《基于電化學(xué)dna生物傳感器的核酸檢測新方法研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
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‘重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明巧呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了義中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。一申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)切相關(guān)責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名；日期：九１戶年Ｊ７學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書；本人完全了解重慶醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知巧產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬重慶醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為重慶醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和鶴盤，允許論義被查閱和借閱。學(xué)?？桑酌床紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可Ｌ乂采用影印、（保密內(nèi)容除外），并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索縮印或其他手段保存論文。保密論義在解密后適用本授權(quán)書。論文作者簽名：來每、指導(dǎo)教師壑名：－日期。＾－１＾．：么 目錄英漢縮巧語名詞對(duì)照１中文摘要２英文巧要４論文正文：基于電化學(xué)ＤＮＡ生巧傳感器的核換險(xiǎn)測新方法研究７第一章巧于巧環(huán)護(hù)増巧金納米技術(shù)實(shí)現(xiàn)沙口氏苗快速和巧靈敏檢測的電化學(xué)巧策巧７１引胃７２實(shí)驗(yàn)巧分８３結(jié)巧與討論１１４小結(jié)１９參考文巧２０第二章基于巧巧外切巧…輔助循巧擴(kuò)増和錯(cuò)配型塞環(huán)巧化自組裝技術(shù)離靈和高特異性艷測巧用型ＤＮＡ２４１引胃２４２實(shí)驗(yàn)部分２５３結(jié)果與討論２６４小結(jié)３４的文巧３５文獻(xiàn)綜巧４０＆ｍ５２攻讀碩±期間巧寫的文章目錄５３ 館醫(yī)科大學(xué)碩主巧巧生學(xué)位論文英漢縮略語名詞對(duì)照英文縮寫英文全巧中文全敵ＤＮＡＤｅｏｘｙｒｔｏｏｓｅｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ脫氧梭糖核酸ＲＮＡＲｉｂｏｓｅｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ核糖棱酸ＲＣＡＲｏｌｌｉｎｇｃｉｒｃｌｅａｎｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ滾環(huán)擴(kuò)增ＥＬ－ＩＳＡＥｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂａｎｔａｓｓａｙ酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ＰＣ民Ｐｏｔｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｉｏｎ聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－ＣＦＵＣｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｕｎｉｔｓ菌落形成單位ｇＡｕＮＰｓＧｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ金納米粒子ＩｎｖＡＩｎｖａｓｉｏｎｒｏｔｅｉｎＡＡ侵襲蛋白ｐ－－－ｍｅｒｃａｔｏ－－＾ＭＣＨ６ｐ１ｈｅｘａｎｏｌ６妾蒂基己醇－ＡＰＳｔ－－ＳＴｒｅｐｔａｖｉｄｉｎａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ鏈霉親和素堿性麟酸酶－ａＮＰａ－ｎａｈ－ｐｔｈｙｌｈｏｓｈａ化ａ蔡軟麟酸鹽ｐｐＢＳＡＢｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ牛血清白蛋白ＴＥＭＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃ防ｓｃｏｐｉｃ透射電子顯微鏡ＤＰＶＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｕｌｓｅｖｏｌｔａｍｍｅｔｒｐｙ示差脈沖伏安法ＥＩＳ巨ｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｍｐｅｄａｎｃｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ電化學(xué)阻抗譜ＳＷＶＳｑｕａｒｅｗａｖｅｖｏｌｔａｍｍｅｔｒｙ方波伏安法ＲｅｔＥｌｅｃｔｒｏｎｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ電子轉(zhuǎn)移阻力ＲＳＤ民ｅｌａｔｖｅｓａｎｄａｒｄｄｅｖｉａ１：ｏｎｉｔｉ相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Ｂ；ＢｒＥｌｔｈｉｄｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ漠化乙錠ＥｘｏＩＩＩＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩＩＩ核酸外切酶ＩＩＩＥＲＡ巨ｘｏｎｕｃ－ｌｅａｓｅＩｌｌａｓｓｉｓｔｅｄｔａｒｇｅｔｒｅｃｙｃｌｉｎｇ核酸外切酶ＩＩＩ輔助祀物質(zhì)ａｎｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ循環(huán)擴(kuò)增ＣＨＡＣａｔａｌｙｔｉｃＩｍｉｒｐｉｎａｓｓｅｍｂｌｙ莖環(huán)催化自組裝ＰＡＧＥＰｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｅｌｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ聚丙帰醜胺凝膠電泳ｇｐ１ 醫(yī)科大學(xué)巧壬研維學(xué)位論文基于電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器的孩酸拴測新方法研究摘要ＤＮＡ，脫氧核糖核酸，是體內(nèi)所必需的Ｈ大分子（連同ＲＮＡ和蛋一。白質(zhì)）之，對(duì)所有已知的生命形式至關(guān)重要最近幾年，核酸作為識(shí)別和監(jiān)測生物分子的工具，其應(yīng)用日益増多。傳統(tǒng)的ＤＮＡ檢測方法既費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。因此，建立快速、靈敏和簡便的ＤＮＡ檢測方法是非常有必要的。由于電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器具有使用簡便、響應(yīng)快速、成本低和設(shè)備價(jià)格低廉等獨(dú)特優(yōu)勢，能克服傳統(tǒng)方法的局限化將ＤＮＡ一檢測帶入個(gè)新時(shí)代。本課題主要研究電化學(xué)生物傳感器對(duì)ＤＮＡ檢測的新方法，該方法能夠高靈敏和離特異性的檢測ＤＮＡ，為臨床診斷、食品安全、生物威脅和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域的ＤＮＡ檢測提供有力的工具。本研究主要包括Ｗ下兩部分：１．基于巧環(huán)擴(kuò)増和金納米巧術(shù)實(shí)現(xiàn)沙口氏苗快速和扭錄敏搶測的電化學(xué)巧策路結(jié)合滾環(huán)擴(kuò)增和金納米探針雙重放大技術(shù)一，本研究建立了種快速和超靈敏檢測沙口菌的新穎的電化學(xué)傳感策略。首先，鞭ＤＮＡ被固定在電極表面的探針１特異性捕獲。然后將預(yù)先制備好的環(huán)化產(chǎn)物力口到電極上形成典型的Ｈ明治結(jié)構(gòu)。在ｄＮＴＰｓ和ｐｈｉ２９ＤＮＡ聚合酶存在下，可滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)生微米級(jí)的包含串聯(lián)重復(fù)序列的單鏈ＤＮＡ分子。最后，金納米檢測探針能與滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物特異性互補(bǔ)結(jié)合，導(dǎo)致酶促電。在最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件下化學(xué)信號(hào)的產(chǎn)生，本研究設(shè)計(jì)的電化學(xué)傳感器在ＩＥＤＮＡ濃度為－ｌＯＭ內(nèi)呈ｌＯａＭｐ現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，并且有超髙２ 齡醫(yī)種大學(xué)碩±研觸學(xué)位論文的靈敏度６．７６ａＭ。，此方法被用于實(shí)際樣本牛奶，最低檢測限為同時(shí)ｉ中沙口菌的檢測，最低可檢測６ＣＦＵｍｌ／的細(xì)菌。因此，該電化學(xué)生物傳感器可Ｗ為臨床診斷、食品安全和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域提供強(qiáng)有力的工具。２．基于核巧外切巧…輔助循環(huán)擴(kuò)増和錯(cuò)配型莖環(huán)值化自組裝技術(shù)巧靈蜘巧特異性栓測通用型ＤＮＡ基于核酸外切酶ＩＩＩ輔助循環(huán)擴(kuò)增和錯(cuò)配型莖環(huán)催化自組裝雙重放大策略一，建立了種新穎的高靈敏和特異性的ＤＮＡ檢測方法。在本實(shí)＇－，形成３驗(yàn)中，幫ＤＮＡ首先與莖環(huán)Ｈ０通過堿基互補(bǔ)配對(duì)相結(jié)合平末＇－端平末端進(jìn)而逐步催化去除單核脊酸，。核酸外切酶陽能識(shí)別３釋放一出祀ＤＮＡ和輸出ＤＮＡ。釋放的靴ＤＮＡ又能進(jìn)入下個(gè)雜交和裂解過Ｉ）１，。程（循環(huán)。輸出ＤＮＡ能與莖環(huán)Ｈ結(jié)合打開曲的莖環(huán)結(jié)構(gòu)接一著莖環(huán)Ｈ２與被打開的莖環(huán)Ｈ１結(jié)合，釋放出輸出ＤＮＡ，其能促發(fā)下－Ｈ２復(fù)合物的形成個(gè)莖環(huán)催化自姐裝循環(huán)和Ｈ１（循環(huán)ＩＩ）。最后，金電－Ｈ２復(fù)合物雜交極上的捕獲ＤＮＡ能特異性地與Ｈ１，導(dǎo)致酶促電化學(xué)。ＮＡ濃度信號(hào)的產(chǎn)生在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，本研究設(shè)計(jì)的傳感器在範(fàn)Ｄ－為１００Ｍ５ｎＭ內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，最低檢測限為％ｆｌＶｌ。該方法己成功應(yīng)用于人正常細(xì)胞總ＤＮＡ和血清樣本中ＤＮＡ的檢測。本傳感策略有望成為臨床診斷和治療、病原菌檢測和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域檢額?。保崳姡模危恋膹?qiáng)有力工具。，，，關(guān)鍵詞；電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器滾環(huán)擴(kuò)增金納米粒子核酸外切酶阻，莖環(huán)催化自組裝３ 戯醫(yī)科大學(xué)雨±巧觸學(xué)位論文ＥＬＥＣＴＲＯＣＨＥＭＩＣＡＬ－ＤＮＡＢＩＯＳＥＮＳＯＲＢ乂ＳＥＤＮＵＣＬＥＩＣＡＣＩＤＳＤＥＴＥＣＴＩＯＮＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＡＢＳＴＲＡＣＴＤＮＡ，ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ，ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｍａｊｏｒｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（ａｌｏｎｇｗｉｔｈＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｉｎｔｈｅｂｏｄｙｔｈａｔａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｔｏａｌｌｋｎｏｗｎｆｏｒｍｓｏｆｌｉｆｅ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｅａｒｓｔｈｅｒｅｈａｓｂｅｅｎａｎｙ，ｔｏｏｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｔｈｅｕｓｅｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓａｓａｌｉｎｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎａｎｄｍｏｎｉｔｏｒｉｎｏｆｍａｎｃｏｍｏｕｎｄｓ．ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｇｙｐａｒｅｃｕｍｂｅｒｓｏｍｅａｎｄｔ－ｆｏｒｅｌｉｈａｉｍｅｃｏｎｓｕｍｉｎ．Ｔｈｅｒｅ化ｉｓｕｒｅｎｔｔｏｅｓｔａｂｓｇ，ｇｒａｉｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｉｌｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍ．虹ｏｒｄｅｒｔｏｐ，ｐｉｍｒｏｖｅｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｔｈｅｎｅｗｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｐ，ｂ－ｔｉｏｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄｍｅｈｏｄｓｈａｖｅｂｅｅｎｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｓｏｔｅｎｔｉａｌａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｔｏｐｂｒｅａｋｔｈｅｂｏｔｔｌｅｎｅｃｋｓｏｆｔｈｅｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｓ，ｂｅｃａｕｓｅｔｈｅｙｈａｖｅｄｉｓｔｉｎｃｔａｄｖａｎｔａｇｅｓ，ｓｕｃｈａｓｅａｓｙｔｏｕｓｅ，ｒａｐｉｄｒｅｓｐｏｎｓｅ，ｌｏｗｃｏｓｔａｎｄｉｎｅｘｐｅｎｓｉｖｅｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｉｎｏｕｒｗｏ化ｔｗｏｈｉｇｈｆｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓｈａｖｅｂｅｅｎｄｅｖｅｌｏｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｐ，ｗｈｉｃｈｗｏｕｌｄｂｅｃｏｍｅａｏｔｅｎｔｉａｌｔｏｏｌｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｄｉａｎｏｓｉｓｆｏｏｄｓａｆｅｔｐｇ，ｙ，ｂｉｏｔｈｒｅａｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｍｏｎｉｔｏｒｉｎ．Ｔｈｉｓｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｇｉｎｃｌｕｄｅｓｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｔｗｏａｒｔｓ：ｇｐ１．Ａｎｏｖｅｌｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ說ｕｓｉｎｇｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｒａｐｉｄａｎｄｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｂｙｒｏｌｌｉｎｇｃｉｒｃｌｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄ－ＡｕＮＰＤＮＡｓｒｏｂｅｐＡｎｏｖｅｌｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｅｎｓｉｎｓｔｒａｔｅｗａｓｄｅｖｅｌｏｅｄｆｏｒｇｇｙｐｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｂｙｃｏｍｂｉｎｉｎｇｔｈｅｒｏｌｌｉｎｇｆｉｃａ－ｃｉｒｃｌｅａｍｌｉｔｉｏｎｗｉｔｈＤＮＡＡｕＮＰｓｒｏｂｅ．ＴｈｅｔａｒｅｔＤＮＡｃｏｕｌｄｂｅｐｐｇｓｅｃｉｆｉｃａｌｌｃａｔｕｒｅｄｂｒｏｂｅ１ｏｎｔｈｅｓｅｎｓｉｎｉｎｔｅｒｆａｃｅ．Ｔｈｅｎｔｈｅｐｙｐｙｐｇ４ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩壬研巧生學(xué)位論文ｃｉｒｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｍｉｘｔｕｒｅｗａｓａｄｄｅｄｔｏ拓ｒｍａｔｙｐｉｃａｌｓａｎｄｗｉｃｈｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｉｎ化ｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｄＮＴＰｓａｎｄｐｈｉ２９ＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，化ｅ民ＣＡｗａｓｉｎｉｔｉａｌｌｅｄ－－ｔｏｒｏｄｕｃｅｍｉｃｒｏｍｅｔｉｅｒｌｏｎｓｉｎｌｅｓｔｒａｎｄＤＮＡ．Ｆｉｎａｌｌｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｇｇｙ，－ｌｉｍａｔｐｒｏｂｅＤＮＡＡｕＮＰｓｃｏｕｄｒｅｃｏｎｚｅＲＣＡｒｏｄｕｃｔｔｏｒｏｄｕｃｅｅｎｚｉｃ（）ｇｐｐｙｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｉｎａｌ．Ｕｎｄｅｒｏｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆｇｐ，ｓｎｔｈｅｔｉｃｔａｒｅｔＤＮＡｈａｄｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｆｒｏｍ１０ａＭ化１０Ｍｗｉｔｈａｙｇｇｙｐ＝ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆ６．