基于dna分子開關(guān)的核酸適體生物傳感器的研究

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1、上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文2．3．2cDNAl表面密度對傳感的影響????????????????162．3．3TWJ．DNA適體傳感器的特性?????????????????172．3．4適體傳感器對溶菌酶的響應(yīng)?????????????????192．3．5適體傳感器的特異性????????????????????202．3．6適體傳感器的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性????????????????2l2．4本章小結(jié)???????????????????????????22第3章電極支持脂質(zhì)雙層膜上基于適體的ArP檢測方法????????233．1引言??

2、???????????????????????????233．2實(shí)驗(yàn)部分???????????????????????????243．2．1試劑與材料????????????????????????243．2．2電極的制備????????????????????????243．2．3電化學(xué)測試????????????????????????253．3結(jié)果與討論??????????????????????????253．3．1實(shí)驗(yàn)原理?????????????????????????253．3．2底液的選擇????????????????????

3、????263．3．3孵化時間對電極響應(yīng)的影響?????????????????273．3．4pH對CV的影響??????????????????????283．3．5底液濃度的影響??????????????????????293．3．6Ⅷ在LB／Ⅷ上的作用機(jī)理?????????????????303．3．7ATP檢測??????????????????????????333．4本章小結(jié)???????????????????????????33第4章基于三螺旋開關(guān)的表面增強(qiáng)拉曼適體傳感器檢測細(xì)胞色素c????354．1引言??????????

4、???????????????????354．2實(shí)驗(yàn)部分???????????????????????????364．2．1試劑與材料????????????????????????364．2．2金納米顆粒基底的制備???????????????????364．2．3STP．適體結(jié)合物的固定???????????????????374．2．4傳感界面的再生??????????????????????374．2．5STP表面密度的測量?????????????????????37上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文4．2．6拉曼測試?????????????

5、????????????384．3結(jié)果與討論??????????．，．．???????????????384．3．1檢測原理?????????????????????????384．3．2特征增強(qiáng)場的尺寸?????????????????????394．3．3S11P鏈長度的影響??????????????????????404．3．4S口表面密度對傳感的影響??????????????????414．3．5自組裝層對SERS響應(yīng)的影響????????????????434．3．6定量檢測以及選擇性測試??????????????????434

6、．4本章小結(jié)???????????????????????????45參考文獻(xiàn)?????????????????????????????46致謝???????????????????????????????58附錄攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄???????????????59上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文1．1DNA分子開關(guān)1．1．1前言第1章緒論基于DNA的分子開關(guān)是一種DNA的組裝體，它能在兩個或多個狀態(tài)中以可控的方式實(shí)現(xiàn)可逆的切換。能夠引發(fā)其狀態(tài)切換的外部刺激可以是光、溫度、壓力、電磁場或化學(xué)環(huán)境的改變。因此，DNA分子開關(guān)在對溫度【l】，

7、光致異構(gòu)化【2訓(xùn)，離子【51或蛋白結(jié)合【6，71作出響應(yīng)時，會誘發(fā)狀態(tài)切換。依賴核酸序列的雜交反應(yīng)所驅(qū)使的構(gòu)象變化扮演著一個特殊的角色，這種變化具有高度特異性和精確性，同時會誘使這一序列發(fā)生特殊的狀態(tài)轉(zhuǎn)變，一般稱之為“開關(guān)作用”。1．1．2DNA分子開關(guān)的種類1．1．2．1分子信標(biāo)DNA分子開關(guān)中，最先被應(yīng)用也是最簡單的是分子信標(biāo)(Ⅷs)【8，91。分子信標(biāo)是一種由兩端分別修飾熒光基團(tuán)和猝滅基團(tuán)的單鏈的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。在發(fā)夾構(gòu)象中，熒光和猝滅基團(tuán)相靠近，信標(biāo)的熒光信號微弱。當(dāng)存在與發(fā)夾圈序列互補(bǔ)的DNA或RNA鏈時，發(fā)夾會展開形成一種雙鏈結(jié)構(gòu)。在這種

8、構(gòu)象中，熒光和猝滅基團(tuán)相遠(yuǎn)離，導(dǎo)致熒光信號的增強(qiáng)。為了高靈敏和快速響應(yīng)，分子信標(biāo)的穩(wěn)定性能通過選擇恰當(dāng)?shù)陌l(fā)夾圈大小和莖干部分的長度來實(shí)現(xiàn)優(yōu)化。這種傳感