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《α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-環(huán)糊精的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、a■半乳糖昔酶法合成a■半乳糖基叩■環(huán)糊精的研究摘要：應(yīng)用發(fā)芽咖啡豆a—半乳糖昔酶法合成a—半乳糖基一卩一環(huán)糊精，研究其合成工藝。通過Box-Behnken設(shè)計(jì)等方法，得出工藝條件為ot—半乳糖昔酶用量73nkat，時(shí)間28h,pH6.3,溫度40°C,振蕩速度75r/min,反應(yīng)體系包括2mL醋酸緩沖液，0—環(huán)糊精0?4mo1/L,蜜二糖0?8mo1/Lo在此條件下，a—半乳糖基一卩一環(huán)糊精絕對產(chǎn)率為28.4%,比優(yōu)化前提高了41.3%。關(guān)鍵詞：a—半乳糖昔酶；酶法合成；a—半乳糖基一卩—環(huán)糊精；中圖分類號：TS273文獻(xiàn)標(biāo)識碼：
2、A文章編號:0439-811419-4041-03EnzymaticSynthesisofa—Galactosyl一卩一cyclodextrinbya—galactosidaseSHENWang—yangl,JINZheng—yu2,GAOHong3Abstract：Parametersaffectingthesynthesisofa—ga1actosyl—卩一cyc1odextrinbya—galactosidaseofgerminatingcoffeebeansweresystematica11ystudiedbyBox—Beh
3、nkendesign.Theoptimizedconditionswereasfollows,enzymeconcentration,73nkat；Reactiontime,28h；pH,6.3；Reactiontemperature,40°C；Osci1latoryspeed,75r/min；0—cyc1odextrin,0.4mo1/L；me1ibiose,0.8mo1/L；andacetatebuffer,2mL,Theyie1dofa—galactosyl一卩一cyc1odextrinwas28.4%undertheseco
4、nditions,whichwas41.3%higherthanconditionsbeforeoptimization.Keywords：a—ga1actosidase；enzymaticsynthesis；a—ga1actosy1—p—cyclodextrin環(huán)糊精具有內(nèi)疏水、外親水的特殊性質(zhì)，在制藥、化工、食品等領(lǐng)域被廣泛地研究及應(yīng)用。但其溶解性能不佳，制約了進(jìn)一步的應(yīng)用研究。改性制備分支環(huán)糊精，可以擴(kuò)大分子親水區(qū)域，提高溶解性［1一4］。a—半乳糖基一卩一環(huán)糊精是一種分支環(huán)糊精，是卩一環(huán)糊精的衍生物，其具有較高的水溶性，分支
5、上的半乳糖基在動(dòng)物組織中具有特殊的識別受體，具有廣闊的應(yīng)用前景［5—7］。前期研究工作采用江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制的發(fā)芽咖啡豆a—半乳糖昔酶酶法合成得到a—半乳糖基一p—環(huán)糊精，并成功地鑒定了其結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)以0—環(huán)糊精和蜜二糖為原料，優(yōu)化發(fā)芽咖啡豆a—半乳糖昔酶法合成a—半乳糖基一卩一環(huán)糊精的工藝，有利于提高酶法合成的產(chǎn)量和效率,進(jìn)而指導(dǎo)生產(chǎn)。1材料與方法1.1材料1.1.1試劑發(fā)芽咖啡豆a—半乳糖昔酶為江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制［8］；對硝基苯酚—a—半乳糖昔和蜜二糖購于Sigma-Aldrich貿(mào)易
6、有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。1.1.2儀器與設(shè)備Waters600高效液相色譜儀，美國Waters公司；Direct—Q3超純水系統(tǒng)，美國Mi11ipore公司；De1ta320pH計(jì)，梅特勒一托利多儀器有限公司；XW-80A漩渦混合器，上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；80-2離心機(jī)，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；HW.YS電子恒溫水浴鍋，浙江舟山海源儀器廠。1.2方法1.2.1酶法合成反應(yīng)將p—環(huán)糊精、蜜二糖和發(fā)芽咖啡豆01—半乳糖昔酶溶解于2mL醋酸緩沖液中，使反應(yīng)緩沖液中包括P-環(huán)糊精0.4mo1/L、蜜二糖0.8mo1/L、a
7、—半乳糖苜酶50nkat。由于水溶性較差，混合體系中的卩一環(huán)糊精不能完全溶解，呈現(xiàn)過飽和狀態(tài)，將盛有反應(yīng)緩沖液的容器置于恒溫振蕩器中，進(jìn)行酶法合成反應(yīng)，反應(yīng)條件為30°C,100r/mi11反應(yīng)36h。反應(yīng)結(jié)束后煮沸10min,使a—半乳糖苜酶充分滅活。滅活后的混合液5000r/min離心5min,取上清液［8,9］。1.2.2a—半乳糖基一卩一環(huán)糊精的高效液相色譜分析及制備①高效液相色譜分析酶法合成反應(yīng)后的上清液。泵‘Waters600；色譜柱，Hypersi1Asp-1-NH2柱；流動(dòng)相，75%乙月青；檢測器，Waters241
8、0差示折光檢測器；柱溫，30°C；流速,1.0mL/min；進(jìn)樣量，20
9、iL0②采用制備型高效液相色譜對上清液進(jìn)行分離純化，對應(yīng)特征吸收峰收集各組分，得到所需產(chǎn)品。泵‘Waters1525；色譜柱,SunFireTMOBDTMPre