７６ａＭＳ／Ｎ３．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｅｄｍｅｔｈｏｄｈａｄｂｅｅｎ（）ｐ．ｉｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙａｌｉｅｄ??；〇ｄｅｔｅｃｔ又ａ／ｗｏｗｅ／／口ａｓｌｏｗａｓ６ＣＦＵｍＬｉｎｒｅａｌｐｐｍｉｌｋｓａｍｌｅ．Ｔｈｉｓｒｏｏｓｅｄｓｔｒａｔｅｓｈｏｗｅｄｒｅａｔｏｌ；ｅｎｔｉａｌｆｂｒｃｌｉｎｉｃａｌｐｐｐｇｙｇｐｄｉａｎｏｓｉｓｆｏｏｄｓａｆｅｔａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｍｏｎｉｔｏｒｉｎ．ｇ，ｙｇ２．乂ｎｅｗｍｏｄｅｆｉ＞ｒｈｉｈｌｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｅｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｂａｓｅｄｇｙｐ－ｏｎｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅｉｎａｓｓｉｓｔ；ｅｄｔａｒｅｔｒｅｃｙｃｌｉｎａｍｌｉｆｌｃａｇｇｐ村ｏｎａｎｄｍｉｓｍａｔｃｈｅｄｃａｔａｌｙｔｉｃｈａｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌｐｙＡｎｏｖｅｌｓｔｒａｔｅｇｙｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃ－ｄｅ１ｔｉＤｂｉＩｌｌｔｔ；ｅｃｏｎｏｆＮＡｙｃｏｍｂｉｎｎｇｅｘｏｎｕｄｅａｓｅａｓｓｉｓｂｄａｒｇｅｒｅｃｙｃｌｉｎｇａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈｍｉｓｍａｔｃｈｅｄｃａｔａｌｔｉｃｈａｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌ．Ｉｎｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｐｙｐｙ，ｔｈｅｔａｒｇｅｔＤＮＡｂｉｎｄｅｄｗｉｔｈＨＯ．Ｔｈｅｎ，ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩＩＩｃｏｕｌｄｃａｔａｌｙｚｅｔｈｅｓｔｅｐｗｉｓｅｒｅｍｏｖａｌｏｆｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｒｅｌｅａｓｉｎｇｔｈｅｔａｒｇ巧ＤＮＡａｎｄｔｈｅｏｕｔｐｕｔＤＮＡ．ＴｈｅｒｅｌｅａｓｅｄｔａｒｅｔＤＮＡｗａｓｆｒｅｅｔｏａｒｔｉｃｉａｔｅｉｎ出ｅｎｅｘｔｇｐｐｃｃｌｅｏｆｈｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄｃｌｅａｖａｅｒｏｃｅｓｓＣｃｌｅＩ．ＴｈｅｏｕｔｕｔＤＮＡｙｙｇｐ（ｙ）ｐｃｏｕｌｄｂｉｎｄｗｉｔｈＨＩａｎｄｕｎｆｏｌｄｔｈｅｈａｉｒｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＨＩ．ＦｏｌｌｏｗｉｎＨ２ｐｇｈｂｒｉｄｉｚｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｅｎｅｄＨＩａｎｄ１化ｅｒａｔｅｄｔｈｅｏｕｔｕｔＤＮＡｗｈｉｃｈｙｐｐ，ｃａｅｄａ－ｕｓｎｅｗｃａｔａｌｙｔｉｃｈａｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌｙｃｉｒｃｕｉｔａｎｄｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＨ１Ｈ２ｐｃｏｍｌｅｘｅｓｃｌｅｎ．Ａｆｔｅｒｗａｒｄｓ化ｅｃａｔｕｒｅｒｏｂｅｓｉｍｍｏｂＵｉｚｅｄｏｎ化ｅｐ（Ｃｙ），ｐｐｅｅｃｏｄｅｃｏｕｓｅｃ－ｏｌｄｌｔｒｉｆｉｃａｈｒｉｄｚｅｗｉｅＨＩＨ２ｃｏｍｌｅｘｅｓ．Ｔｈｅｇｌｄｐｌｌｙｂｉｔｈｔｈｙｐ－－ｔ－ｓｒｅｔａｖｉｄｉｎａｌｋａｌｉｎｅｈｏｓｈａｔａｓｅｗａｓｌａｂｅｌｅｄｏｎｔｈｅｃａｔｕｒｅｒｏｂｅＨｌＨ２ｐｐｐｐｐｃｏｍｌｅｘｅｓｂｔｈｅｓｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｎｉｔｉｏｎｏｆａｖｉｄｉｎａｎｄｂｉｏｔｉｎｗｈｉｃｈｒｏｄｕｃｅｄｐｙｐｇ，ｐｅｎｚｍａｔｉｃｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｉｎａｌｒｅａｄｏｕｔ．Ｕｎｄｅｒｏｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｙｇｐ，５ 獻(xiàn)醫(yī)科大學(xué)社研巧生學(xué)位論文ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆｓｙｎｔｈｅｔｉｃｔａｒｅｔＤＮＡｓｈｏｗｅｄｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｆｒｏｍ１００ｇｇｙｆＭｔｏ５ｎＭｗｉｔｈａｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆ９２ｆＭ．ＴｈｅｄｅｖｅｌｏｅｄｍｅｔｈｏｄｈａｄｐｂｅｅｎｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌａｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＤＮＡｉｎｔｏｔａｌＤＮＡｏｆｈｕｍａｎ打ｏｒｍａｌｙｐｐｃｅｌｌｓａｎｄｓｅｒｕｍｓａｍｌｅｓ．Ｔｈｉｓｓｔｏｔｅｍｉｇｈｔｂｅｃｏｍｅａｏｔｅｎｔｉａｌａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｐｇｙｐａｒｏ犯ｈ化ｒＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅａｒｅａｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｄｉａｎｏｓｉｓａｎｄ化ｅｒａｐｐｇｐｙ，ｐａｔｈｏｇｅｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｍｏ凸ｉｔｏｒｉｎｇｉｎｔｈｅ扣ｔｕｒｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒ．ＲｏｌｌｉｎｇｃｉｒｃｌｅａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＧｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩＩＩＣａｔａｌｔｉｃｈａｉｒｉｎｐ，ｐ，，ｙｐａｓｓｅｍｂｌｙ６ 戯醫(yī)科大學(xué)社研觸學(xué)位論文基于電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器的核酸檢測新方法研究第一章基于滾環(huán)礦増和金納米技術(shù)實(shí)現(xiàn)沙ｎ氏苗快速和超靈敏檢測的電化學(xué)新策略－本章內(nèi)容發(fā)表于ＡｎａｌｔｉｃｓＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａ２０１４８４６：４４５０ｙｊ，１引言一ｉ’ｔ３。沙口氏菌，革蘭陰性腸道桿菌，是世界范圍內(nèi)最常見的食源性致病菌之Ｐ１沙口巧菌主要通過動(dòng)物宿主。根據(jù)世界衛(wèi)生組織、污染水或食物傳播給人類（ＷＨＯ）報(bào)道，沙口巧菌每年可造成約７６萬例食源性疾病，其中３２５，０００人次住４［］。院和５０００人死亡。因此，建立快速和高靈敏檢測沙口氏菌的方法是極其必要的目前：，沙口氏菌的檢測方法主要有Ｗ下幾種傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)鑒定法、酶聯(lián)６口］Ｌ］［免疫吸附法化ＩＳＡ）和聚合酶鏈反應(yīng)（ＰＣ民）等。傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法首先將細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，然后通過菌落計(jì)數(shù)和菌落形態(tài)、染色特征、生化反應(yīng)等方法對(duì)７８’［１－Ｉ細(xì)菌進(jìn)行鑒定，該方法可靠，但費(fèi)時(shí)（４７天）耗力。ＥＬＳＡ法是基于抗原抗體特異性反應(yīng)的免疫學(xué)檢測方法，其主要缺點(diǎn)是：清洗過程復(fù)雜、分析策略費(fèi)為和靈敏度不足Ｐ１。與ＥＬＩＳＡ法相比，ＰＣＲ技術(shù)具有快速、簡單和較高的靈敏度等優(yōu)勢，但是其結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。目前實(shí)驗(yàn)室主要應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)對(duì)ＰＣＲＰＣＲ技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室細(xì)擴(kuò)增片段進(jìn)行檢測，由于該技術(shù)的分辨率較低，限制了’５ｉＷ＜１菌檢測中的廣泛運(yùn)用（不足Ｗ檢測１０ＣＦＵｍＬ濃度的細(xì)菌）。為了改善沙口氏菌的檢測技術(shù)，新穎的傳感方法被引入到實(shí)驗(yàn)研究中。電化學(xué)生物傳感器因其’ｉｉｔＷ使用簡便、響應(yīng)快速、成本低和設(shè)備價(jià)格低廉等獨(dú)特優(yōu)勢，能克服傳統(tǒng)方法的局限性，將ＤＮＡ檢測帶入新時(shí)代。在過去幾年中，各種放大方法被用于提高傳感器的靈敏度。在己報(bào)道的方法一一ＤＮＡ中，滾環(huán)擴(kuò)增（ＲＣＡ）是最流行的放大方法之。ＲＣＡ是種等溫的擴(kuò)增ｗｉ一’ｔ＾ｎ過程，能夠在小時(shí)內(nèi)擴(kuò)増出包含上千互補(bǔ)于環(huán)狀模板的串聯(lián)重復(fù)序列ＲＣＡ７ 動(dòng)醫(yī)科大學(xué)祗±研巧生學(xué)位論文操作步驟簡單快速，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件沒有特殊要求，因而比其他擴(kuò)增技術(shù)更有潛ｗ－Ｗｔ質(zhì)成為現(xiàn)有臨床擴(kuò)増方法的替代選擇。迄今為止，ＲＣＡ已被廣泛應(yīng)用于診斷’１９２２ＤＮＡ［］基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域中、ＲＮＡ和蛋白質(zhì)的超靈敏檢測。同時(shí)，多一種納米材料已被用來進(jìn)步提商傳感器的靈敏度，其中Ｗ金納米粒子（ＡｕＮＰｓ）的應(yīng)用最為廣泛ＡｕＮＰｓ具有巨大的比表面積、獨(dú)時(shí)的物理化學(xué)性質(zhì)、良好的ＰＭＳ１生物相容性和導(dǎo)電性等顯著優(yōu)點(diǎn)。一本文基于滾環(huán)擴(kuò)増和金納米探針雙重放大技術(shù)，建立了種快速和超靈敏檢一測沙口氏菌的新方法／？ｖ＾基因是－１上的。位于沙口巧菌致病島種高度保守的致ｐｇｉ病基因。該基因能編碼細(xì)茵侵襲蛋白，與沙口氏菌的毒力密切相關(guān)，因此可ＷＷ，３Ｗ作為沙口巧菌檢測的潛在標(biāo)志物。結(jié)合滾環(huán)擴(kuò)增和金納米探針雙重放大技術(shù)，本研究能極大地提高沙口氏菌檢測的靈敏度，為食源性疾病的預(yù)防和早期診斷提供強(qiáng)有為的工具。２實(shí)驗(yàn)巧分２．１村料和試劑ＤＮＡ寡聚核巧酸由生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成和純化（中國，上海）。－它們的序列樣見表－ＮＰ、ＢＳＡ和娃魚ＤＮＡ１．１。ＭＣＨ、ＳＴＡＰ、ａ精均購買自西格－ｈ奧德里奇公司ｉ２９ＤＮＡ瑪（美國）。ＨＡｕＣｋ是從上海試劑公司購買。Ｐ聚合酶、Ｔ４ＤＮＡ連接酶和ｄＮＴＰｓ購自美國的Ｔｈｅｒｍｏ公司。ＰｒｅｍｉｘＴａｑＶｅｒｓｉｏｎ２．０，ＤＬ５００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ和瓊脂糖均購自寶生物公司（中國大連）。其他所有試劑都是分析純ＱＭ－級(jí)別１８Ｍ，Ｕｌｉ，Ｍｉｌｌｉｏｒｅ進(jìn)行配制。。所有的水溶液均用超純水（＾Ｑｐ）表Ｕ本實(shí)＆中合成的寒技普接々列Ｔｌｅ１ａｂ．１Ｓｅｑｕｅｎ化Ｓｏｆｔｈｅｕｓｅｄｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＇＇餅－ｉｇｏｎｕｄｅｏｔｉｄｅＳｅｑｕｅｎｃｅ３巧）ＦｏｒｗａｒｄｒｉｍｅｒＧＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＣＧｐＲｅｖｅｒｓｅｒｉｍｅｒＴＴＣＴＣＴＧＧＡＴＧＧＴＡＴＧＣＣＣｐｅ－－Ｐｒｏｂ１ＳＨ（ＣＨ２ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡＣＣＧＧＣＣＴＴＣＡＡＡＴＣＧＧＣＡＴＣ）６Ｐｒｏｂｅ２ＡＡＴＡＣＴＣＡＴＣＴＧＴＴＴＡＣＣＧＧＧＣＡＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴＧＡＧＧＡＴＡＧＧＡＣＡＴＴａｒｇ巧ＡＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＣＴＡＴＴＧＡＴＧＣＣＧＶｎＴＧＡＡＧＧＣＣＧＧＴＡＴＴ８ 醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文－ｃｏｍＮｏｎｐｌｅｍｅｎｔａｒＡＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＡＡＴＡＧＡＡＴＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＧＣＴＡｙＣＧＴＧＡＡ－ＣｉｒｃｌｅｔｅｍｌａｔｅＰＣＴＣＡＧＣＴＧＴＧＴＡＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＧＡＴＴＧＴＡＧＧＴＣＡＣＴＣｐＧＡＡＡＣＣＴＧＴＴＡＧＡＡＡＣＴＯｒＧＡＡＧＡＴＣＧＣＴＴＡ了ＴＡＴＧＴＣＣＴＡＴＣ－－Ｄｅ化ｃｔ－ｉｏｎ仍ｂｅＳＨＣＨＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＡＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＴＡＧＴＴＴＴＴＴＢｉｏｔｉｎ（）ｐ２６２．２儀器設(shè)備本實(shí)驗(yàn)的檢測儀器是Ｃ扭６６０Ｄ電化學(xué)工作站（上海辰華儀器有限公司），其中的Ｈ個(gè)電極系統(tǒng)包括：鉆絲電極為對(duì)電極，氯化銀電極為參比電極，３ｍｍ的金電極為工作電極。ＡｕＮＰｓ紫外表征是用ＵＶ（２５５０）紫外分光光度汁（島津）。ＡｕＮＰｓ（ＴＥＭ）Ｈ－７５００電鏡表征采用的是透射電子顯微鏡（透射電子顯微鏡，日本），ＰＣ民ｃ－ｌｅｒｔｈｅｒｍａｌｃｃｌｅｒ（ＢｏＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳＡ）儀器上完成。凝膠電是在ＭｙＣｙｙｉ（Ｂ－ｉｏＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＵＳＡ）記錄。泳的結(jié)果用成像儀，２．３觀米粗子和採針剛備（１）所有器皿用王水浸泡２４小時(shí)，之后用雙蒸水洗凈備用。（２）配制ｌＯＯｍＬ化０１％的ＨＡｕＣＬｔ４Ｈ２〇去離子水溶液，將其置于加熱磁力ｉ４ｍＬＰｌ橫拌器上攪拌，待溶液煮沸后快速加入ｌ％巧樣酸Ｈ納溶液。ＡｕＮＰｓ溶液？，。繼續(xù)攬拌８１０顏色首先變成黑色再逐漸變成酒紅色分鐘后，關(guān)閉熱源并繼’續(xù)攢拌冷卻至室溫，最后放入４Ｃ冰箱備用。（３）?。梗牐蓿欤蹋牐保埃埃牐恚土鸹鶚?biāo)記的檢測探針加入３００陣上述步驟２中配制的‘３２ＡｕＮＰ［１ｓ溶液中，在磁力攬拌器上４Ｃ攬拌１２小時(shí)。（４）在上述步驟３攬拌完的ＡｕＮＰｓ溶液中加入０．５ＭＮａＣｌ老化，攬拌１２?。崳姇r(shí)。、（５）步驟４中的溶液停止攢拌后收集至離屯管，８０００ｒｐｍ離也３０分鐘，去除上清液，所得的ＤＮＡ修飾的金納米探針溶于２ＸＳＳＣ溶液（ｐＨ７．４，含有０．３Ｍ°氯化鋼，０．０３Ｍ巧樣酸Ｈ鋼）中放置于４Ｃ冰箱保存?zhèn)溆?。２．４ＤＮＡ祥品的制備巧ＰＣＲ擴(kuò)増反應(yīng)２乂１細(xì)苗培養(yǎng)計(jì)巧９ ｇｇｇ醫(yī)科大學(xué)肥研巧生學(xué)位論文‘（）７Ｃ恒溫箱中培１將單個(gè)沙口氏菌菌落分區(qū)劃線接種于血平板上，置于３？養(yǎng)１８２４小時(shí)。‘（２）從血平板上刮取單個(gè)細(xì)菌菌落，接種于ＬＢ液體培養(yǎng)基中，巧Ｃ持續(xù)振搖１６小時(shí)。（３）將培養(yǎng)后的細(xì)菌離也（１２０００轉(zhuǎn)離也１０分鐘）后，上清液用移液器吸，取棄去，用無菌超純水洗涂２次后，再用無菌超純水重懸。（４）?。保皞€(gè)ＥＰ管，分別加入９００咕的無菌超純水溶液，將１００咕菌體重‘１懸液加入到各ＥＰ管中并吹吸３次，混勻，即成１０稀釋液。－６－７４（５）用Ｈ角刮護(hù)分別將１００咕１〇，１〇，１０３個(gè)稀釋度的菌液均勻涂抹在Ｈ個(gè)瓊脂平板上？０，，將平板放置２３０分鐘使菌液滲透于平板培養(yǎng)基中再倒置。’Ｃ恒溫箱中培上的菌落數(shù)（６）將瓊脂平板置于３７養(yǎng)２４小時(shí)，計(jì)數(shù)平板目。２．４２細(xì)苗基因組ＤＮＡ巧．?。崳姟常常埃埃盟≈薪庥郏保崳妼⒉煌瑵舛鹊纳晨谑暇糜冢保保捣昼姡缓罅⒓粗糜诒?、在４１：溫度下＾＾１００００轉(zhuǎn)離屯５，緩慢將上清液轉(zhuǎn)移至新的￡口管中，即為，分鐘后‘ＰＣＲ模ＤＮＡ－提取的可用作板的基因組，置于２０Ｃ保存。２．４．３ＰＣＲ擴(kuò)増反應(yīng)ＰＣ艮的最終反應(yīng)體積為５０沖，包含：５．０沁的基因組ＤＮＡ、１．０陣的２０ｎＭｘ的正反向引物、２５ｉＬ的ＰｒｅｍｉｘＴａ（１．２５ＵＤＮＡ聚合酶，２Ｔａ緩沖液，０．４ｍＭ＾ｑｑ‘ｄＮＴＰｓ）和１８Ｌ的水ＰＣＲ：９５Ｃ條件下預(yù)變性３分ｎ。的反應(yīng)條件如下首先是在‘’’鐘，接著９５Ｃ變性３０秒，５１Ｃ退火３０軌７２Ｃ引物延伸３０秒，循環(huán)３５次，°最終７２Ｃ延伸４分鐘，擴(kuò)増的ＤＮＡ產(chǎn)物用２％的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，之后用成像儀顯像。２．５環(huán)化橫板的制備＇ｎ－ＤＮＡ００ｍｏ０ｎｍｏｌ２將１ｌ５端磯酸化的待環(huán)化模板與１０探針混合于１００陣連接緩沖液中（ｐＨ７．５，５０ｍＭＴｒｉｓ，ｌＯｍＭＭｇＣｂ，ｌＯｍＭ二硫蘇糖醇，０．５ｍＭＡ’ＴＰ），再加入０．２Ｕ的Ｔ４ＤＮＡ連接酶，于３７ｒ連接反應(yīng)６０分鐘。然后在６５Ｃ’－１０分鐘滅活Ｔ４ＤＮＡ連接酶，得到的ＤＮＡ環(huán)化模板在２０Ｃ下保存?zhèn)溆?。