡。目前手術(shù)切除是膠質(zhì)瘤是最基本、最直接的治療方法，治療作用十分明確，其主要目的是降低致殘率和死亡率，

2、最大程度的提高患者的生存質(zhì)量和生存時(shí)間。但由于膠質(zhì)瘤多呈侵潤(rùn)性生長(zhǎng)，手術(shù)過(guò)程中難以通過(guò)肉眼分辨其明確邊界，腫瘤常常難以徹底完全切除，因此在術(shù)后常常需要輔以放療、化療【1J。另有～部分患者因病變較小、位于功能區(qū)或因年齡較大、身體一般狀況差，拒絕或不宜行開(kāi)顱手術(shù)治療而單純選擇放療或化療作為治療手段。放射治療主要是利用放射線(xiàn)的穿透性和使生物細(xì)胞電離的特性，常用的射線(xiàn)有x線(xiàn)和Y線(xiàn)等，x線(xiàn)和Y線(xiàn)等進(jìn)入組織后和活體組織中的原子相互作用，傳遞電離輻射能量。具有生物活性的組織吸收電離輻射能量后產(chǎn)生一系列異常復(fù)雜的物理、化學(xué)和生物學(xué)變化而導(dǎo)致組織的放射性損傷。放射

3、治療包括普通放射治療、組織問(wèn)的近距離照射和精確放射治療，精確放射治療又包括三維適形或調(diào)強(qiáng)放射治療以及立體定向放射治療(即X刀、Y刀)。無(wú)論采用哪種放射治療方法，中文摘要它們均是通過(guò)使用X射線(xiàn)、Y射線(xiàn)等引起腫瘤組織、細(xì)胞的電離輻射效應(yīng)而達(dá)到治療目的【21。膠質(zhì)瘤的化學(xué)藥物治療和手術(shù)、放射治療一起構(gòu)成了膠質(zhì)瘤綜合治療體系，化學(xué)治療可以殺死手術(shù)后或者放療后的微小病灶，延緩膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)；或者使原本不能手術(shù)或不適宜手術(shù)的病人可以接受手術(shù)。但化學(xué)藥物治療也有比較大的副作用，全身用藥毒性較大，同時(shí)可能對(duì)患者的免疫系統(tǒng)造成抑制。化學(xué)治療藥物分為兩大類(lèi)，分別為細(xì)胞

4、周期特異性藥物和細(xì)胞周期非特異性藥物。在選擇化療方案時(shí)常常考慮兩類(lèi)藥物聯(lián)合使用。雖然目前膠質(zhì)瘤的綜合治療體系包括手術(shù)、放療和化療以及目前正在進(jìn)行臨床研究的基因治療、免疫治療等，但是膠質(zhì)瘤的療效在10余年內(nèi)仍然沒(méi)有明顯進(jìn)展，最后患者幾乎由于腫瘤局部擴(kuò)散或局部侵襲或復(fù)發(fā)死亡。特別是惡性膠質(zhì)瘤的治療，即使手術(shù)加放化療的中位生存期也僅為14．6個(gè)月【4l。目前神經(jīng)外科學(xué)者普遍認(rèn)為，膠質(zhì)瘤治療的關(guān)鍵問(wèn)題在于現(xiàn)有治療不能有效抑制或延緩腫瘤復(fù)發(fā)。最近的研究認(rèn)為【6J，腫瘤是由一小群具有無(wú)限增殖及自我更新能力的干細(xì)胞樣細(xì)胞及由其產(chǎn)生的分化程度不均一的細(xì)胞團(tuán)組成，

5、這群干細(xì)胞樣細(xì)胞被稱(chēng)為腫瘤干細(xì)胞(Tumorstemcell，TSC)，而腫瘤的主體卻是由失去了自我更新能力的具有一定分化特征的非干細(xì)胞樣細(xì)胞組成。腫瘤干細(xì)胞假說(shuō)最重要的特征是，腫瘤中僅腫瘤干細(xì)胞具有產(chǎn)生腫瘤及導(dǎo)致腫瘤治療后復(fù)發(fā)的能力。腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)【7】的提出對(duì)于認(rèn)識(shí)腫瘤的本質(zhì)，開(kāi)發(fā)新的腫瘤治療方法具有重要意義，傳統(tǒng)的治療方法，包括手術(shù)、放療和化療，是以整體腫瘤細(xì)胞作為治療靶的，并沒(méi)有專(zhuān)門(mén)針對(duì)于腫瘤干細(xì)胞。治療的結(jié)果就極有可能剩下具有致瘤性并對(duì)治療具有更強(qiáng)抵抗性的腫瘤干細(xì)胞，從而導(dǎo)致腫瘤容易復(fù)發(fā)，難以根治。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞就是在此基礎(chǔ)上逐漸提出來(lái)的

6、，最早被稱(chēng)為神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞(neuralstem．1ikecell)。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)的重要意義在于，如果我們能夠特異性的識(shí)別膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，并開(kāi)發(fā)出特異性針對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的靶向治療方法我博士學(xué)位論文們就才有可能徹底征服膠質(zhì)瘤。根據(jù)上述腫瘤干細(xì)胞和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的學(xué)說(shuō)，認(rèn)為在腦腫瘤組織和體外培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中存在有膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，并且由于膠質(zhì)瘤干細(xì)胞對(duì)目前的治療方法具有一定的抵抗作用而導(dǎo)致膠質(zhì)瘤在治療后部分干細(xì)胞存活下來(lái)，導(dǎo)致膠質(zhì)瘤在術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)。本課題就是在這樣的思路下進(jìn)行設(shè)計(jì)進(jìn)行的。首先在第一部分，我們將兩例新鮮惡性膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞和U251細(xì)胞

7、接種在含血清培養(yǎng)基中，待細(xì)胞生長(zhǎng)良好時(shí)，將細(xì)胞接種至無(wú)血清培養(yǎng)基中(DMEM／F12培養(yǎng)基，內(nèi)含B2720ul／ml，bFGF20ng／ml，EGF20ng／ml，LIF10ng／m1)收集懸浮生長(zhǎng)的神經(jīng)球樣細(xì)胞，這些神經(jīng)球樣細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)、傳代和擴(kuò)增后，再通過(guò)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的方法來(lái)檢測(cè)這些神經(jīng)球樣細(xì)胞是否表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CDl33和ABCG2；再通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)在無(wú)血清培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng)形成的球樣體細(xì)胞CDl33和ABCG2的表達(dá)；然后運(yùn)用免疫磁珠分選的方法，以CDl33為標(biāo)志物，分選出CDl33表達(dá)陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞；通過(guò)反復(fù)傳代培

8、養(yǎng)的方式、單細(xì)胞克隆形成的方法和細(xì)胞移植裸鼠致瘤等方法來(lái)對(duì)其干細(xì)胞特性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，在新鮮的膠質(zhì)瘤組組織細(xì)胞和U251細(xì)胞系中