１０?旅醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文２乂電化學(xué)生巧傳感器的制備（１）將裸金電極用０．０５Ｍｍ的鉛紛處理、洗涂，然后浸入食人魚溶液中１０、分鐘，再取出清洗室溫干燥。（２）將琉基標(biāo)記的１００ｎＭ捕獲探針滴加于上述電極上，置于４ｒ冰箱中過夜固定。（３）將步驟２中的金電極取出，沖洗，用ＭＣＨ封閉１小時(shí)，再次沖洗金電極，然后用娃魚精ＤＮＡ和２％ＢＳＡ混合溶液封閉金電極３０分鐘Ｗ避免非特異性４３３Ｐ’ＤＮＡ］和酶的吸附。’（４）ＰＣＲ產(chǎn)物置于１００Ｃ水浴加熱變性５分鐘，然后立即在冰上渾火３分鐘Ｗ獲得單鏈ＤＮＡ。合成的幫ＤＮＡ用ＳＳＣ稀釋到所需的濃度。（５）將步驟３中封閉后的金電極取出沖洗，在金電極上滴加待測範(fàn)ＤＮＡ溶‘，ｒ液，巧Ｃ反應(yīng)１小時(shí)，然后在金電極上滴加提前制備好的環(huán)化ＤＮＡ模板３７反應(yīng)１小時(shí)。（６）將步驟５中的金電極取出沖洗，加入含ｄＮＴＰｓ和Ｐｈｉ２９ＤＮＡ聚合酶的°３７滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)液，Ｃ擴(kuò)增Ｉ小時(shí)。（７）將步驟６中的金電極取出沖洗，加入用ＳＳＣ雜交液配制的金納米探針，‘３７Ｃ雜交１小時(shí)，用ＤＥＡ緩沖液清洗電極。－°ｉｍＬ－（８）在步驟７中的電極上加入１．２５ｎｇ的ＳＴＡＰ，置于３７Ｃ反應(yīng)３０分？＇－ＮＰ底鐘，用ＤＥＡ緩沖液沖洗后，在化７５ｍｇｍＬ的ａ物溶液中進(jìn)行示差脈沖伏安法（ＤＰＶ）信號(hào)檢測。３結(jié)巧與討論３．１電化學(xué)傳巧器的設(shè)計(jì)原理原理圖Ｕ闡述了沙口菌的傳感檢測過程。首先，範(fàn)ＤＮＡ與電極上固定好的捕獲ＤＮＡ特異性雜交。接著環(huán)化模板被加入到反應(yīng)體系中形成Ｈ明治結(jié)構(gòu)。在ｄＮＴＰｓ和ｐｈｉ２９ＤＮＡ聚合酶存在下，可滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)生微米級(jí)的包含上千互補(bǔ)于金納米探針的串聯(lián)重復(fù)序列的單鏈ＤＮＡ分子－ＡＰ與生物素化的金納米檢測。最后ＳＴ１１ 里慶醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文－探針結(jié)合，作用于底物（ＸＮＰ產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)，該電化學(xué)信號(hào)與視ＤＮＡ濃度成正比例關(guān)系一。此雙重放大策略為沙口氏菌的超靈敏檢測提供了個(gè)嶄新的平臺(tái)。－ＬＪ＿ｌ—ＩｊＰｒｏｂｅ１ｊｊｊ■尸ＴａｒｅｔＪ之’ｊ與ｊｇＰｒｏｂｅ２ｉｎｖＡｅｎｅ（ｇ）１．ＰＮ２９ＤＮＡ齒Ｉ飾ＳＰｈｏｌｍｅｒａｓｅ？ｏｔｎ參ＡｕＮＰｓｉ２９ＤＮＡｐｙ?wèi)簦牐樱裕粒校牐牐拢椋槔В保彪娀瘜W(xué)傳感器檢測沙口氏菌切以基因的原理Ｆｉ１１Ｓｃｈｅｍａｉｃｒｅｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｅｓｉｎｅｄｓｒａｆｏｒ／／７Ｖ４ｄｅｃｔｉｏｎｏｆ５Ｖ／／ｗ０ｗｅ／／ａｇ．．ｔｐｇｔ化ｇｙ／化３．２金納米粒子和金納米探針的表征ＡＮＰ一為了驗(yàn)證制備的ｕｓ的直徑大小、均性Ｗ及金納米探針是否修飾成功，本研究采用ＴＥＭ和紫外可見吸收光譜分別驗(yàn)證ＡｕＮＰｓ和標(biāo)記的納米探針。ＡｕＮＰｓ一１２，合成的電鏡表征如圖．Ａ所示。采用上述方法制備的ＡｕＮＰｓ大小均直徑約為１８ｎｍ左右。圖１．２Ｂ為紫外可見吸收光譜表征圖。如圖所示，曲線ａ為制備的ＡｕＮＰｓ，５２０ｎｍ處有明顯的吸收峰，其溶液為紅色的紫外可見吸收光譜圖在波長為：曲線ｂ為修飾有ＤＮＡ的ＡｕＮＰｓ在加入０．１ＭＮａＣＩ后的紫外可見吸收光譜圖，在５２０ｎｍ有明顯的吸收峰。因?yàn)樾揎椨校模危恋模粒酰危校罂桑自诟啕}離子溶液中穩(wěn)定存在，其溶液依然為紅色；曲線Ｃ是未修飾ＤＮＡ的ＡｕＮＰｓ在加入化１ＭＮａＣＩ后的紫外可見吸收光譜圖，在５２０ｎｍ幾乎沒有吸收峰，且其溶液迅速變?yōu)楹谏?，由此可見未?jīng)修飾的ＡｕＮＰｓ在加入高鹽離子溶液后會(huì)形成聚集現(xiàn)象。１２ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩王研宛生學(xué)位論文—？ＢＡ廠？ＩＩ？－朱ｂＣ！？０．２？擴(kuò)？挺？Ｉ？％Ｊ４００５００６００、、ａ＇ｏｉｃｎｇｉｈ（ｎｍ）圖１．２（Ａ）ＡｕＮＰｓ的逢射電化表征；（Ｂ）紫外可見吸收光譜表征；（ａ）ＡｕＮＰｓ；（ｂ）加入０．１ＭＮａＣＩ溶液的修飾有ＤＮＡ的ＡｕＮＰｓ；（ｃ）加入０．１ＭＮａＣＩ溶液的ＡｕＮＰｓＦ２ＡＴＥＭ－ｉＡＮＰＢＵＶＶｉｓａｂｏｔｉｏｎＳｅｃｔｒａａＡＮＰｂｈｉ．１．ｍａｅｏｆｕｓ．ｓｒｏｆｕｓＡｕＮＰｓｗＨｇ（）ｇ（）ｐｐ（），（）ＳＨ－ＤＮＡ－ａｆｔｅｒａ加Ｗｏｎｏｆ０．５ＩＶｌＮａＣＵｃＡｕＮＰｓｗｉｔｈｏｕｔＳＨＤＮＡａｆｔｅｒａ加ｉｔｉｏｎｏｆ０．５Ｍ（）ＮａＣＩ３３傳感器的電化學(xué)表征一本實(shí)驗(yàn)用電化學(xué)阻抗法（ＥＩＳ）和方波伏安法（ＳＷＶ）來驗(yàn)證電極毎步的修３－ｗ－飾情況，ＦｅＣＮ６被用作氧化還原電位測試探針，。在ＥＩＳ中阻抗圖譜可用來［（）］一計(jì)算電荷轉(zhuǎn)移阻力（Ｒｅｔ）。如圖１．３Ａ，裸金電極（曲線ａ）阻抗幾乎呈條直線，這說明處理后的裸金電極有良好的電子傳導(dǎo)性。當(dāng)捕獲探針自組裝到金電極上后，Ｒｅｔ得到增加（曲線ｂ）。這是由于單鏈核巧酸帶負(fù)電荷的礎(chǔ)酸鹽骨架阻礙了電子在－－３／４電極和Ｆｅ（ＣＮ）６溶液中的轉(zhuǎn)移。當(dāng)範(fàn)ＤＮＡ與捕獲探針雜交后，金電極上負(fù)電荷一的增加導(dǎo)致民ｅｔ進(jìn)步增加（曲線Ｃ）。而當(dāng)ＲＣＡ完成后，Ｒｅｔ得到更為顯著的增加（曲線ｄ），這也證明了ＲＣＡ的成功完成。最后，加入金納米檢測探針與ＲＣＡ產(chǎn)物結(jié)合后，Ｒｅｔ明盈降低（曲線ｅ）。此現(xiàn)象歸因于納米材料具有較大的比表面積，結(jié)果如圖１３Ｂ和能加速電子傳遞。同時(shí)我們也用ＳＷＶ進(jìn)巧了傳感器的表征．所一一示，ＳＷＶ與ＥＩＳ的結(jié)果呈現(xiàn)出良好的致性，這證明本實(shí)驗(yàn)的每步都得到了準(zhǔn)確的修飾。１３ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩：生學(xué)位論文２〇ｔＩ１１－６０１ＡＢ八養(yǎng)謹(jǐn)０！２‘、４．０００．０．２４＇Ｚ（Ｋｎ）ＫＶ（）困．３Ｓ（Ａ）和ＳＷＶ（Ｂ）：ａ）ｂ）１在鐵氣化舒溶化中電板的表征巧Ｏ裸金電板；捕獲探針修飾后的電板；Ｃ）電化學(xué)傳惠器與耗ＤＮＡ雜交后；ｄ）ＲＣＡ后；ｅ）與金納米撿測探針反應(yīng)３－Ｍ４Ｆｉ１３凹ＳＳＷＶｉ０４ＭＫＣＩｉｉｎＦｂａｌ．．Ａａｎｄｎ．ｃｏｎｔａｎ０．５ｍｅＣＮａｔａｒｅｅｅｃｔｒｏｄｅｇ（）（巧ｇ（）６），ｂｃａｔｕｒｅＤＮＡｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅ，ｃｃａｔｕｒｅＤＮＡｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｆｔｅｒｈｂｒｉｄｉｚｅｄｗｉｔｈ））ｐｐｙｔ－ｔ：ａｒｅＤＮＡｄａｆｔｅｒＲＣＡａｎｄｅ扣ｒｔｈｅｒｒｅａｃｉｏｎ、ｖＵｈＤＮＡＡｕＮＰｓｇｔ，））３．４傳感活的放大效能本方案中，ＡｕＮＰｓ具有重要的放大作用。１００ｆＭ的鉛ＤＮＡ在有民ＣＡ和ＡｕＮＰｓ存在時(shí)比僅有ＲＣＡ的ＤＰＶ信號(hào)大得多。這是因?yàn)椋粒酰危校缶哂休^大的比表面積，能很好的輔助電子轉(zhuǎn)移（圖１４）。因此，建立的生物傳感平臺(tái)能夠特．異和超靈敏的測定靴ＤＮＡ。＊１２１１ＲＣＡ＋ＡｕＮＰｓｉ…■Ｊ＿＿■圓口—困１．４１００ｆＭ的把ＤＮＡ在有ＲＣＡ和ＡｕＮＰｓ和有ＲＣＡ無ＡｕＮＰｓ與空白對(duì)照的ＤＰＶ信號(hào)對(duì)比枉狀圖Ｆｉ１．４ｍａｒｉｓｏｎｏｆＤＰＶｅａｋｃｕｒｒｅｎｓｉｎｈｅａｂｓｅｎｃｅｂｌａｎｋ化ｅｒｅｎｃｅｆ１００（Ｍｇ－Ｃｏｐｐｔｔ（）ａｎｄｐｓｅｏ＊－化ｉｇｅｔｗＵｈＲＣＡｗＵｈｏｕｔＡｕＮＰｓａｎｄＲＣＡＡｕＮＰｓ（）１４ 科大淵壬研巧生學(xué)位論文３．５實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化為了獲得最佳的分析性能，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。作為民ＣＡ啟動(dòng)子的環(huán)化模板濃度對(duì)傳感器的性能有極大的影響。因此，環(huán)化模板的濃度最先被優(yōu)化。隨一著環(huán)化模板濃度的増加，ＤＰＶ響應(yīng)值也逐步增加，在２０ｎＭ時(shí)趨近于個(gè)恒定值，因此該濃度被選作環(huán)化模板的最優(yōu)濃度（圖１．５Ａ）。民ＣＡ的時(shí)間同樣也是一個(gè)重要參數(shù)本實(shí)驗(yàn)的。當(dāng)環(huán)化模板的濃度為２０ｎＭ時(shí)，ＲＣＡ信號(hào)隨著時(shí)間的增加而逐步增加，在６０分鐘時(shí)趨近最大值。６０分鐘被選為ＲＣＡ的－最優(yōu)時(shí)間（圖１．５Ｂ）。如圖１．５Ｃ所示，底物ａＮＰ的ＤＰＶ信號(hào)在－ｉ之前增加迅速－ｍＬ，而后電化學(xué)信號(hào)達(dá)到平臺(tái)，因此本實(shí)驗(yàn)ａＮＰ的最優(yōu)濃度為＇０＇．７５ｍｇｍＬ〇￣￣＂■ｉＩ１Ｉ?。桑墸裕蓿崳姡谝唬ⅲВ粒墸牐牐拢墸?？廠Ｉ；＾廣。．＂「＂．ｆ７／■－．Ｉ＂Ｌ，ｒ１Ｉ１１０ＩＩ２０說《５１ＭＷ２Ｓ＃ＭＭ１Ｍ１．４ＯＪＵ＊Ｃ＇ＭｃｃｉｔｎｔｉＭ（ｉＭ）ＴｉａｃｎｉＲ）ＣｎｅｏｒｔｒｉｔｉＭ＾ＭｎｉＬ｝（（１－．５■環(huán)化模板濃度ＮＰ濃困實(shí)Ａ條件的優(yōu)化：Ａ；瓦ＲＣＡ?xí)r間；Ｃ．底我ａ度Ｆｉｇ．１．５ＤｅｐｅｎｄｅｎｃｅｓｏｆＤＰＶｐｅａｋｃｕｒｒｅｎｔｓｏｎｃｉｒｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｍｉｘｔｕｒｅｃｏｎｃｅｉＵｒａｔｉｏｎ（Ａ），ＲＣＡ化３－（：１；〇１１ｔｉｍｅ（Ｂ）（ｉＮＰｃｏｎｃｅｎ化ａｔｉｏｎＣｗｈｅｎｏｎｅｔｉｌｔｈｅ，（），ｐａｒａｍｅｅｒｃｈａｎｇｅｓｗｈｅｏｔｈｅｒｓａｒｅｕｎｄｅｒｔｈｅｉｒｏｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｉｏｎｓｐｔ３．６傳感器的分析性能３．６．１傳巧器的巧巧性在最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件下，ＤＰＶ峰電流隨著合成的祀ＤＮＡ濃度的不同而產(chǎn)生的變化見圖１．６。由圍所示，ＤＰＶ響應(yīng)信號(hào)隨著祀ＤＮＡ濃度的增大而增大。圖１．６的插圖展現(xiàn)了在ＩＥＤＮＡ濃度為，ｌＯａＭ到ｌＯｐＭ范圍內(nèi)ＤＰＶ響應(yīng)信號(hào)與範(fàn)ＤＮＡ濃＝／＞＜度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。相應(yīng)的回巧方程是ｌＡ０．７２＋０．１４ｌｃｆＭ，相關(guān)系（＾）ｇ（）數(shù)為化９９７２，最低檢測限為６．７６ａＭ，遠(yuǎn)低于之前報(bào)導(dǎo)的其他檢測沙口氏菌的方法５１ 重慶醫(yī)科大學(xué)巧±研充生學(xué)位論文Ｐ’Ｗ（表１．２）。本傳感器的超高靈敏度主要?dú)w因于ＲＣＡ和金納米探針的雙重放大作用。０．．１０２０．３Ｅ（Ｖ）圖．６電化學(xué)傳感器檢測００．０１０１１１００１０１，，．，，，００和１００００１＾耗〇？乂的〇口￥圖插圖：〇戶￥，峰電流與於ＤＮＡ濃度對(duì)數(shù)的校準(zhǔn)曲線Ｆ＊ｉ．１．６ＤＰＶｒｅｓｏｎｓｅ０００化ｇｐｔｏ．１１１１００１０００１００００ｆＩＶＨａｉｅｔＤＮＡｆ，，，，ｒｏｍａ化．Ｉｎｓｅｔ：，，ｇ（ｇ）ＣａＨｂｒａｔｉｏｎｐｌｏｔｏｆＤＰＶｐｅａｋｃｕｒｒｅｎｔｖｓｌｏｇａｒｉ化ｍｏｆｔａｒｇｅｔＤＮＡｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－Ｔｈｅｅｒｒｏｒｂａｒｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｅａｃｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ３．６．２傳巧強(qiáng)的特異性和重現(xiàn)性為了研究傳感器對(duì)不同ＤＮＡ序列的特異性，１７，ＤＮＡ如圖．所示用傳感器分別檢測１００ｆＭ和１０ｐＭ的兩種不同的寡核昔酸（完全互補(bǔ)的寡核昔酸和非完全互補(bǔ)的寡核昔酸）。完全互補(bǔ)的寡核巧酸的ＤＰＶ響應(yīng)值遠(yuǎn)大于非完全互補(bǔ)的寡核昔酸和空白的響應(yīng)值。此結(jié)果表明，本分析方法能有效地區(qū)分不同的ＤＮＡ序列，表現(xiàn)出很好的選擇性。為了評(píng)價(jià)傳感器的重復(fù)性，ＩｐＭ的合成視ＤＮＡ被檢測了５次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（ＲＳＤ）小于５％，這表明本方法有可接受的再現(xiàn)性。１６ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩壬研巧生學(xué)位論文－１６—１＾Ｃｏｍｐｌａｆｎｅｎｔ＾￣￡〇ｍｔＮｏｎ）【ｅｍｅｎ（■ＨＢｌａｎｋ旺ｌＯｐＭｌＯＯｆＭ困１．７電化學(xué)傳感器檢測把板每酸序列、非完全互補(bǔ)的寡板普酸序列和空白對(duì)照的ＤＰＶ響應(yīng)枉狀困，各孩背酸的濃度分別為ｌＯＯｆＭ和ｌＯｐＭＦｉｇ．１．７ＣｏｍｐａｉｉｓｏｎｏｆＤＰＶｐｅａｋｃｕｒｒｅｎｔｓａｆｔｅｒｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｗｋｈ１０ｐＭａｎｄ１００ｆＭｏｆａｒｅｔｏｏｎｕｃｔ－ｔｇｌｉｌｅｏｉｄｅｓｎｏｎｃｏｍｌｅｍｅｎｔａｒｏｌｉｏｎｕｃｉｅｏｔｉｄｅｓａｎｄｂｌａｎｋｇ，ｐｙｇ３．７實(shí)際樣本中沙口巧茜的檢測為了評(píng)價(jià)研制的生物傳感器在實(shí)際樣本檢測中的分析性能，培養(yǎng)的沙口氏菌８ｉ，０６ｘ被接種到牛奶中濃度從到ｌ〇ＣＦＵｍＩ；。將牛奶樣品經(jīng)過預(yù)處理后，對(duì)每個(gè)濃度沙口氏菌所提取的基因組ＤＮＡ進(jìn)行ＰＣＲ。擴(kuò)增出的ＰＣＲ產(chǎn)物為７５ｂｐＤＮＡ條帶，瓊脂糖凝膠電泳顯像后如圖１８．Ａ所示。由于漠化乙錠（ＥｔＢｒ）對(duì)于單鏈ＤＮＡ－５ｉ的染色效率很低，所Ｗ凝膠電泳不能有效的鑒定低于６ｘＣＦｌ〇ＵｍＬ的沙口氏菌的ＰＣ民擴(kuò)增產(chǎn)物，。同時(shí)本文建立的電化學(xué)ＤＮＡ傳感器也被用于分析沙口氏菌８ｉ的變性ＰＣＲ產(chǎn)物（０到６ｘｌ〇ＣＦＵｍＬ；）。不同濃度的沙口氏菌的電化學(xué)響應(yīng)值５－ｉ１８Ｂ１．８Ｂｘ見圖．。圖的插圖展現(xiàn)了在沙口氏菌濃度為６到６ｌ〇ＣＦＵｍＬ范圍內(nèi)，ＤＰＶ響應(yīng)信號(hào)與沙口氏菌濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為化９９８９。本研巧－建立的傳感策略能識(shí)別實(shí)際牛奶樣品中低于ｉ６ＣＦＵｍＬ的沙口民菌，這比之前報(bào)３４－３８，道的其他沙口氏菌的檢測方法要低得多Ｗ］（表１．２）。為了驗(yàn)證該傳感器在實(shí)際樣本中的特異性，對(duì)四種不同細(xì)菌的ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行了檢測。該四種細(xì)菌分別為沙口氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌。如圖１．８Ｃ所示，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)與空１７ 置慶醫(yī)科大學(xué)棵±研巧生學(xué)位論文白響應(yīng)信號(hào)相近，且明思小于沙鬥氏菌的電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)。這些結(jié)果說明本傳感器具有很好的特異性。傳感器的高靈敏度和高特異性能推動(dòng)其在實(shí)際中的應(yīng)用。０ｌｉ，｜ＩＩ：ｉａｂｃｄｅｆｇｈｉ陽ａｎｋａｂｃｄｅ８－Ａｘｉ田１．８（）０到６ｌ〇ＣＦＵｍＬ沙口氏苗的ＰＣＲＢ產(chǎn)Ａ的電沐巧；（）電化學(xué)傳患巧檢測的８－１ｘ巧號(hào)柱化巧插困：ＤＰＶ峰電洗與沙口氏巧濃度對(duì)數(shù)的枝準(zhǔn)曲巧：（Ｃ）６ｌ〇ｃＦＵｍＬ的沙，口氏巧（ａ、大巧押苗ｂ、金黃Ｃ、ｄ來空白對(duì)照（ｅ（）色葡巧球巧（）肺炎鏈球菌（））＊Ｆｉ．１．８ＡＧｅｌｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓｈｏｔｏｓｏｆ５００ｓｉｚｅｍａｋｅｒＭａｎｄＰＣＲｒｏｄｕｃｏｆ６ｘ１０ｇ（）ｐｐ咕，ｔｓ（）ｐ，．７６５４＇２ｘｘｘｘｘｉｉａ６ｘｌ〇ｂ６ｌ〇ｃ６ｌ〇ｄ６ｌ〇ｅ６ｘｌ０ｆ６１〇６ｌ〇ｈｉＣＦＵｍＬ（，，），（，，６ｏｆ）（）（（），），（）化）（），（）Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ．ＢＤＰＶａｋｃｕｒｒｅｎｔｓｒｅｓｎｄｉｎｔｏＰＣＲｒｏｄｕｃｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｓｅｒｉａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｓ（）ｐｅｐｏｇｐ８－ｘｉｏｆＳａｌｍ饑ｅｌｌａｉｎ也ｅｒａｎｇｅｏｆＯｔｏ６１〇ｃｐｕｍＬ．ＩｎｓｅｔＰｌｏｔｏｆＤＰＶｐｅａｋｃｕｒｒｅｎｔｖｓｌｏｇａｒｋｈｍｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏａ（Ｃ）ＤＰＶｐｅａｋｃｕｒｒｅｎｔｓｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ化ＰＣＲｐｒｏ化ｃｔｓｏｆ＊＇ｘｍＬ＊６１０ＣＦＵｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａａＥ．ｃｏｌｉｂ，ｓｔａｈｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｃＳｔｒｅｔｏｃｏｃｃｕｓ（），（）ｐｙ（）．ｐａｅｕｍｏｎｉａｅｄａｎｄｂｌａｎｋｅｐ（）（）１８ 館區(qū)科大學(xué)社研巧生學(xué)儉論文表１．２本方法與其他色報(bào)道的沙口氏巧拴測方法的對(duì)化Ｉｋｂｌｅ１，２Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｒｏｐｏｓｅｄｍｅｔｉｉｏｄａｎｄｏｔｈｅｒ巧ｐｏｒｔｅｄｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓｆｏｒ化化ｃｔｋｍ彷ｆｅ化Ｉ＇＇＊＾Ｂｉｏｓｅｎｓ腫ＰｌａｔｆｏｒｍＢｉｏ－ｒｅｃｅｔｏｒｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎＬＸ）ＤＬＬＯＤＣＦＵｍＬＲｅｆ．ｐ（）（）ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＯｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ３ｆＭ３０２ｇ［］２ＳＰＯｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ０．５ｎＭｌ〇１０民ｇ［］＾－Ｍｎｔｏｔ＞＜ｅｅｌａｓｉｃＥ２ｈａｇｅ５１０［３４巧ｐ］３—－ＡＦｌ〇化ｅｒＯｐｔｉｃｎｔ化ｏｄｙ［３５］］Ｅ—ＳＭＯｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＡｎｔ化ｏｄｙ［１習(xí)ｃｈｒｏ打０ａｎｅｒｏｍｅｔｆ）（＾ｙ］－巨ｌｅｃｔｒｉｃａｌｉｍｅｄａｎｃｅＡｎｔｉｂｏｃｆｙｌＯ３６ｐ［］－－ＳｃｒｅｅｎｐｒｉｎｔｅｄｃａｒｂｏｎＡｎｔｉｂｏｄ１４３［１３ｙ］ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ＊ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＰＶ）Ｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ６．７６ａＭ６Ｔｈｉｓ（ｇｓｕｄｔｙ４小結(jié)一結(jié)合滾環(huán)擴(kuò)增和金納米探針技術(shù)，本文建立了種超靈敏和快速檢測沙ｎ氏菌的新方法。該放大策略能極大的提高祀ＤＮＡ檢測的靈敏度至６．７６ａＭ。同時(shí)本方法已成功用于沙口氏菌變性ＰＣＲ產(chǎn)物的檢測，能識(shí)別實(shí)際牛奶樣品中低于６－ＣＦＵｍＬｉ的沙口氏菌，本文建立的策略能為臨床診斷、食品安全、生物威。因此一個(gè)簡單脅和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域病原菌的檢測提供、低成本、通用和強(qiáng)有力的工具。１９ 店科大學(xué)巧女研巧生學(xué)位論文參考女獻(xiàn)＊ｔＩＰｅｎＨＳｈｅｌｅｆＬＡ．Ａｕｔｏｍａｔｅｄｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｅｃｔｉｏｎｏｆｌｏｗｌｅｖｅｌｓｏｆ化似切６［］ｇ，Ｉ－ａｎｄＳ幻／／ｗｏｒｔｃ／／幻ｅｉｎ技ｏｄｓＪ．ｎｔ．Ｊ．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００１６３３：２２５２．［］，，）３３（巧ＷａｎｇＺｔＸｕＨ，ＷｕＪ，ｅｔａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ沉ｆ／／ｗｏ打ｅ化ｒｗｉｔｈｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｔｔＦｏｏｄ－ｂ１１１２５７７９ｉｏｃｏｎｕａｅｄｎａｎｏａｒｉｃｌｅｓｒｏｂｅ．Ｃｈｅｍ．２０：７８４．ｊｇｐｐ陰，，口）ｓｅ－ｂａｓｅｄｍｅｈｏｄｆｏｒ－３ＯｌｎＪＥ．ＤＮＡｔｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ仿ｏｄｂｏｒｎｅｂａｃｔｅｒｉａｌａｔｈｏｅｎｓＪ．［］ｐｇ［］Ｆｏｏｄ－－Ｒｅｓ．Ｉｎｔ．２０００３３３４：２５７２６６．，，（）４ＷＨＯＦｏｏｄＳａｆｅｔｙａｎｄＦｏｏｄｂｏｍｅＩｌｌｎｅｓｓ巧Ｂ／ＯＬ．２０１１［］，］，ｈｔ巧：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ＭｅｄｉａＣｅｎｔｒｅ／拉ｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ２３７／ｅｎ／．５ＳｄｉｎｅｉｄＡＤＲｏｄｒｉｕｅｓＫＩ＾ＣｈｅｍｅｌｌｏＤｅｔａｌ．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡ］，ｇ，［，＊說如幻位?。牐簦瑁澹牐洌澹簦澹悖簦椋铮睿牐铮妫牐博柷桑叮椋睿牐悖瑁妫悖耄澹睿牐恚澹幔簦觯拢颍幔牐剩牐停椋悖颍铮猓椋铮欤玻埃埃?，３７：［叮，－％５３５０．－ｅｎｃｌ６ＣｉａｒｉｎｉＢｏｒｄｅＣＣｏｕｒｔｏｉｓＳＬａＳｃｏａＢ．Ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓａｓｖｉａｂｉｌｉｔｍａｒｋｅｒｓｆｏｒ，［］，ｙ－ｂａｃｔｅｒｉａｄｅｔｅｃｔｉｉｏｎｕｓｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｏｏｌｓＪ．ＦｕｔｕｒｅＭｉｃｒｏｂｏｌ．２００９：４６４．ｇ［］，，）５７ＴｒｋｏｖＭ，ＡｖｕｇｔｉｎＧＡｎｉｍｒｏｖｅｄ１６ＳｒＲＮＡｂａｓｅｄＰＣ民ｍｅｔｈｏｄｆｂｒｔｈｅｓｅｃｉｆｉｃ［］ｇｐｐ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉ２００３ｏｆＳａ／ｚｗｏｗｅ／／口ｅｎｔｅｒｉｃａ．Ｉｎｔ．Ｊ．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｏｌ．８〇：７５．［Ｊ，６７］，ｙ）間ＲｏｄａＡ，ＭｉｒａｓｏｌｉＭ，ＲｏｄａＢ，ｅｔａｌ．Ｒｅｃｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎｒａｐｉｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄｂｂａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓｆｂｒｆｏｏｄｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｄｅｔｅｃｔｉｏｎ口］？Ｍｉｃｒｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ－－２０１２１７８１２：７２８．，，（）ｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈＫＧｏｋｈａｅＣｏｎｔｒａｃｔｏｒＡＮｏｖ＂ｌ民Ｓｅｔａｌ．ｅｌｌａｂｅｌｆｒｅｅＤＮＡ口］Ｋｙ，，Ｑ，－ｓｅｎｓｏｒｓｂａｓｅｄｏｎｏｌ３，４ｅ化ｌｅｎｅｄｉｏｘｔｈｉｏｈｅｎｅＣｈｅ?。牐茫铮恚恚椋椋睿玻埃埃矗罚海崳姡ǎ刍?，ｐｙｙｙｐ－８２０８２１．ＺｈａｎａｎＹＲＬ－－１０ＤＣｉｅｔａｌ．Ｌａｂｅｌｆｒｅｅａｎｄｈｉｈｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｆ］，Ｙ，ｏｎｏ，Ｑ［ｇｇＳａｕｓａｓｕｒｃｅａｓｍｏｎｒｅｏｎａｎｃｅ－ｓｓｅｎｓＪｌｍｏｎｅｌｌａｉｎｇ色ｐｌｓＤＮＡｂａｅｄｂｉｏｏｒ［Ｊ］．．ｔ－－Ｂｂｅｃｈｎｏｌ．２０１２１６０４：１２３１２８．，，口）ＩＩＬｉｅｂａｎａＳＬｅｒｍｏＡＣａｎｒ）〇ＳｅｔａＬＭａｎｅｔｏｉｎｕｎｕｎｏｓｅａｒａｔｉｏｎｏｆａｔｈｏｅｎｉｃ［］，，ｙ，ｐ５ｇｐｇｂａｃｔｅｒａａｎｄｅｃｔｒｏｃｈｅｍｃａｍａｔｏｅｎｏｅｎｓｎｏｆｅｏｕｂｅ－ｔａｅｄａｍｃｏｎｉｌｅｉｌｇｎｅｇｓｉｇ化ｄｌｇｇｐｌｉ２００９８－Ｊ．ｎａｌ．Ｃｈｅｍ．１１４；５８１２５８２０．［］Ａ，，（）［１２］ＳａｌａｍＦ，Ｔｏ化ｉｌｌＩＥ．ＤｅｌｅｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍｕｓｉｎｇａｎ２０ 庶醫(yī)科大學(xué)巧古研她學(xué)位論文ｅＢ２００９－ｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｍｍｕｎｏｓｅｎｓｏｒＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．ｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２４：２６３０２６３６．［］，，巧）１ｎｓｏＡＳ－ＬＢｒａ艮Ｃｅｔａ３Ａ仿Ｐ紅ｅｚ６ｐｅｚＦａｉｌｅｃｔｒｏｃｔｅｃｔｏｎｏｆｌ．Ｅｈｅｍｉｃａｌｄｅｉ［］，，，ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｕｓｉｎｇｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓＵ］．Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２０１３４０１：，，（）－１２１１２６．１４ＦｉｒｅＡＸｕＳ．ＲｏｌｌｉｎｒｅｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔＤＮＡｃｉｒｃｌｅｓＪ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ［］，ｇＱｐ［］－Ｕ．．Ｓ．Ａ１９９５９２１０：４６４１４６４５．，，（）１５ＳｃｈｗｅｉｔｚｅｒＢＲｏｂｅｒｔｓＳＧｒｉｍｗａｄｅＢ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉｌｅｘｅｄｒｏ化ｉｎｒｏｆｉｌｉｎｏｎ［］，，ｐｐｐｇｓｂｒｏ－ｔＮａｔ良ｔ２００２２０ｍｉｃｒｏａｒｒａｌｌｉｎｃｉｒｃｌｅａｎｌｉｆｉｃａｋ）打？ｉｏｅｃｈｎｏｌ．４：ｙｙｇｐ［叮，，（）－％５３巧．ｔ［１６］ＭｕｒａｋａｍｉＴＳｕｍａｏｋａＪＫｏｍｉａｍａＭ．Ｓｅｎｓｉｉｖｅｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ，，ｙｎｕｃｅｃ－ａｃｓｅｕｅｎｃｅｒｍｅｒｅｎｅｒａｔｏｎ－ｒｏｃｒｃｅａｍｉｃａｔ）打ＮｕｃｅｃｌｉｉｄｑｂｙｐｉｇｉＵｉｎｇｉｌｐｌｉｆｋ町ｌｉＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２００９，巧（３）：ｅｌ９．１７ＬｉＪＳＤｅｎＣｈｕＸｅｔａｌ．Ｒｏｌｌｉｎｃｉｒｃｌｅａｒｊｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｏｌｄ［］，ｇＴ，，ｇｕｇｎａｎｏａｒ－ｔｃａｒｅａｔｅｓｆｏｒｌｓｅｎｓｔｉｖｅｉｄｅ打ｔｆｉｃ洶ｎｕｃｅｏｔｉｄｅｐｉｆｅｇｇｇｈｉｇｈｙｉｉｋｍｏｆｓｉｎｇｌｅｌＡ１０８２７－ｏ：２１１１ｌｍｏｒｈｉｓｍｓＪ．ｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２０８２８６．ｐｙ，，（）ｐ［］［１８］ＺｈｏｕＸＭ，ＳｕＱ，ＸｉｎｇＤ．Ａｎｅｆｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔａｓｓａｙｆｏｒｈｉｇｈ化ｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｅｒｃｕｒｙＩＩ）ｂａｓｅｄｏｎｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｒｏｌｌｉｎｃｉｒｃｕｌａｒａｎｒｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．（ｇ＾［］２０－ＡｎａＬＣｈｉｍ．Ａｃｔａ１２７１３：４５４９．，，ＳＪｔＩｔＤＮＡｌＳｃｈｗｅｉｔｚｅｒＢＷｉｌｔｓｈｉｒｅＬａｍｂｅｒｔｅａｌ．ｍｍｕｎｏａｓｓａｓｗｉｈｒｏｌｌｉｎｃｉｒｃｌｅ＾，［，，ｙｇ過ｎｌｔｔｐｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ａｖｅｒｓａｉｌｅｐｌａｔｆｏｒｍｆｏｒｕｋｒａｓｅｎｓｈｉｖｅ泣打ｉｇｅｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎＪ．Ｐｒｏｃ．［］＇ＮｔＬｃ－ａＡｃａｄ．Ｓｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０００９７１８：１０１１３１０１１９．，，（）口０］Ｃｈｅ打ｇＷ，ＹａｎＦ，ＤｉｎｇＬ，ｅｔ過１．Ｃａｓｃａｄｅｓｉｇｎａｌａｎｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｓｕｂａｔｏｍｏｌａｒｒｏ化ｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂｒｏｌｌｉｎｃｉｒｃｌｅａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｕａｎｔｕｍｄｏｔｓｐｙｇｐｑＪＡ２０１０－ｔａｉｎ．ｎａＬＣｈｅｒａ８２８：３３３７３３４２．ｇｇｇ［］，，（）－ｍ２１Ｂｉｕｍｂｂｅｒｏｔｅｃａａｄｅｏｔｈｍｔｏｎ：ｉＳＣｕｉＹＹＬＬＤｌｌｂｅｅｄｉａｄｓｃｉｓｅｒｍａｌａｌｉｆｉｃａｉＡ［］，，ｐｐｎｏｖｅ－ｌｓｔｒａｔｅｆｂｒｅｌｆｒｅｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓａｎｄａｌｉｃａｔｏｎ化ｒｅａｇｙｌａｂｉ校ｐｐｉｌｍ－ｓａｎ）ｅａｓｓａＡｎａＬＡｃｔａ２０：７４：５ｌｙ［Ｊ］，Ｃｈｉ．，１３７６０６９．，２ｕａｎｇ１＾ＪＪｈｅｎｅｔａＬ民ｏｉｌｉｎｃｈａｉｎａｍＵｆｉｃａｉｏｎｂａｓｅｄｓｉｎａ＾ｅｎｈａｎｃｅｄＷｕ，ＺｇＬｇｔｇ［句Ｈ，ｐｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌａｐｔａｓｅｎｓｏｒ仿ｒｕｋｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏ打ｏｆｏｃｈｒａｔｏｘｉｎＡＰ］．ＡｎａＬＣｈｅ?。玻埃保埃梗保常福担玻玻海牐福矗玻保埃福矗崳姡?，（）２１ 運(yùn)科大蜘丈研尷學(xué)位論文［２３］ＣｈｅｎｇＷ，ＣｈｅｎＹＬ，ＹａｎＦ，ｅｔａｌ．Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓｃａｎｏｍｅｔｒｉｃｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｏｒｏ－ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｔｅｎａｓｅｓｕｓｎａｔｎｅｔａｅｄｅｔｅＡｕｎａｎｏａｒｔｃｅｒｏｌｌｉｉｇｈｉｓｉｄｉｉｄｉｌｂｅｐｇｇｐｐｐｐＣ４７１－？ｈｅｒａＣｏｍｍｕｎ．２０１１０：２８７７２８７９．陰，，（）［２４ＸｕＪ，Ｊｉａｎ目Ｙ，ＳｕＪ，ｅｔａＬＢａｃｋｒｏｕｎｄｃｕｒｒｅｎｔｒｅｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｂａｒｃｏｄｅ］ｇｇ－ｌｅａｎｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｌａｂｅｌｆｒｅｅｈｉｈｌｓｅｎｓｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｃｔｉｏｎｏｐ，ｇｙｉｈｅｍｉｃａｌｄｅｆｔｃＤＪｍｍｕｎ２０１２４２７－ａｈｏｇｅｎ：；３０９３３１ｉＮＡ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．８３１．ｐ［］，），（２５ＣａｉＳＳｕｎＹＨＬａｕＣｅｔａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅａｔａｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄ，［，，］ｐ－ａ巧ｓｔｅｄｒｅｃａｍｔｎａＡｔｏｎｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅｉｃｌｉｎｌｉｆｉｃａｉｏｎ．ＡｌＣｈｉｍ．ｃａ２０１３１：ｇｐｙ］，７６ｙ，－１３７１４２．２６－ｉａｏＦ乂ＬｉｕＪＬｉＦｅｔａＬＡｎｔｉｂｏｄａｎｄＤＮＡｄｕａｌｌａｂｅｌｅｄｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ：［］Ｑ，ｙｇｐｓｔａｂａｎｄｒｅａｃｔｖＡＳｃ２００８－１：９４１２９４６ｉｌｉｔｙｉｉｔｙＪ．ｐｐＬＳｕｒｆ．Ｌ，２５４（０２．［］，）ＰｅｎＪＦｅｎＫｅ－２７ｇＮｈａｎｔａｔＣａｌｃｈｉｍｃａｒｂｏｎａｔｅｏｌｄｎａｎｏｃｌｕ巧ｅｒｈｂｒｉｄ［］，ｇＬＺｇ，，ｇｙｓｈｅｒｅｓ－：ｓｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｖｅｒｓａｔｉｌｅａｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ？ＣｈｅｍＥｕｒ．Ｊ．ｐｙｐｐ口］，２０－１２７５１８１：２６１５２６８．，（）２８ＺｈａｎＤＳｅｅ－ｌｉＧＤｎａｍｉｃＤＮＡｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｕｓｎｓｔｒａｎｄｄｉｓｌａｃｅｍｅｎｔｇ乂ｇｙｇｙｉｇ［］ｐＪＮｔ２０－ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．ａ．Ｃｈｅｒａ１１３：１０３１１３．［］，，口）［２９］ＭａｌｏｒｎｙＢ，Ｈｏｏｒ色ｒＪ，ＢｕｎｇｅＣ，ｅｔａＬＭｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌａｃｃｕｒａｃｙｏｆ＆／／ＷＯ只ｅ／／口ＰＣ艮：ＡｗａｒｄｓａｎｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｓｔａｎｄａｒｄＪ．Ａｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．［］ｐｐＭ－ｉｃｒｏｂｏｌ２００３６９ｌ：２９６．ｉ，）２９０（３０Ｒａｈ打ＫＤｅＧｒａｎｃＨｓＳＡＣｌａｒｋｅＲＣ，ｅｔａｌ．Ａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎ加ｖＪｅｎｅｓｅ胞ｉＫ：ｅ［］，，ｐｇｑｏｆＳｉａｆ／ｗｏｎｅＷ幻ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎａｓａｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｔｈｏｄｏｆｄｃＳａｌｍｏｎＪＭ－ｉＱｃＸｘｏｎｏｆｅｌｌａ．ｏｌ．ＣｅｌｌＰｒｏｂｅ．１９９２６４：２７１２７９．［］，（），［３１ＹｕＴＸＣｈｅｎＷ，Ｌｉ，ｅｔａｌ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｍｍｕｎｏｓｅｎｓｏｒｆｔ？ｒｃｏｎｅｔｉｔｉｖｅ］，ｇＱｐｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏ打ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｏｌａｓｅｕｓｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓａｎｄｇｏｌｄＴ－ｎａｎｏｒｏｂｅ．ａｌａｎｔａ２０１２９３：４３３４３８．ｐＷ，，Ｍ－３２ｉｒｋｉｎＣＡＬｅｔｓｉｎｅｒ艮ｌ＾Ｍｕｃｋ：民ＣｅｔａＬＡＤＮＡｂａｓｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｒａｔｉｏｎａｌｌ，，，［］ｇｙａｓ巧ｍｂｎｎａｎｏｒｔｃｅｓｎｏｒｃｏｃｍａｅｒａｔｕｒｅ：ｌｉａｉｌｉｔｍａｃｏｓｉｔｉａｌｓ？Ｎ１９９６３８２５９２ｇｐｐ口］，，巧）－６０９６０７．口３］ＬｕｏＣＨ，ＴａｎｇＨ，ＣｈｅｎｇＷ，ｅｔａｌ．ＡｓｅｎｓｉｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒｅｃ－ｓｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅｂａｃｔｅｒｉａｂＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩｌｌａｓｓｉｓｔｅｄｓｉｎａｌｐｙｇ２２ 醫(yī)科大學(xué)巧古研齡學(xué)位論文ａｍｔＢｔｒ－１ｌｉｆｉｃａｉｏｎＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．ｉｏｅｌｅｃｏｎ．２０１３４８：１３２３７．ｐ［］，，３４ＬｉｕＣＣ，ＹｅｕｎＣＹＣｈｅｎＰＨ，ｅｔａＬ舶ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｕｓｉｎ１６Ｓｒｉｂｏｓｏｍａｌ］ｇ，［ｇｏｂｅ－ｏｏａｒＤＮＡ／ＲＮＡｐｒｇｌｄｎａｎｐｔｉｃｌｅｓａｎｄｌａｔｅｒａｌｆｌｏｗｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙＪ．Ｆｏｏｄ［］〇－１６〇１２０１３１４１３：２巧６２５３２．，，（）３５ＤｕａｎＮＷｕＳＪＺｈｕＣｅｔａＤ－ｌ．ｕａｌｃｏｌｏｒｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅ打ｃｅａｎｄ［］，，Ｑ，?。幔簦幔恚澹颍妫椋穑椋睿悖簦椋铮睿幔欤椋澹洌牐恚幔睿澹簦铮牐睿幔睿铮穑幔颍簦椋悖欤澹螅猓幔螅澹洌牐猓椋铮幔螅螅幔妫铮颍牐簦瑁澹牐螅椋恚酰瑁幔睿澹铮酰螅崳姡纾牐洌澹簦澹悖簦椋铮睿铮妫椋樱幔鳎铮ⅰ叮幔牐裕瑁椋恚酰颍椋酰恚牐幔睿洌牐椋樱鳎粒铮悖铮悖悖魑澹牐幔骰停樱剩牐粒睿幔欤牐茫瑁椋恚崳姡穑牐郏荩粒悖簦幔玻埃保玻罚玻常海崳姡保叮?，３６ｙＳＬｉＹＱＣｈｅｎＨｅｔａＬＤｉｒｅｃｔｄｅｔｅｃｔｉｏ打ｏｆ筑３ｆ／／？ｃｗｅ／／ａｔｈｉｍｕｒｉｕｍｏｎ［］化化ｙｐ－ｅｓｈｒｏｓｉｎｂａｓｅｄｉｍｎｅ化ｅｌａｓｔｉｃｂｓｅｎｓｏｒｓ．ＢｏｓｅｎｓｆｒｄｕｃｅｕｈａｇｅｇｉｏＪｉ．ｐｇｐ［］－Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ２６１１９．２０１０４：１３１３３．，，（）［３７］ＯｈｋＳＨ，ＢｈｉｍｉａＡＫ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｆｉｂｅｒｏｐｔｉｃｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ１／文化片幻ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓＥｓｃｈｅｔｉｃｈｉａｃｏｌｉ０７立７．／／７ａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａｆｒｏｍ，－－ｒｅａ－ｔｅａｔｍｅａｔｓａｄｙ）ｔｒｐｌｅｓＪ．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３３３２：１６６１７１．［］，，（）［３糾ＤｅｖＤａｓＲｏｙＣｈａｕｄｈｕｒｉＣ，ＭａｊｉＳ，ｅｔａｌ．Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｓｉｌｉｃｏｎｂａｓｅｄｓｉｍｐｌｅａｎｄ＊ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｔｒａｐｐｉｎｇｐｌａｔ仿ｒｍ仿ｒｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ５幻扔ｌｏ內(nèi)ｅ／／幻ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍｔＢｔｒ２００９２４－ａｈｏｅｎｓＪ．ｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏｅｌｅｃｏｎ．１１：３２１５３２２２．ｐｇ［］，，（）２３ 獻(xiàn)臣科大學(xué)碩壬研巧生學(xué)位論文第二章基于核酸外切巧…輔助循環(huán)擴(kuò)増和錯(cuò)配型莖環(huán)催化自組裝技術(shù)高靈敏和髙特異性檢測通用型ＤＮＡｅｍａ￣本章內(nèi)容發(fā)表于ＣｈｌＣｏｍｍｕｎｉｃｓ２０１５５１４２２０４２２２ｉｃａｔｉｏｎ：，，１引言實(shí)現(xiàn)低豐度ＤＮＡ的高靈敏和高特異性檢測，對(duì)臨床診斷、基因治療、基因變ｗｉｔ異Ｗ及病原菌檢測等領(lǐng)域具有重大意義。在過去幾十年中，已有多種技術(shù)用于ＤＮＡ的檢測，如ＤＮＡ微陣列、比色傳感器、化學(xué)發(fā)光傳感器、電化學(xué)傳感器和ｗｔｉ表面等離子共振傳感器等。在這些技術(shù)中，電化學(xué)傳感器在檢測上不需要昂貴的儀器設(shè)備，，具有檢測設(shè)備小型化、簡便快速、靈敏度高和成本低的特點(diǎn)因而ｗ’Ｗ引起了人們的濃厚興姐。１１：最近，信號(hào)放大策略得到了越來越多的關(guān)注，因其能克服傳統(tǒng)雜交方法的一放大局限，使檢測靈敏度得到進(jìn)步的提升，。目前雜交鏈反應(yīng)鏈置換擴(kuò)４１５１６＞７［１’］［’］ｎｗｑ增、滾環(huán)擴(kuò)增和酶催化擴(kuò)增等放大方法己被廣泛用于生物分子的檢測。在送些方法中，酶的使用，特別是核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶引起了研究者的一一極大興趣，這特性限制了酶的通用性。。核酸內(nèi)切酶是種依賴特異性序列的酶＇ＤＮＡ雙３－而核酸外切酶ｍ（ＥｘｏＩＩＩ）不需要特定的識(shí)別位點(diǎn)，其能識(shí)別鏈的平’ＤＮＡＤＮＡ雙３－末端或凹陷端，進(jìn)而逐步催化去除單核昔酸。此酶對(duì)單鏈和鏈的ｉ２２Ｐ，ｌＥｘｏＩＩＩ可為ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白質(zhì)的靈敏檢測提粘性末端活性很低。因此，２－一３２６一［］供個(gè)通用型的平臺(tái)。另方面，在過去數(shù)年中，莖環(huán)催化自組裝（ＣＨＡ）ＨＡ是一種無酶擴(kuò)增技術(shù)技術(shù)得到了很好的發(fā)展。Ｃ，在核酸分析的信號(hào)放大和轉(zhuǎn)７２８Ｐ，１導(dǎo)方面具有重要作用０ＣＨＡ反應(yīng)能對(duì)信號(hào)產(chǎn)生數(shù)百倍的擴(kuò)增放大。同時(shí)，ＣＨＡＰｗｚｉ可Ｗ容易地將分析物與黃光、電化學(xué)和比色信號(hào)等轉(zhuǎn)換結(jié)合。盡管ＣＨＡ有諸多優(yōu)點(diǎn)，但存在由非特異性ＣＨＡ產(chǎn)物引起背景信號(hào)的問題，這將降低ＣＨＡ擴(kuò)增Ｐ３’３４ｌ方法的特異性，限制其在生物分析中的應(yīng)用。本研究在ＣＨＡ莖環(huán)結(jié)構(gòu)的呼吸位點(diǎn)中引入錯(cuò)配堿基Ｗ降低ＣＨＡ的背景信號(hào)。ＨＡ一基于ＥｘｏＩＩＩ輔助循環(huán)擴(kuò)増（ＥＲＡ）和錯(cuò)配Ｃ，首次提出了種高靈敏和特異性檢測ＤＮＡ的新策略。此傳感器呈現(xiàn)出優(yōu)秀的分析性能，能為生物分析、臨床診斷、２４？ 故醫(yī)科大學(xué)巧壬研觸學(xué)位論文ＤＮＡ檢一個(gè)簡單而強(qiáng)有力的平臺(tái)病原菌檢測和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域的測提供。２實(shí)驗(yàn)部分２．１材料和試巧ＤＮＡ寡聚核巧酸由生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成和純化（中國，上海）。－－ＮＰ它們的序列見表２．１。ＭＣＨ、ＳＴＡＰ、ａ、ＢＳＡ和蛙魚精ＤＮＡ均購買自西格瑪－（０ｂＤＮＡＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ和Ｍ奧德里奇公司美國）。ＥｘｏＩＩＩ、２ｐｉｎ舊ＥＳＴＵｎｉｖｅｒｓａｌＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡＥ過ｒａｃ１；ｉｏｎＫｉｔＶｅ＾．５．０均購自寶生物公司（中國大連）。其他的所有試￣１８ＭＱＭｉｌｌｉ，ＭＵｌｉ劑都是分析純級(jí)別的試劑。所有的水溶液均用超純水食，Ｑｐｏｒｅ）進(jìn)行配制。表王１本實(shí)拴中合成的寡枝普致序列Ｔａｂｌｅ２．１Ｓｅｕｅｎ化Ｓｏｆｈｅｕｓｅｄｏｌｉｎｕｃｌｅｏｉｄｅｑｔｇｏｔｓ＇餅ｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｅｕｅｎｃｅ３ｇｑ巧）化ｂ－－ＣａｒｅｒｏｅＳＨＣＨＴＴＴＴＧＡＧＴＡＧＡＧＴＣＴＧＡｐｐ（２）６ＴａｒｅｔｌｉｌｔｉｄＴＡＴＣＡＧＡＡＣＣＴＧＴｇｏｇｏｎｕｃｅｏｅＣＴＡＧＴＧＡＴＴＡＧＣＴＨａｉｉｂｅ０ＴＴＧＡＣＣＴＧｒｐｎｒｏ（ＨＯ）ＴＡＧＣＴＴＡＴＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＡＴＧｐＴＡＣＡＴＣＴＧＡＴＡＡＧＣＴＡＡＴＣＡＣＴＡＧＨａｉｒｉｎ防ｂｅ１ＨＵＴＣＡＡＣＡＴＣＡＧＴＣＴＧＡＴＡＡＧＣＴＡＣＣＡＴＧＴＧｐｐ（ＴＡＧＡＴＡＧＣＴＴＡＴＣＡＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＡＨａｉｒｉｎｒｏｂｅＧ２（Ｈ２ＴＡＡＧＣＴＡＴＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＴＡＧＣＴＴＡＴＣＡｐｐ）－ｂＡＧＡｉｏｔｉｎＣＣＡＴＧＴＧＴＡＧＡＴＴＴ－－ｌｉｃｌｅｏｔｉｄｅＣＴＡＧＴＧＡＴＴＡＳｉｎｇｌｅｂａｓｅｍｉｓｍａｔｃｈｅｄｏｇｏｎｕＧＣＴＴＡＴＣＡＴＡＡＣＣＴＧＴ－Ｔｗｏｂａ－ｓｅｍｉｓｍａｔｃｈｅｄｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＣＴＡＧＴＧＡＴＴＡＡＣＴＴＡＴＣＡＴＡＡＣＣＴＧＴｇ＾ＮｏｎｃｏｍｌｅｍｅｎｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＴＧｒＣＣＡＴＡＡＴＣＴＡＣＴＣＡＴＡＣＡＡＴＴＣＡｐｔａｉｙｇ２．２儀器設(shè)備本實(shí)驗(yàn)的檢測儀器是ＣＨＩ６６０Ｄ電化學(xué)工作站（上海辰華儀器有限公司），其，中的Ｈ個(gè)電極系統(tǒng)包括；拍絲電極為對(duì)電極，氯化銀電極為參比電極３ｍｍ的金－ｉ電極為工作電極ｉｏＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｅｓＵＳＡ）記錄。。凝膠電泳的結(jié)果用成像儀（Ｂ，２．３探針的制備２５ 戯醫(yī)稱大學(xué)社研巧生學(xué)位論文Ｈ監(jiān)一基于無酶鏈置換原理的莖環(huán)１和是參考我們最近發(fā)表的篇文章而設(shè)計(jì)°‘ｔＷ。所有的莖環(huán)探針均在９５Ｃ水浴變性５分鐘，接著緩慢冷卻至室溫，放４Ｃ冰箱備用。２．４電化學(xué)生物傳巧器的制備（１）將裸金電極用化０５ｈ！的錯(cuò)粉處理、洗涂后浸入食人魚溶液中１０ｍ，然分鐘，巧取出清洗、室溫干燥。’（２）將琉基標(biāo)記的２００ｎＭ捕獲探針滴加于上述電極上，置于４Ｃ冰箱中過夜固定。（３）將步驟２中的金電極取出，沖洗，用ＭＣＨ封閉１小時(shí)，再次沖洗金電極，然后用蛙魚精ＤＮＡ和２％ＢＳＡ混合溶液封閉金電極３０分鐘避免非特異性ＤＮＡ和酶的吸附。（４）ＥＲＡ反應(yīng)體系包括；ｌ＾ｉＬＨＯ、ｌ＾ＬＥｘｏＩＩＩ和不同濃度的視ＤＮＡ，反應(yīng)ＯｍＭＴｒ－的緩沖液為ｌｉｓＨＣｌ緩沖液（ｐＨ７．８，ｌＯｍＭＭｇＣｆｅ，ＳＯｍＭＮａＣＤ。反應(yīng)°’°３７（：０５８００ＥＩＩＩ反應(yīng)１，３７（３０體系置于分鐘，Ｃ１分鐘１＾滅活ｘｏ最后于：復(fù)性分鐘。（５）在步驟４的ＥＲＡ反應(yīng)體系里加入２０ｌＬＴＮａＫ緩沖液（Ｈ７．５，２０ｍＭＴｒｉｓ，＾ｐ１４０ｍＭＮａＣｌ，Ｓ．ＯｍＭＫＣＤ。其中包含１０〇１＼１出和１０〇１＾瓜，用（＾｜啟動(dòng)錯(cuò)配ＣＨＡ°３７３０。反應(yīng)，整個(gè)體系置于Ｃ反應(yīng)分鐘’（６）將步驟５中的反應(yīng)體系加到步驟３中的金電極上，３７Ｃ雜交３０分鐘，用ＤＥＡ緩沖液清洗電極。－’ｉ－（７）在步驟６中的電極上加入１．２５鴨ｍＬ的ＳＴＡＰ，置于３７Ｃ反應(yīng)３０分’ｉ－ＮＰ底物溶液中ＤＰＶ信鐘，用ＤＥＡ緩沖液沖洗后，在１ｍｇｍＬ的ａ進(jìn)斤號(hào)檢測。３結(jié)果與討論３．１電化學(xué)傳感器的設(shè)計(jì)巧理２１Ｈ０、原理圖．闡述了通用型ＤＮＡ的傳感檢測過程。設(shè)計(jì)種莖環(huán)結(jié)構(gòu)；１－懸掛末端Ｈ１和監(jiān)。Ｈ０設(shè)計(jì)帶有３，能避免被ＥｘｏＩｉｒ消化。Ｈ１和監(jiān)是參考我２６ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩±研姓學(xué)位論文一Ｐ４們最近發(fā)表的］篇文章設(shè)計(jì)的。Ｈ０包含兩個(gè)區(qū)域，Ｉ個(gè)區(qū)域與鞭ＤＮＡ互補(bǔ)，一＇另外個(gè)區(qū)域與Ｈ１部分互補(bǔ)。在視ＤＮＡ存在下－，Ｈ０與禪ＤＮＡ雜交形成帶有３＇平末端的雙鏈ＤＮＡ結(jié)構(gòu)－。核酸外切酶ＩＩＩ能識(shí)別３平末端進(jìn)而逐步催化去除單核一昔酸，釋放出範(fàn)ＤＮＡ和輸出ＤＮＡ。釋放的視ＤＮＡ又能進(jìn)入下個(gè)雜交和裂解過程（循環(huán)Ｉ）。輸出ＤＮＡ能與出結(jié)合，打開Ｈ１的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。然后生物素標(biāo)記的Ｈ２與被一１打開的莖環(huán)Ｈ結(jié)合，釋放出輸出ＤＮＡ，它能促發(fā)下個(gè)錯(cuò)配型莖環(huán)催化自組裝循環(huán)和大量Ｈ－Ｈ２１復(fù)合物的產(chǎn)生（循環(huán)ＩＩ）。最后，金電極上的捕獲ＤＮＡ－Ｈ２復(fù)ＳＴ－能特異性地與ＨＡＰ能通過親和素－１合物雜交。生物素的特異性識(shí)別結(jié)合一到電極上，導(dǎo)致酶促信號(hào)的產(chǎn)生。該雙重放大策略能為ＤＮＡ檢測提供種高靈敏和高特異性的新方法。ＷＴＭＴＴ／，，，，，…％ｒｍｒ（＾＾＾＂■思ＴＮＴＴＴＴＴＴｔ３ＭＭＩＩＭ川ＩＭＩＩＭＭ川／ＩＩＩＯｕ＾ＤＮＡＶ：Ｖ＼＿、Ｂ）（ＪｉＡＭ￣｜Ｃａｐｔｉｘｅｐｒｏｂｅ２１困．電化學(xué)傳感器檢測把ＤＮＡ的原理Ｆｉｇ．２．１ＳｃｈｅｍａｔｉｃｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｅｓｉｇｎｅｄｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｔａｒｇｅｔＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎ３．２探針的設(shè)計(jì)原理盡管ＣＨＡ有很多優(yōu)點(diǎn)，卻有背景信號(hào)大的不足。當(dāng)範(fàn)ＤＮＡ不存在時(shí)ＣＨＡ循環(huán)中Ｈ１和Ｈ２會(huì)非特異性的識(shí)別對(duì)方，導(dǎo)致背景信號(hào)增大。這將降低反應(yīng)的信噪比，影響實(shí)驗(yàn)的分析性能。莖環(huán)結(jié)構(gòu)的呼吸位點(diǎn)位于莖部末端。當(dāng)望環(huán)結(jié)構(gòu)呼吸時(shí)，結(jié)合位點(diǎn)會(huì)被無意的打開。即使粗物質(zhì)不存在，ＣＨＡ反應(yīng)也會(huì)被引發(fā)。為了驗(yàn)證四個(gè)呼吸位點(diǎn)對(duì)背景信號(hào)的的影響，我們在莖環(huán)的莖部末端和相鄰區(qū)域的呼吸位點(diǎn)引入了兩個(gè)連續(xù)的錯(cuò)配堿基（圖２２，．序列設(shè)計(jì)用ＮＵＰＡＣＫ）。錯(cuò)配ＣＨＡ能２７ 重慶醫(yī)稱大學(xué)碩±研充生學(xué)位論文有效地降低背景信號(hào)。＇３－懸掛末端的長度對(duì)Ｅｘｏｍ的活性有重要影響雙鏈ＤＮＡ。如２３圖．所示，’Ｈ０和祀ＤＮＡ的３－懸掛末端長度分別為８和６個(gè)堿基，Ｗ抵抗ＥｘｏＩＩＩ的消化?；崳?，Ｈ０２３于ＣＨＡ的反應(yīng)原理的、和４區(qū)是特異性設(shè)計(jì)的引發(fā)ＣＨＡ反應(yīng)。如果ＤＮＡ鏈的長度過長會(huì)引起二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致祀ＤＮＡ與Ｈ０的ｒ區(qū)結(jié)合困難。因此本文中通用型ＩＥＤＮＡ的長度不應(yīng)過長，但應(yīng)不少于１３個(gè)堿基。在不久的將來，本文建立的方法有可能用于臨床診斷和治療、病原體檢測和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域中ＤＮＡ或ＲＮＡ的檢測。ＭＵＫＫａｒｏｃｌｉｒｒｓｔ巧－，ＣＭ＾ＩＫｓｔｎＫｔａｒｃａｔ３７．０＜：＇９．香－ｈ。龍＂今叫ＩＫｍｍｒｒｉＤａｒＭＣＭｔｆｗｔｔａｎ：ｔＺＭｋｉａＶｌＫｅｒＴｉｎｗｍ？ｒｔｗｓｒｅｆ一ＭｈＨ２Ｄ３Ｍ２ｍＷｒｈＳｔｅｓｉ、‘－？－＊＇３?。牐牐常墸冢墸龋模茫桑桑桑停停玻墸保桑祝玻崳娎В玻玻牐茫龋恋腻e(cuò)化位點(diǎn)Ｆ．２．２ＴｈｅｆｏｕｒｍｉｓｍａｔｃｉｇｈｐｏｓｉｔｉｏｎｓｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｔｏｔｈｅｒｅｖｅａｌｅｄｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｔｈａｔｃａｎｉｎｉｉａｔｔｅＣＨＡｒｅａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎＨＩａｎｄＨ２ＡＴＧｔｑｊＧ２３Ｔ〇、＇５－ＴＡＧＣＴＴＡＴＣＡＧＡｈｏＧ‘３－ＧＡＴＣＡＣＴＡＡＴＣＧＡＡＴＡＧＴＣＴＡＣ？，＂Ｃ，Ａａｔ－５ＣＴＡＧＴＧＡＴＴＡＧＣＴＴＡＴＣＡＧＡ．＂１２３ｃ。Ｔａｒｅｔ下ｇＧ，ｊ＿３圖２．３ＨＯ和化ＤＮＡ的設(shè)計(jì)原理巧護(hù)２．３Ｔｈｅｄｅｓｉｇｎｐｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆｔａｒ拼ｔａｎｄＨＯ２８ 重慶醫(yī)種大學(xué)碩壬研巧生學(xué)位論文３．３傳感器的電化學(xué)表征本實(shí)驗(yàn)用電化學(xué)阻抗法一（ＥＩＳ）和方波伏安法（ＳＷＶ）來驗(yàn)證每步的修飾情－－３／４況。在ＥＩＳ中，ＦｅＣＮ被用作氧化還原電位測試探針［（）６］，阻抗圖譜可用來計(jì)算電荷轉(zhuǎn)移阻力一（Ｒｅｔ）。如圖２．４Ａ，裸金電極（曲線ａ）阻抗幾乎呈條直線，這說明處理后的裸金電極有良好的電子傳導(dǎo)特性。當(dāng)捕獲探針自姐裝到金電極上后，Ｒｅｔ得到增加（曲線ｂ）。這是由于單鏈核昔酸帶負(fù)電荷的稱酸鹽骨架阻礙了電子在３－／４’電極和Ｆｅ（ＣＮ）６溶液中的轉(zhuǎn)移。當(dāng)用ＭＣＨ和ＢＳＡ溶液封閉金電極后，由于這些生物分子能阻礙電子傳遞，因此Ｒｅｔ明顯増加（曲線Ｃ）。最后，當(dāng)封閉后的電極與空白對(duì)照反應(yīng)后，Ｒｅｔ有輕微的增加（曲線ｄ）。而當(dāng)封閉后的電極與有祀ＤＮＡ存在的體系反應(yīng)后，Ｒｅｔ得到極大的增加ｅ）。此（曲線結(jié)果說明，當(dāng)範(fàn)物質(zhì)不存在時(shí)－，只有少量的Ｈ１Ｈ２復(fù)合物會(huì)形成。這也證明本實(shí)驗(yàn)引用的錯(cuò)配ＣＨＡ使背景信號(hào)得到了極大降低。同時(shí)我們也用ＳＷＶ進(jìn)行傳感器的表征，結(jié)果如圖２．４Ｂ所示，一一ＳＷＶ與ＥＩＳ的結(jié)果呈現(xiàn)出良好的致性，證明本實(shí)驗(yàn)每步都得到了準(zhǔn)確的修飾。２。ｌｅｏ１７１ｆｉ５．。。。?。墶墸牐粒崳姡埃墸保墸玻墸常墸矗墸埃埃墸埃保墸埃玻墸埃常墸埃矗崳姡觯耍睿墸澹觯崳娎В玻丛跉J氣化舒溶液中電板的表征西ＥＩＳ（Ａ）和ＳＷＶ（Ｂ）：（ａ）裸金電板：（ｂ）捕獲探針修飾后的電板；（Ｃ）ＭＣＨ和ＢＳＡ封閑電板后；（ｄ）ＥＲＡ和錯(cuò)化ＣＨＡ（無耗ＤＮＡ）；（ｅ）ＥＲＡ和錯(cuò)配ＣＨＡ（有托ＤＮＡ）３－＿Ｆ／４ｉ．２．４凹ＳＡａｎｄＳＷＶｇｉｎ０．４ＭＫＣＩｃｏｎｔａｉｎｉｎ０５ｍＭＦｅＣＮａｂａｒｅｅ．ｌｅｃｔｒｏｄｅ（）（巧ｇｔ（）６燦，ｃａｐｔｕ化ＤＮＡｍｏｄｉ打ｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅ（ｂ），ｃａｐｔｕｒｅＤＮＡｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｆｔｅｒｓｅａｌｅｄｗＵｈＭＣＨａｎｄＢＳＡ（ｃ），ａｆｔｅｒＥＲＡａｎｄｍｉｓｍａｔｃｈｅｄＣＨＡｗｉ化ｏｕｔｄａｎｄｗｉ化ｔａｒｅｔＤＮＡｅ，（）ｇ（）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ２９ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文３．４電泳驗(yàn)證和傳感器的信號(hào)放大效能為了驗(yàn)證ＥＲＡ和錯(cuò)配ＣＨＡ能否按預(yù)計(jì)進(jìn)行，我們做了聚丙蹄酌胺凝膠電泳（ＰＡＧＥ）實(shí)驗(yàn)。女幽２．５Ａ所示，Ｈ０和少量祀ＤＮＡ的混合液顯示２個(gè)條帶（ｌａｎｅＯ－ｂ），不同于Ｈ（ｌａｎｅｂ）。這歸因于ＨＯ能與鞭ＤＮＡ雜交形成１條新條帶（ＨＯＴ一復(fù)合物ｘｏ山０５０－Ｔ復(fù)合物被些殘余條帶）。當(dāng)反應(yīng)體系加入Ｅ反應(yīng)１分鐘后，Ｈ－取代（，ＦＨＨ２ｌａｎｅＣ），這說明ＥＲＡ反應(yīng)成功完成。當(dāng)祀物質(zhì)不存在時(shí)復(fù)合物的（－ｌａｎｅｄ）。Ｈ２復(fù)合物的條帶很強(qiáng)（條帶很弱然而，當(dāng)有範(fàn)物質(zhì)時(shí)，Ｈ１ｌａｎｅｅ）。這些結(jié)果說明錯(cuò)配ＣＨＡ能極大降低ＣＨＡ的背景信號(hào)。本方案中，Ｅｘｏｍ具有重要的放大作用。５００ｐＭ的祀ＤＮＡ在有ＥＲＡ和ＣＨＡ存在時(shí)比僅有ＣＨＡ的ＤＰＶ信號(hào)大得多。送是因?yàn)椋牛铮牐桑桑赡茌o助循環(huán)放大，提高２實(shí)驗(yàn)的靈敏度（圖．５Ｂ）。因此，我們建立的生物傳感平臺(tái)能夠特異和高靈敏的檢測鞭ＤＮＡ。ＡａｂＣｄｅＭＢ＿■執(zhí)如州＊—ＴＢ３．ＩＨ１Ｗ一－—ＨＯＴｌ２．■三－。＞ｐｉｌｌＪ５＊＊＋困２ｌａＨＯｌａｂＨＯ＋ｔＨＯ＋ｔＭ．（Ａ）ＰＡＧＥ電冰：ｎｅａ；ｎｅ：ｔａｉｅｌａｎｅｃ；ｔ：ａｉｅＥｘｏｌｌａｎｅ，ｇ，ｇ，ｄ：ＨＯ＋Ｅｘｏｉｎ＋ＨＩ＋Ｈ２，ｌａｎｅｅ；ＨＯ＋ｔａｒｇｅｔ＋Ｅｘｏｉｎ＋ＨＩ＋Ｈ２和ｌａｎｅＭ：２０ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ；（Ｂ）５００ｐＭ的耗ＤＮＡ在有ＥＲＡ和ＣＨＡ和僅有ＣＨＡ與空白對(duì)照的ＤＰＶ信號(hào)對(duì)比枉狀函■＋Ｆ．２．５ＡＴｈｅｔｉＰａｎａｌｉｓ：ｌａＨＯｌｂＯ＋ｔｔａｎｅＨＯ十化ｔｉｎａｖｅＡＧＥｓｎｅａ：，ａｎｅ：Ｈａｒｅ＾ｌｃ：１ｅｇ（）ｙｇ呂ＥｘｏＩＩＩｌａｎｅｄ；ＨＯ＋ＥｘｏＩＩＩ＋ＨＩ＋瓜ｌａｎｅｅ；ＨＯ＋ｔａｒｅｔ＋ＥｘｏＩＩＩ＋ＨＩ＋Ｈ２ａｎｄｌａｎｅＩＶＩ：，，ｇ２０ｂＤＮＡＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ．Ｈｉｅ１２％ｎａ化ｒｅｄＰＡＧＥａｎａｌｓｉｓｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｉｎ１Ｘｐｙ＾＾ＴＢＥＶｌＭｇ（ｐＨ８．０）．（Ｂ）ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＤＰＶｐｅａｋｃｕｒｒｅｎｔｓＩｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅ（ｂｌａｎｋ）ａｎｄｔｈｅａｒｅ－ｒｅｓｅｎｃｅｏｆ５００ＭｔｔｗｈｈＣＨＡｗｉ化ｏｕｔＥＲＡａｎｄＥＲＡＣＨＡｐｐｇ（）３０ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文３．５實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化為了獲得最佳的分析性能，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。反應(yīng)的信噪比也被用來ＥＩＩＩ評(píng)價(jià)傳感器的分析性能。作為ＥＲＡ啟動(dòng)子的ｘｏ濃度對(duì)傳感器的性能有極大的影響。因此，Ｅｘｏｍ的濃度最先被優(yōu)化。當(dāng)Ｅｘｏｍ濃度從０．００１Ｕ到０．０１Ｕ時(shí)，。０．１信噪比增加明顯而從化１Ｕ到化０２Ｕ時(shí)，信噪比開始下降。因此００Ｕ被選為Ｅ一一ｘｏＩＩＩ的最優(yōu)濃度（圖２．６Ａ）。般實(shí)驗(yàn)優(yōu)化酶量時(shí)，都會(huì)達(dá)到個(gè)平臺(tái)期。由＇－懸掛末端的ＤＮＡ雙鏈于ＥｘｏＩＩＩ有時(shí)也會(huì)消化單鏈或有３，且本實(shí)驗(yàn)中Ｈ０的用，對(duì)ＥｘｏＩＩＩ很敏感，因此本實(shí)驗(yàn)的酶量過大會(huì)導(dǎo)致信號(hào)的降低量很化。ＥＲＡ一的時(shí)間同樣也是本實(shí)驗(yàn)的個(gè)重要參數(shù)。當(dāng)目ＸＯＩＩＩ的濃度為０．０１Ｕ時(shí)，信噪比在１０５分鐘時(shí)為最大值。因此１（．Ｂ）。，０５分鐘被選為ＥＲＡ的最優(yōu)時(shí)間圖２６２Ｈ２的比值從４：１到１：比在１：１時(shí)達(dá)到最大值。如圖．６Ｃ所示，當(dāng)Ｈ１與４時(shí)，信噪１１Ｈ２反應(yīng)的最佳比例。圖２Ｄ顯示了ＣＨＡ反應(yīng)時(shí)間對(duì)信噪比的：被選為Ｈ１與．６ＨＡ影響。如圖所示，信噪比在３０分鐘時(shí)達(dá)到最大值。因此，３０分鐘被選為Ｃ的最優(yōu)反應(yīng)時(shí)間。＇因＇細(xì)０．．００１０．００５０．０１０．０巧００２如６０９０１０５１２０＇，Ｃ／ＵＬＥＲＡｔｉｍｅ／ｍｉｎｐ，５－Ｃ５Ｄ‘１．１０４：１２：１１：１１：２１：４０１５３０化如ＲａｔｉｏｏｆＭ１化Ｈ２Ｉｎｔｅ巧ｃｔｉｏｎｔｉｍｅ／ｍｉｎ困２．６實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化：丸ＥｘｏＩＩＩ濃度：ＲＥＲＡ奸間；仁ＨＩ：Ｈ２；Ｄ．ＣＨＡ?xí)r間Ｆ－－Ａｉ．２乂Ｄｅｅｎｄｅｎｃｅｓｏｆ化ｅｓｉｎａｌｔｏｎｏｋｅｒａｔｉｏｏｎＥｘｏＩＩＩｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＥＲＡｔｉｍｅＢｇｐｇ（），（），ＲａＨＡｉｉｏｎｔｉＤａｒａｍｅｒｃｈａｎｅｓｗｈｉｌｅｔｈｅｔｉｏｏｆＨＩ?。憨枺牐龋玻茫幔睿洌牐茫椋眨澹颍幔悖簦恚澹鳎瑁澹睿牐铮睿澹牐鸹纾牐ǎ牐牐ǎ?，ｏｔｈｅｒｓａｒｅｕｎｄｅｒｔｈｅｉｒｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ３ｌ 里慶醫(yī)科大學(xué)碩壬研觸學(xué)位論文３．６傳巧器的分析性能在最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件下，ＤＰＶ峰電流隨著合成的鞭ＤＮＡ濃度的不同而產(chǎn)生的變７。．７Ａ可見化見圖２．由圖２，ＤＰＶ響應(yīng)信號(hào)隨著餓ＤＮＡ濃度的増大而増大。圖２．７Ｂ展現(xiàn)了在祀ＤＮＡ濃度為１００ｆＭ到５ｎＭ范圍內(nèi)，ＤＰＶ響應(yīng)信號(hào)與祀ＤＮＡ濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系＝＋化６。相應(yīng)的回歸方程是／山Ａ）１．４７２ｘＭ｜ｇｃ化，相關(guān)系）數(shù)為０．９９３５，最低檢測限為９２ｆＭ，遠(yuǎn)低于之前報(bào)導(dǎo)的基于ＥＲＡ或ＣＨＡ的方法（表ＰＳ—３９１４０２［］．２）。與周等人發(fā)表的基于ＣＨＡ和ＥＲＡ的王作相比，本方法有更高的信噪比。這主要?dú)w因于錯(cuò)配ＣＨＡ的使用和ＥＲＡ與ＣＨＡ的先后反應(yīng)順序。ｆＡｇ：Ｐ—Ｌ￣￣￣．Ｊ＿－．Ｔ．０＊－．１０２０３．００１１１０１００１０００１００００Ｈ／ＶＣ／ｐＭ困２．７（Ａ）電化學(xué)傳廉器檢刑０，０．１，０．５，５，５０，５００和５０００ｐＭ權(quán)ＤＮＡ的ＤＰＶ困；（Ｂ）ＤＰＶ峰電流與耗ＤＮＡ濃度對(duì)數(shù)的校準(zhǔn)曲線Ｆｉｇ．２．７（Ａ）ＤＰＶｃｕｒｖｅｓｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ化０，化１，０？或５＾５０，５００，５０００ｐＭ化巧ｅｔＤＮＡ（ｆｒｏｍａｔｏ．ｇ）（Ｂ）ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｙｎａｍｉｃｒａｎｇｅｏｆｔｈｅｄｅｓｉｎｅｄｓｔｒａｔｅ．Ｔｈｅｅｒｒｏｒｂａｒｓｒｅｒｅｓｅｎｈｅｇｇｙｐｔｔｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｏｔｓ３２ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩壬研巧生學(xué)位論文表１２本方法與其他已報(bào)道的ＤＮＡ檢測方法的對(duì)比Ｔａｂｌｅ２．２ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｒｏｐｏｓｅｄａｓｓａｙａｎｄｏｔｈｅｒｒｅｐｏｒｔｅｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｔＡｎａｌｙｉｃａｌｅｃｈｎｉｑｕｅＳ化ａｔｅｇｙＤｅ化ｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔＲｅ化ｒｅｎｃｅＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙＥＲＡ２．５Ｍ３５ｐＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＥＲＡ０．３Ｍ３６ｐＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙＣＨＡ１ｎＭ３７ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＣＨＡ０．２ｎＭ３８ＳＷＶＣＨＡ２０ｐＭ３９ＤＰＶＥＲＡａｎｄＣＨＡ％ｆＭＴｈｉｓｗｏｒｋ為了研究傳感器對(duì)不同ＤＮＡ序列的特異性，如圖２．８所示，我們用ＤＮＡ傳感器檢測５００ｐＭ的四種不同的寡核昔酸（完全互補(bǔ)的寡核昔酸、單堿基錯(cuò)配的寡核昔酸、兩個(gè)堿基錯(cuò)配的寡核巧酸和非完全互補(bǔ)的寡核昔酸）。圖２．８Ａ展示了ＤＰＶ峰電流隨著ＤＮＡ序列的不同而產(chǎn)生的變化。圖２．８Ｂ顯示，盡管本策略對(duì)單堿基錯(cuò)配的序列有響應(yīng)，但是響應(yīng)值明顯低于完全互補(bǔ)的序列。兩個(gè)堿基錯(cuò)配的寡核巧酸和非完全互補(bǔ)的寡核昔酸的ＤＰＶ響應(yīng)值非常低，幾乎接近空白。此結(jié)果表明，本分析方法能有效地區(qū)分不同的ＤＮＡ序列，表現(xiàn)出很好的選擇性。為了評(píng)價(jià)傳感器的重復(fù)性，１００ｆＭ和１ｎＭ的合成祀ＤＮＡ被檢測了５次，ＲＳＤ均小于５％，這表明本方法有可接受的穩(wěn)定性和再現(xiàn)性。４－ＡＡ４－Ｂ呈０．００．１０．２０．３０．４ａｂｏｄｅＥＮ困２．８（Ａ）電化學(xué)傳感器栓測耗枝苦敵序列、單堿基錯(cuò)化、兩個(gè)域基錯(cuò)配、非完全互補(bǔ)的寡核皆酸序列和空白對(duì)照的ＤＰＶ困（Ｂ）；電化學(xué)傳感器檢測把核普酸序列、單堿基錯(cuò)配、兩個(gè)堿基錯(cuò)配、非完全互補(bǔ)的寡核導(dǎo)驗(yàn)序列和空白對(duì)照的ＤＰＶ響應(yīng)柱狀困３３ Ｉ載運(yùn)稱大學(xué)碩壬研觸學(xué)位論文Ｆｉｇ．２．８（Ａ）ＴｙｐｉｃａｌＤＰＶｃｕｒｖｅｓａｎｄ（巧ＤＰＶｐｅａｋｃｕｒ巧ｎｔｓｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ化５００ｐＭｏｆ化ｒｇｅｔｅ－－ｍ－－ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（ａ）ｓｉｎｇｌｂａｓｅｉｓｍａｔｃｈｅｄｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄ的ｂｔｗｏｂａｓｅｍｉｓｉｎａ化ｂｅｄ，ｇ（），－ｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｃｎｏｎｃｏｍｌｅｍｅｎｔａｒｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｄａｎｄｂｌａｎｋｅｇ（），ｐｙｇ（）（）３．７實(shí)際樣本中ＤＮＡ的撞測為了評(píng)價(jià)研制的生物傳感器在實(shí)際樣本檢測中的分析性能，將不同濃度的合成祀ＤＮＡ添加到人正常細(xì)胞總ＤＮＡ和血清樣本中。結(jié)果如表２．３所示，對(duì)于２００－ｉＤＮＡ１５ｐｇｍＬ的總樣品和：稀釋血清標(biāo)本，不同濃度的報(bào)分子回收率在％％到１０５％之間。這表明本傳感器對(duì)于鉛ＤＮＡ的檢測幾乎不受復(fù)雜基質(zhì)的干擾，具有很好的應(yīng)用前景。表１３授測標(biāo)準(zhǔn)ＤＮＡ添如到人類息ＤＮＡ和血清樣本的回收牟ｍｉＴａｂｌｅ２．３ＨｉｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｄｅｔｅｒｉｎｅｄｕｓｎｇｔｈｅｒｏｏｓｅｄｍｅｔｈｏｄｖｉａｓｉｋｉｎｓｎｔｈｅｔｉｃＤＮＡｐｐｐｇｙｉｎ化ｈｕｍａｎｔｏｔａｌＤＮＡａｎｄｓｅｒｕｍｓａｍｐｌｅｓＳａｍｌｅＳｉｋｉｎｖａｌｕｅＡｓｓａｅｄｖａｌｕｅＲｅｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔＲｅｃｏｖｅｒｐｐｇｙｐｙｙＮｏ．ｐＭＭ）％％）（）化（）（１０．５００５０１．３１００．０．２５．００４．９４２．．１９８８３５０．００５１．２５３．２１０２．５４０．５００．４８２．７９６．０５５．．００５１４２，０１０２．９６５０．．００４９．５６１６９９．１＊１－３車６血清樣本：洛ＤＮＡ樣本：，＊－ＮＡ－１３ｆｏｒｔｏｔａｌＤｓａｍｌｅｓ４６化ｒ挑ｒｕｍｓａｍｌｅｓｐ，ｐ４小結(jié)Ｅｘｏ一基于ＩＩＩ輔助循環(huán)擴(kuò)増和錯(cuò)配型莖環(huán)催化自組裝技術(shù)，建立了種高靈敏和高特異性檢測ＤＮＡ的新策略。該方法具有較寬的線性范圍、高靈敏度和高特異性及重現(xiàn)性，無需ＰＣ民擴(kuò)増和復(fù)雜的標(biāo)記技術(shù)。同時(shí)此方法己成功應(yīng)用于人正常細(xì)胞總ＤＮＡ和血清樣本中ＤＮＡ的檢測。在不久的將來，本文建立的傳感策略有望成為臨床診斷和治療、病原茜檢測和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域檢測ＤＮＡ的強(qiáng)有力工具。３４ 獻(xiàn)醫(yī)科大學(xué)祗壬研觸學(xué)位論文參考文獻(xiàn)１ＬｉｕＪＷＣａｏＺＨＬｕＹＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｎｉＫ：ｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｎｓｏｒｓＪ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００９［］，，，［］，５－１０９：１９４８１９９８．（）２ＷａｎＦ，Ｅ化ａｚＪＯｒｂａｃｈ民ｅｔａｌ．ＡｎｐｌｉｆｉｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆＤＮＡｂｙｔｈｅａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ［］ｇ，，ａｓｓｅｍｂｌｏｆｏｌｍｅｒｓｃｏｎｓｉｓｔｉｎｏｆＤＮＡｚｍｅｗｉｒｅｓＪ．Ｊ．Ａｍ．ＧｈｅｎｔＳｏｃ．２０１１ｙｙｇｙ［］，，ｐ－１巧４３：１７１４９１７１５１．（）３ＬｉｌｍｅｎｔｏｆｌｌｉｉＦＨａ打ＸＬｕＳＦ．ＤｅｖｅｏａｎｅｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａＤＮＡｂｏｓｅｎｓｏｒｗｉｔｈａ［］，ｔｐｈｉｇｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｂｙｄｅｎｄｒｉｔｉｃｇｏｌｄｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅＪ．［］Ｂｂｓｅ２６１９－２Ｇ２５ｎｓ．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２０１１２Ｇ５：．，，（）巧－４ＬｅｅＪＱＣｈｅｏｎＫＨＨｕｈＮａＬＭｉｃｒｏｃｈｂａｓｅｄｏｎｅｓｔｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｇ，，和［］ｐｒｅａｔｉｌｉｍｅＰＣ民ｉ打ｏ打ｅｃｈａｍｂｅｒｆｏｒｒａｄａｔｈｏｅｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．ＬａｂＣｈｉ２００６ｐｐｇ［］ｐ，，６－：８８６８９５．５ＳｃｈｅｎａＭｂａｔｏｎＤＤａｖｉｓ民ＷｅｔａＬｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｏｆｅｎｅｅｒｅ巧ｋｍ，Ｓ，［］，Ｑｇｇ帶－ａｔｅｒｎｓｗｉｔｈａｃｏｍｌｅｍｅｎｔａｒＤＮＡｍｉｃｒｏａｉｒａＪ．Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９５２７０４６７４７０．：ｐｐｙｙ［］，，Ｗｅ－６ＺｈｏｕＺ｝（ｉＷＺｈａｎＹＪｅｔａｌ．ＤＮＡｒｅｓｏｎｓｉｖｅｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｏｆＡｕＮＰ，［］，，ｇｐｙａ－Ｄｒｅａｔｅｓ；ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｎｏｎｂａｓｅａｉｒｅｄｒｅｉｏｎｓａｎｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂｇｇｇｐｇｙＭａ－ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅＩＩＩａｉｄｅｄａｎｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．Ｊ．ｔｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂ２０１３１：２８５１２８５８．ｐ［］，，［７］Ｆｒｅｅｍａｎ氏ＬｉｕＸＱ，ＷｉｌｌｎｅｒＩ．Ｃｈｅｍｉ山ｍｉｎｅｓｃｅｎｔａｎｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒｇｙｔｒａｎｓｆｅｒ（ＣＲＥＴ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡ，ｍｅｔａｌｉｏｎｓ，ａｎｄａ－ｔｅＨＧ－ＳｅＺｎｐｔａｍｅｒｓｕｂ巧ｒａｃｏｉｒｌｅｘｅｓｕｓｉｎｅｍｉｎ／ｕａｄｒｉ）ｌｅｘｅｓａｎｄＣｄ／Ｓ＾ｇＱ＾－ｕａｎｔｕｍｄｏｔｓＪ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１１３３３０：１１５９７１１６０４．ｑ［］，，（）巧］ＣｈｅｎｇＷ，ＺｈａｎｇＷ，ＹａｎＹ氏ｅｔａＬＡｎｏｖｅｌｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｂｉｏｓｅｎｓｏｒ仿ｒｕｌｆｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃ巧ｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｂａｓｅｄｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎｍｅｄｉａｔｅｄｃｉｒｃｕｌａｒｓｔｒａｎｄｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔａｎｄｒｏｌｌｉｎｇｃｉｒｃｌｅａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．ｐ［］目－ｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２０１４６２：２７４２７９．，，９ｈａｎＤＣａｎＹＲＬａｂ－－ＺＹｉｅｔａｌ．ｅｌｆｒｅｅａｎｄｈｉｈｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ，，［］ｇ，ＬＱｇＳａｓｎａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ－ｓｅｄｂｏｓｅｎＪｌｍｏｎｅｌｌａｕｉｇａｓｕｒ技ｃｅｐｌＤＮＡｂａｉｓｏｒＪ．．［］ＢｏｔｅｃｈｎｏＬ２０－－１２８１２１３４：１２３．ｉ，，６０（）３５ 肪醫(yī)科大學(xué)碩±研觸學(xué)位論文０ＨｒＡＪＰｋｘｃｏＫＷｅｔａＯｔｍｉｚａｔｏｎｏｆａＲｅｕｓａｂｅＤＮＡ１ＣａｓｈＫＪｅｅｅＬｉｉｌ［］，ｇ，，ｐ，－ｄｏｋｎｏ－ｂａｓｅｕｔｓｅｄｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｅｎｓｏｒｆｏｒｓｅｕｅｎｃｅｓｅｃｉｆｉｃＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｐｑｐｂｔｏｏｄｓｅｒｕｍＪ－．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２００９８１２：６５６６６１．［，］，（）［１ＬｕｏＣＨＴａｎＨ，ＣｈｅｎＷ，巧ａｌ．ＡｓｅｎｓｉｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒＵ，ｇｇｓ—ｅｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏ打ｏｆ幻ｃ／ｅｒ／幻ｃｅ幻ｅｂａｃｔｅｒｉａｂｙＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅｉｎａｓｓｉｓｔｅｄｓｉｇｎａｌｐ－ｌｉｆｉｂｉｌ１１ａｎｉｃａｔｏｎＪ，Ｂｓｅｎｓ．Ｂｏｅｅｃｔｒｏａ２０３４８：１３２３７．ｐ［］，，［１２］ＳｃｒｉｍｉｎＰ，ＰｒｉｎｓＬＪ，Ｓｅｎｓｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈｓｉｇｎａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，１－２０：４４４５０５．１４０８８，ｌｃｈｅｎＸＬｉｎＹＨＬｉ？ＦｅｔａＬＡｓｉｍｌｅａｎｄｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡ［ｉ，，，ｐｂ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．ｉｏｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄｏｎＤＮＡｃｏｎｃａｔａｍｅｒｓＪ２０１１４７：，，［］２－１２１１８１１１６．［Ｍ］ＨｕＬＨ，ＴａｎＴＴ，ＣｈｅｎＱｅｔａｌＵｔｏａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＢＣＲ／ＡＢＬｆｉｊｓｉｏｎｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｂａｓｅｄｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅａｓｓｉｓｔｅｄｍｕ化扛ｌｉｃａｔｉｏｎ－ｗｉｃｏｉ）ｌｉｎｉｔｈｕａｎｔｕｍｄｏｔｔａｎＪ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１３３５：１０４１０７．ｑｇｑｇｇｇ，［］，［１５］ＧｕｏＱＰ，ＹａｎｇＸＨ，ＷａｎｇＫＭ，ｅｔａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｉｃ巧－ｔｍｅｒｔ１ａｃｉｄｓｂａｓｅｄｏｎｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｃｉｒｃｕｌａｒｒａｎｄｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｐｏｌｙｉｚａｉｏｎ化３（：１〇１１Ｊｌｉｉ２００９３７２０．ＮｕｃｅｃＡｃｄｓ民ｅｓ．３：ｅ．［］，，（）［１６］ＭｕｒａｋａｍｉＴ，ＳｕｍａｏｋａＪ，ＫｏｍｉｙａｍａＭ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ＾ｎｕｃｅｃ－ａｃｓｅｕｅｎｃｅｒｉｍｅｒｅｎｅ－ｉａｔｏｎｒｏｃｒｃｅａｍｃａｔｏｎＮｕｃｌｅｃｌｉｉｄｑｂｙｐｇｉＵｉｎｇｉｌｐｌｉｆｉｉ．ｉ［巧ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２００９３７３：ｅｌ９．，，（）１７ＷａｎＹａｎＣＹＸｌｌｉｇＱｉａｎＹｅｔａ．Ｄｕａｌａｎｆｔｅｄａｎｄｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ［］，ｇ，ｇ，ｐｅ－ｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｕｔａｎｔＤＮＡＢｉｏｍａｒｋｅｒｓｂａｓｅｄｏｎｎｕｃｌｅａｓｅａｓｓｉｓｔｅｄｔａｒｇｅｔｒｅｃｙｃｌｉｎｇａｎｄｒｏｌｌｉｎｃｉｒｃｌｅａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏｅｔｅｃｔｒｏｎ．２０１４５５：ｇｐ［］，，２６６－２７１．ｌＺｕｏＸｌ＾ＸｉａＦＸｉａｏＹｅｔａＬＳｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｎｌｉｆｉｅｄｆｌ脫ｒｅｓｃｅｎｃｅＤＮＡ，，，ｐ［＾ｅ－ｄｔｅｃｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅｉｎａｉｄｅｄｔａｒｇｅｔｒｅｃｙｃｌｉｎｇＪ．Ｊ．Ａｍ＊Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［］，２０１０１３２－：１８１６１８１８．，ＬＰＷｕＺｔＣｔｔ－ｔ１９ｉｕｉｕＳｅａｌ．ｏｏｅｒａｉｖｅａｎｌｉｆｉｃａｉｏｎｂａｓｅｄｅｌｅｃｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ［］，Ｌ，ＱＱｐｐｓｅｎｓｏｒｆｏｒ化ｅｚｅｔｏｍｏｌｅｄｅｔｅｃｔｋ）打ｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓＪ．ＡｎａｌＣｈｅｍ．２０１３８５１７：ｐ，［］，（）３６ 觀醫(yī)科大學(xué)賦研她飾論文８２２５－８２３１．２０Ｂ－ｉ８ＬｉＬＣｕｉＹＹ－Ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅａｓｓｉｓｔｅｄｃａｓｃａｄｅｄｒｅｃｃｌｉｎａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒ［］，，ｙｇｐ－Ｃｏｍｍ２０４８－ｌａｂｅｌｆｒｅｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡＪ，Ｃｈｅｍｕｎ．１２：１０１８１０２０．［］，，２１ＸｕＦＣａｏＡＰＺｈａｎＬＦ－巧ａＬＲａｉｄａｎｄｌａｂｅｌｆｒｅｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｏｆｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅ［］Ｑ，，ｇ，ｐｇＩ－ＡｌｌａｓｓｉｓｔｅｄｔａｒｅｔｒｅｃｃｌｉｎａｎｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．ｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２０１２８４２４：ｇｙｇ［］，）ｐ，（４５－５１０８１０８１．２２ＬＳＦＺｔ－ｔｒｔｔｒｉｕＷａｎＣＦｈａｎＣＸｅａｌ．Ｌａｂｅｌｆｒｅｅａｎｄｕｌａｓｅ打ｓｉｉｖｅｅｌｅｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ［］，ｇ，ｇ，ｄｅ－ｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃ過ｓｂａｓｅｄｏｎａｕｔｏｃａｔａｌｙｔｉｃａｎｄｅｘｏｎｕｄｅａｓｅｉｎａｓｓｉｓｔｅｄｔａｒｇｅｔ－ｒｅｃｙｃｌｉｎｇｓｔｒａｔｅＪ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３８５４：２２８２２２８８．ｇｙ［］，，（）Ｐ＾Ｆｒｅｅｍａ打氏ＬｉｕＸ化ＷｉｌｌｎｅｒＩ．ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＭｕｌ咕ｌｅｘｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆＤＮＡｂｙｔｈｅｅｘｏｎｕｃ－ｔｔｔａｔｔｌｅａｓｅＩＨｃａｔａｌｙｚｅｄｒｅｇｅｎｅｒａｂ打ｏｆｈｅｒｇｅＤＮＡｉｎｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｆｕｎｃｔｂｎａｌｉｚｅｄｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒｕａｎｔｕｍｄｏｔｓＪ．ＮａｎｏＬｅｔ．２０１１１：［］，１，１０）ｑ（４４－４４６１％．＂Ｚｈａ打－ＨＬｉＦｅｖｅｒｅｔａｌ．ＤＮｍｅｄｉａｔｅｄｈｏｍｏｅｎｅｏｕｓｂｉｎｄｉｎａｓｓａｓｆｏｒｇ，ＤＢ，ＡＰＷＱ，ｇｇｙ－ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓａｎｄｒｏｔｅｉｎｓＪＣＲｅｖ．２０１３１１３４：２８１２２８４１．ｈｅｔｎ．．ｐ［］，，（）２５ＣｈｅｎＣＬｉＢＸ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒｔｒａｎｓｆｅｒｂｉｏｓｅｎｓｉｎｌａｔｆｏｒｍ，ｇｙｇ［］ｐｒｔｅ－ｆｏｓｉｓｐｅｃ姐ｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄａｓｓａｙｏｆＤＮＡｉｎ－ｍ巧ｈｙｌｔｒａｎｓ色化５６ａｃｔｉｖｉｔｙｕｓｉｎｇｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅａｓｓｉｓ化ｄｔａｒｇｅｔｒｅｃｙｃｌｉｎｇａｎｆｉｃａ－ｐｔｉｏｎＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏ化，２０１４，５４：４８５４．ｌｉ［］ＬＷ拉ｍ－２６ｉｕＳＦａｎＹＺｈａｎＸｅｔａＬＨｏｍｏｅｎｅｏｕｓｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌａｅｒｂａｓｅｄ［］，ｇ，ｇＣ，ｇｐＡＴＰａｓｓａｙｗｉｔｈｓｉｇｎａｌａｎｐｌｉｆｉｃａｔｋｍｂｙｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅｉｎａｓｓｉｓｔｅｄｔａｒｇｅｔｒｅｃｙｃｌｉｎｇ［Ｊ］．ＣｈｅｍＣ２０３４９３３５－．ｏｍｍｕｎ．１：２２３３７．，，－２７ＹｉｎＰＣｈｏａｌｖｅｒｔｅｔａＬｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｅｌｆａｓｓｅｍｂｌｉＨＭＴＣＣ［］，，氏ｙａｔｈｗａ－ｓＪ．Ｎａｔｕｒｅ２００８４５１：３１８３２２．ｐｙ［］，，＂ｍｅｄｅ２８化ｎｇＹＳＬｉＢＬＭｉｌｌｉａｎＪＮｅｔａＬＲｅａｌｔｉｔｅｃｔｉｏｎｏｆｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ［，，ｇ，］ａｎｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｃｔｋ）打ｓｗｉｔｈｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅｃａｔａｌｙｔｉｃｈａｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌＪ．Ｊ．Ａｍｐｙ［］Ｃｈｅｍ－．Ｓｏｃ．２０１３１３５２０：７４３０７４３３．，，（）［２９］ＬｉＢＬＪｉａｎｇ乂Ｃｈｅｎ義ｅｔａｌ．ＰｒｏｂｉｎｇｓｐａｔｉａｌｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｓｔｒａｎｄｓ膽ｉｎｇｅｎｚ－ＦｒｅｅｈａＪＡｍｍｅｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌｃｉｒｃｕｉｔｓＪ．．．ＣｈｅｍＳｏｃ．２０１２１３４３４：ｙｐｙ［］，，（）３７ 戯屋科大學(xué)巧±研船學(xué)位論文９１８－１３１１３９２．３０ＺｈＬＷａｎ－ｅｎｇＡＸｉＪＪ巧ａｌＥｎｚｍｅｆｒｅｅｓｉｎａｌａｔｎｌｉ巧ｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ．［］，ｇｙｐ，ｇＤＮＡｚｔｏｒｅｔ－ｃａｔａＪ２０１２ｙｍｅｓｅｎｓｏｒｖｉａｇｌｙｚｅｄｈａｉｒｐｉｎａｓｓｅｍｂｌｙ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，［］，４８３－１１２３１１４．：－－３１ＬＹＨＨＲＭａＺｅｔａ．ＴａｒｔｔｒｅｒｅｄｅｎｚｍｅｆｒｅｅａｎｔｏｎｉａｏｕａｎｇＫｌｅｉＨｆｉｃａｉ［］，ｊ，ｇｇｇｙｐｓｔｒａ化ｇｙｆｏｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｔｉ巧ｕｅｓＪ．Ａｎａｌ［］Ｃ６－４６０４ｈｅｍ．２０１４８６９：４５９．，，（）ＺｈＪ－３ｕａｎｇＹＬａｉＷ，ＣｈｅｎＧＮｅｔａｔＡｒｏｌｌｉｎｃｉｒｃｌｅａｎｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｂａｓｅｄＤＮＡ：Ｑ，ｇｐ［＾ｍａｃｈｉｎｅ仿ｒｍｉＲＮＡｓｃｒｅｅｎｉｎｇＣＯ呼ｌｉｎｇｃａｔａｌｔｉｃｈａｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌｙｗｉｔｈＤＮＡｚｍｅｙｐｙｒｍａ－ｆｏｔｋ＞ｎＪ．Ｃｈｅｍ＊Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１４５０：２９３５２９３８．［］，［３３］ＪｉａｎｇＹＳ，ＢｈａｄｒａＳ，ＵＢＬ，ｅｔａｌ．Ｍｉｓｍａｔ：ｃｈｅｓｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆ－ＣｈｅｍｓｔｒａｎｄｄｔｎｕｃｅｃａｃｃｕｉｔｓＪＡｎｅｗ．２０１４２６７ｉｓｌａｃｅｍｅｎｌｉｉｄｃｉｒ．ｇ．，１：ｐ［］，（）－１８７６１８７９．［３４］ＺｈａｎｇＹ，ＹａｎＹ氏ＣｈｅｎＷＨ，ｅｔａｌ．Ａｓｉｎ罕ｌｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｂａｓｅｄｏｎｍｉｓｍａｔｃｈｅｄｃａｔａｌｙｔｉｃＪＢＢ２０－ｈａｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌ．ｉｏｓｅｎｓ．ｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．１５６８：３４３３４９．ｐｙ［］，，［３５］ＺｈｏｕＷＪ，Ｇｏｎｇ式ＸｉａｎｇＹ，巧ａＬＱｕａｃｋａｔｉｃｒｅｃｙｃｌｉｎｇａｎｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｌａｂｅ＾ｆｔｅｅａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅｖｉｓｕａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＩＶＤＮＡＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｂｅｌｅｃｔｒｏａ２０１４５５：［］，，－２２４２２０．３６ａｅｎＹＣＳｅｔａＡ＂ＳｔＣｉＺＭＣｈＹｉｎａｌａｎＨｆｉｃａｂｎｍｅｔｒｔ，Ｌｉｎ，ｌｄｕａｌｈｏｄ仿ｈｅ［］，ｇｐＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｅｘｏ打ｕｃｌｅａ％ＩＩＩＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．，２０１４，６１：［］３７０－３７３．［３７］ＭａＣＰ，ＷａｎｇＷＳ，ＬｉＺＸ，ｅｔａＬＳｉｍｐｌｅｃｏｌｏｒｉｍｅ任ｉｃＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｈａｉｒｐｉｎａｓｓｅｍｂｌｙｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｔａｒｇｅｌ＞ｃａｔａｌｙｔｉｃｃｉｒｃｕｉｔｓｆｏｒｓｉｇｎａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＪ．［］２０４２９２－Ａｎａ：９９２ｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１２１０．，，（）［３巧ＬｉＨＬ＾，ＲｅｎＪＴ，ＬｉｕＹＱ，ｅｔａｌ．ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍａｃｈｉｎｅｉｎａｎｐｌｉｆｉｅｄＤＮＡ２０１４－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎＪ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，，５０：７０４７０６．［］Ｌｍｅ－３９ｉＢＬＥｌｌｉｎｔｏｎＡＤＣｈｅｎ義Ｒａｌ：ｋ）ｎａｌｍｏｄｕｌａｒａｄａｔａｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｆｒｅｅＤＮＡ［，，ｐ］ｇｃｉｒｃｕｋｓ化ｍｕｌｔ如ｌｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２０１１，３９（１６）：ｅｌ１０．３８ 職醫(yī)稱大學(xué)肥研巧生學(xué)位論文４０ＷｕＨＬ－ｖｅｃｏｉｕＹａｎｅｔａｌ．Ｌａｂｅｌｆｒｅｅａｎｄｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ［］，心ＷｇＨＹ，ｄｅｔｅｃｔ－ｉｏｎｏｆＤＮＡｂａｓｅｄｏ打ｔａｒｇｅｔｔｒｉｇｇｅｒｅｄｕａｄｒａｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅＪ．ｑｇｙ［］ＢＢｔ２０１５－２８２ｉｏｓｅｎｓ．ｉｏｅｌｅｃｒｏｎ．６６；２７７．，，３９ 獻(xiàn)醫(yī)科大學(xué)紙研巧生學(xué)位論文文獻(xiàn)離電化學(xué)ＤＮＡ生物傳應(yīng)器的發(fā)展捆要！電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器由于具有高靈敏度、便攜性和準(zhǔn)確性等優(yōu)點(diǎn)，己在多個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。在ＤＮＡ生物傳感器的分支中，電化學(xué)方向已有了近蘭十年的發(fā)展和應(yīng)用，ＤＮＡ的嘿嶺堿基即鳥嚷嶺和腺嘿嶺在。當(dāng)儀器參數(shù)為正電位時(shí)工作電極產(chǎn)生氧化電流。由于ＤＮＡ的這種特性，電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器己被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、生物醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)及環(huán)境研究等各領(lǐng)域。在過去幾年中，隨著納米技術(shù)的應(yīng)用，各種納米材料己被用來提高生物傳感器的靈敏度。對(duì)ＤＮＡ固定策略的清晰認(rèn)知在傳感器的各種應(yīng)用中是非常有必要的。本文詳細(xì)闡述了電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器的初始發(fā)展和現(xiàn)狀，Ｗ便了解電化學(xué)ＤＮＡ傳感器的原理和應(yīng)用。，ＤＮＡ，ＤＮＡ，ＤＮＡ固定和ＤＮＡ相關(guān)鍵詞：電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器損害雜交互作用１引言電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器具有能克服其他傳感器局限性的潛在優(yōu)勢，如快速響應(yīng)、高靈敏度、高選擇性和實(shí)驗(yàn)簡便等。它們?yōu)槎舅?、抗癌分子、雜交和生物分一Ｗ子等的檢測提供了種更優(yōu)越的方法，ＤＮＡ。最初用可Ｗ固定分子的金屬和玻碳電極即可使之成為可能。在ＤＮＡ的４種堿基中，只有嘿吟堿基的氧化可被電一?；瘜W(xué)監(jiān)測到在伏安測定法中，它們都可在個(gè)較小的電位產(chǎn)生氧化。除了伏安測定法，利用氧化還原探針的電化學(xué)阻抗法和循環(huán)伏安法成為研究工作電極上ＤＮＡ堿基薄膜形成能力的有力工具Ｗ。此外，有研究還證明了嘿吟堿基在電極表Ｗ面的氧化變化與氧化還原探針的成膜能力和電子轉(zhuǎn)移特性直接相關(guān)。電化學(xué)測量所獲得的特征峰值可被用來研究ＤＮＡ鏈分子之間的相互作用。這篇綜述回顧了ＤＮＡ生物傳感器的初始發(fā)展和用于提高其靈敏度和選擇性的方法，同時(shí)也討論了用于構(gòu)建電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器的多種ＤＮＡ固定方法。４０ 獻(xiàn)醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文２巧抬發(fā)展二十世紀(jì)末是生物傳感器開發(fā)和分歧的初期。送個(gè)時(shí)期很少有關(guān)于用生物傳Ｗ感器檢測ＤＮＡ的研巧報(bào)道。在巧始階段，生物傳感器的最常見應(yīng)用為利用葡萄糖氧化酶進(jìn)行電化學(xué)檢測葡萄糖。這種酶主要與電位和電流分析法共同使用。理一論上，ＤＮＡ生物傳感器可Ｗ為生物體基因組內(nèi)的特定基因提供個(gè)異常敏感和高選擇性的檢測方法。實(shí)際上這種性能是通過下技術(shù)被建立起來的：使用放射性Ｗ標(biāo)記、非放射性候選包括親和素／生物素和新穎的酶標(biāo)記系統(tǒng)來鑒定感興趣的恃定基因的存在。應(yīng)該注意的是，所有這些技術(shù)均需要專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室來完成。１９８７ＭＷＥ年，ａｒｋＡＤｏｗｎｓ等專注于生產(chǎn)廉價(jià)和快速檢測的生物系統(tǒng)，其具有高靈敏度、低成本和定量的特性，從而導(dǎo)致采用溶出伏安法的電化學(xué)ＤＮＡ檢測的流行。８Ｅ［］ｅｃｅｋ９８８，當(dāng)．化ｌ于１年證明了核酸的電化學(xué)行為電化學(xué)ＤＮＡ傳感器有了一進(jìn)步的發(fā)展。他展示了核酸是電活性物質(zhì)，在束電極上能產(chǎn)生良好的伏安峰。核酸修飾的電極可通過將隸電極浸入ＤＮＡ溶液而簡單制備一。該是第支由核酸修一，極大地減少了分析中ＤＮＡ的用量飾的電極。雙螺旋中ＤＮＡ的個(gè)小的損害也，極譜和伏安方法被提出用于核酸的直接定量可被敏感的鑒定出。從那時(shí)起、雜交的檢測和ＤＮＡ損傷的評(píng)價(jià)。在ＤＮＡ的４種堿基中，只有嘿吟堿基的氧化可被電化學(xué)監(jiān)測到。與喀隨堿基一－相比，它們都可在個(gè)較小的電位產(chǎn)生氧化。哲基自由基添加到嘿吟中，使Ｃ４ＯＨ、Ｃ５－ＯＨ８－０Ｈ加合物自由基得到了增長－ＯＨＣ５－ＯＨ加和Ｃ。Ｃ４和合物自由基經(jīng)過脫水得到氧化型的嚷吟基團(tuán)８－ＯＨ，其在還原態(tài)能重姐嘿吟。Ｃ加合物自由基上的１８－経基腺嘿嶺和甲醜喀晚個(gè)電子氧化和１個(gè)電子還原分別產(chǎn)生。腺嘿嶺的類似反８－４－６■二氨基－５－甲酷嗦巧應(yīng)產(chǎn)生籍基腺嚷嶺和。這些產(chǎn)物在有無氧存在下都能生。－成然而，８経基嚷吟偏好在有氧條件下生成。哲基自由基能使上述ＤＮＡ生成多９１〇［，】種產(chǎn)物。３當(dāng)下現(xiàn)狀目前已有幾篇關(guān)于固定ＤＮＡ分子層的電化學(xué)生物傳感器報(bào)道，用于測定與ＤＮＡ相互作用的電活性和非電活性的化合物，檢測ＤＮＡ的特定序列和監(jiān)測ＤＮＡ４１ 戯醫(yī)科大學(xué)紙研觸學(xué)位論文Ｗ１的完整性。這些發(fā)現(xiàn)指導(dǎo)了ＤＮＡ生物傳感器在臨床診斷、法醫(yī)和生物醫(yī)學(xué)中的發(fā)展應(yīng)用。此外，電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器為ＤＮＡ相互作用和ＤＮＡ損傷的研究一ＤＮＡ的提供了種新的候選方法。基于診斷試驗(yàn)在很多領(lǐng)域都獲得了巨大的發(fā)展，ｔｎｉ如遺傳學(xué)、病理學(xué)、犯罪學(xué)、藥理學(xué)、食品安全和法醫(yī)學(xué)等。Ｐｅｄｅｄｏ和民ｉｖａｓ為了發(fā)展基于親和為結(jié)合的生物傳感器，研巧了ＤＮＡ在玻碳１３，２９［＾他電極上的固定性質(zhì)們發(fā)現(xiàn)，電化學(xué)預(yù)處理、支持的電解質(zhì)、齒化物、單價(jià)陽離子、ＤＮＡ的長度和組成、固定電位和時(shí)間對(duì)核酸在碳表面上的電化學(xué)反應(yīng)起著重要的作用。關(guān)于單鏈ＤＮＡ的相關(guān)報(bào)道文獻(xiàn)比較少。不像雙鏈ＤＮＡ，來自小牛胸腺的單－ＤＮＡ鏈被固定在電極表面用于不同環(huán)境污染物的檢測，如ＰＣＢ（聚氯聯(lián)苯）海合物、莽去津、鄰苯二甲酸鹽、耕Ｗ和ＰＡＨ（多環(huán)芳香控）Ｍ。這些研究指出，固定在電極上的單鏈ＤＮＡ顯示出更高的氧化信號(hào)，因?yàn)閱捂湥模危恋膲A基可Ｗ自由地與鄰近的分子反應(yīng)。盡管送樣，雙鏈ＤＮＡ仍經(jīng)常被使用。因?yàn)榇蠖鄶?shù)的基因組一是雙鏈，并且這些雙鏈相互作用的結(jié)果更容易讓人理解，有利于進(jìn)步的實(shí)際應(yīng)一用。不管如何—，單鏈ＤＮＡ在ＤＮＡ雜交研巧中的作用是獨(dú)無的。３．１ＤＮＡ朵交研究３＋核酸在玻碳電極氧化表面的固定用ｃｏ（ｐｈｅｎ）３作為指示劑。研巧發(fā)現(xiàn)，當(dāng)含有ＤＮＡ的溶液在玻碳電極表面蒸發(fā)至干時(shí)，ＤＮＡ被緊密地吸附在電極上。嵌入劑作為ＤＮＡ雜交檢測的氧化還原標(biāo)記物是特別令人感興趣的，因?yàn)樗鼈兣cＤＮＡ雙螺＂＂。ＤＮＡ旋中堿基對(duì)形成的７１堆疊相互作用嵌入劑可與雙鏈發(fā)生電子交換，與電極么間進(jìn)行長距離有效的電子轉(zhuǎn)移，而單鏈ＤＮＡ則無此特性。Ｂａｒｔｏｎ和他的合１６作者最先提出Ｗ遠(yuǎn)距離的電子轉(zhuǎn)移作為ＤＮＡ雜交生物傳感器的基礎(chǔ)［１亞甲，其中基藍(lán)被用作ＤＮＡ雙鏈的嵌入劑觀測電化學(xué)電流。類似的原理，平面芳炫分子、道諾霉素ｎＤＮＡ、漠化乙錠、丫巧染料和蔥醜衍生物亦被用作研巧雜交的指示劑。對(duì)ＤＮＡ堿基對(duì)的任何干擾都會(huì)影響完美的ｎ堆疊而引起電化學(xué)電流的衰減一。這特點(diǎn)使得單堿基錯(cuò)配的檢測不需要經(jīng)過嚴(yán)格的洗緣即可進(jìn)行。３．２ＤＮＡ損傷４２ 誠醫(yī)科大學(xué)社研觸學(xué)位論文一如前面所討論的，當(dāng)ＤＮＡ遇到種分子損害它的結(jié)構(gòu)時(shí)，ＤＮＡ中嚷嶺堿基氧化信號(hào)的變化會(huì)被檢測到。ＤＮＡ的送種性質(zhì)為損傷ＤＮＡ的分子測定提供了方法。ＤＮＡ在水污染物中的損傷性質(zhì)，已被用于探索其制備的生物傳感器在廢水樣ｉｇ［１７１ＷＰＷ、ＤＮＡ生品、環(huán)境污染物芳香賠哺廚污染物等分析中的應(yīng)用。該物傳一Ｔｏｘｒｔ感器響應(yīng)預(yù)示廢水樣品中有個(gè)或多個(gè)分子結(jié)合，此方法與ａｌｅ響應(yīng)有很好的相關(guān)性ｘａｌｅｒｔ（Ｔｏ為用于高通量毒性預(yù)測的不可缺少的工具）邱等人開發(fā)了雙酌Ａ自由基的電化學(xué)檢測方案，是基于雙齡Ａ自由基的ＤＮＡ損傷機(jī)制的鳥嘿吟產(chǎn)生的電氧化信號(hào)。３．３ＤＮＡ相互作用與測定ＤＮＡ相互作用的傳統(tǒng)方法相比，電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器相互作用的研究近期才起步。最初，ＤＮＡ相互作用的研究是通過光學(xué)和多種生物分析方法達(dá)ＷＰ成的。Ｐａｎｃｋｙ和ｅｅｔａＵ叫每流動(dòng)注射系統(tǒng)與倏逝波生物傳感器結(jié)合用于典型的相互作用的研究。雙鏈ＤＮＡ與其他分子相互作用的研究，特別是與藥物的關(guān)聯(lián)，在生命科學(xué)中具有重大意義。這些研究闡述了許多藥物化合物的作用機(jī)制，新的ＤＮＡ－藥物生物傳感器的設(shè)計(jì)和體外藥物的監(jiān)測ＤＮＡ。將固定的與溶液中的分析物相互作用之后進(jìn)行電化學(xué)測定己經(jīng)成為可能。分析物與ＤＮＡ相互作用后的電化學(xué)信號(hào)可為相互作用的機(jī)制、復(fù)合物形成的性質(zhì)、結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)的大小和ｎｔｉ自由基在藥物相互作用中的用途提供依據(jù)。不同分子與ＤＮＡ的相互作用有多種模式－。這些包括與帶負(fù)電荷的核酸糖磯酸結(jié)構(gòu)的靜電相互作用（通常是非將異性的），堿基對(duì)間平面的芳香環(huán)體系的相互作用（平面有機(jī)分子含有幾種芳香稠環(huán)常與ＤＮＡＷ插入方式結(jié)合，例如柔紐霉素，表阿霉素和放線菌素Ｄ）及ＤＮＡ大小溝的相互作用。小溝結(jié)合主要發(fā)生在小溝邊緣，主要與小分子相結(jié)合。由于逸種作用，眾多氨鍵和靜電作用力發(fā)生在藥物和ＤＮＡ之間（ＤＮＡ堿基和憐酸骨架，例如：光神霉素）。大分子主要與大溝槽結(jié)合。ＤＮＡ一，ＤＮＡ大溝結(jié)合經(jīng)由氨鍵與結(jié)合發(fā)生并能形成個(gè)的Ｈ螺旋，如諾氣沙星２４［］〇一－ＤＮＡ相互作用的研究目前己有多種技術(shù)用于藥物，但沒有種技術(shù)能獨(dú)立解決ＤＮＡ相互作用的問題－ＤＮＡ的。因此，急需發(fā)展新穎和改良的方法來測定藥物４３ 重慶醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文相互作用－ＤＮＡ相互作用的電化學(xué)。對(duì)藥物研究引起人們的高度關(guān)注，也為闡述藥－ＤＮＡ相互作用的機(jī)制提供無限可能－ＤＮＡ物。至今已有多種電極用于藥物相互作用的研究，包括玻碳糊電極、金電極、石墨電極、玻碳電極和絲網(wǎng)印刷電極。循環(huán)伏安法、、方波伏安法示差脈沖伏安法和計(jì)時(shí)電位法等電化學(xué)技術(shù)已被用于藥Ｐｙ－ＤＮＡ物相互作用的研究。Ｐ６２７道諾霉素］和環(huán)丙沙星［］與ＤＮＡ的相互作用可用ＤＮＡ修飾的碳電極進(jìn)行研究一。鳥嘿吟信號(hào)的減少被用作相互作用機(jī)制的個(gè)指示劑。溶液的離子強(qiáng)度與分子的結(jié)合力密切相關(guān)。研究證實(shí)：，環(huán)丙沙星與ＤＮＡ可能有兩種不同的結(jié)合模式靜電力或插入式。相比較插入式結(jié)合，靜電結(jié)合力對(duì)藥物而言更有意義。而利福ＮＰＳ１平與單雙鏈ＤＡ的相互作用模式是插入式的。３．４ＤＮＡ在電極上的固定策略ＤＮＡ最簡單的固定方法是將短ＤＮＡ模板電吸附在工作電極上一，制備個(gè)穩(wěn)一２９ｌ［レ／定的生物識(shí)別層ッ便進(jìn)步應(yīng)用。有１篇應(yīng)用此技術(shù)的報(bào)道檢測限為２５ｌＬ。＾ｇ最近幾年，高度敏感和選擇性的ＤＮＡ生物傳感器的發(fā)展是研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。為了實(shí)現(xiàn)ＤＮＡ的高靈敏度檢測，不同形態(tài)的納米結(jié)構(gòu)己被用于界面的修飾，旨在增加固定化探針ＤＮＡ的濃度和提高固定化ＤＮＡ的電化學(xué)信號(hào)。用于電極表面修飾ＰＷ的納米材料包括金屬納米顆粒、半導(dǎo)體納米顆粒、納米線、碳納米管和納米孔等。ＤＮＡ生物傳感器制備的基本原理如圖３．１所示。．ＡＡＥＬｔｄ「ｐｍｅｃｒｏｃ｜ｇＳｕｆｆｉｃｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｎａｎｏｔｎａｉｅｎａｌｓｏｌｍ＂（ｐｙｃｕｍｐｕａｉｌｅｓｉ，ｓｕｉｍｉ＾ｖｉｅｐ）ＩｊＵ］Ｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｄｌｉｒｅｄｓｓｄｓＤＮＡ．ａｍｕｓｃｌｆｔｈｙＤＭＡｈｅａｍｓｅｒｍＪｒｓＡｇｐ１．Ｊ……Ｉ３１ＤＮ困．Ａ生物傳惠器制備的基本原理Ｆｉｇ．３．１ＢａｓｉｃｓｃｈｅｍｅｏｆＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ４４ 齡醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文Ｋｅｌｌｅｙ研究小姐制造了用納米線和Ｐｄ納米結(jié)構(gòu)修飾的電極，并通過控制ＤＮＡ探針的方向取得了ＤＮＡ的髙靈敏檢測。此傳感器祀ＤＮＡ的檢測限約為１．０Ｐ２］馮等人發(fā)明的樹突狀金納米結(jié)構(gòu)修飾的ＤＮＡ生物傳感器取得了相同的檢測限。常和他的同事制造了基于導(dǎo)電聚苯胺納米管修飾的電化學(xué)ＤＮＡ傳感器，此策略獲３３［１得了低于。－Ａ１ｆＭ的檢測限通過將敏感的電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器和ＤＮＡｕ生一物條形碼信號(hào)放大技術(shù)相組合，ＤＮＡ的檢測限得到了進(jìn)步的下降２８ａＭ）（至ｔｗＭ的檢測限ｐｑ。用納米金修飾電極和亞甲基藍(lán)作為電化學(xué)指示劑可獲得１０ｐ。基于滲雜有飽納米顆粒的碳納米管修飾的電化學(xué)生物傳感器，鞭ＤＮＡ的檢測限為ＰＷ（Ｕ２ｐＭ。這些結(jié)果表明，界面修飾過程中納米材料的引入能有效地增大電極的表面積，增強(qiáng)ＤＮＡ的固定特性。下面我們將為大家列舉幾種關(guān)于ＤＮＡ固定的最有效策略。＞對(duì)于使用多壁碳納米管Ｗ提高電化學(xué)性能的ＤＮＡ生物傳感器，殼聚糖是最常用的粘合劑。殼聚糖能增強(qiáng)多壁碳納米管的分散性和生物分子在，使碳納米管一Ｗｌ不同的電極結(jié)合的更加緊密。此外，旦與戊二酵交聯(lián)，固定在碳電極表面的多壁碳納米管－殼聚糖的化學(xué)處理已經(jīng)被證明極大影響ＤＮＡ的吸附和電氧３８１１化。’－＞－有研究者用乙酸等離子體處理用金修飾的定向碳納米管，在５端磯酸上通過－ＣＯＯＨ基團(tuán)ＥＤＣ－－二甲－－蘭胺形成等離子體誘導(dǎo)，在１（３基氨基丙基）３藝基［口９二亞］碳胺鹽酸鹽］偶聯(lián)劑存在下増加傳感器的靈敏度和選擇性。＞琉基鹽包被的拍電極制備過程：將琉基鹽加入乙酸鹽緩沖液和丙麗的混合物中，其后來被烘干，再與碩乙酸賠育和激活水溶性碳水化合物基團(tuán)Ｗ固定ＤＮＡ［氣＞將干凈的金電極浸入半脫胺溶液中（形成半脫胺／金電極的單層），接著漫入膠ＩＷ－ＤＮＡ固定在體金溶液Ｗ將ＳＳ膠體金修飾的電極上，形成自狙裝模式。中空金納米球也被用來修飾電極，使電化學(xué)ＤＮＡ生物傳感器的雜交檢測限達(dá)到４２Ｍｆ１Ｉ。用鑲作為催化劑，修飾有多壁碳納米管的金電極也被應(yīng)用到研究中ｐ。－３－－碳納米管被＾乙基（３二甲氨基丙基）碳化二亞胺激活，與帶有氨基末端基團(tuán)的ＤＮＡ寡核巧酸共價(jià)結(jié)合時(shí)間為１２小時(shí)Ｗ１。方研究組利用ＭＢ來檢測氧［＾化錯(cuò)電極表面發(fā)生的雜交情況。所有逸些策咯均需要經(jīng)化學(xué)修飾的ＤＮＡ序４５ 軟醫(yī)科大學(xué)碩±研勝學(xué)位論文＾５＂＂＾列（例如硫醇或氨基修飾）和高度專業(yè)的設(shè)備＾４結(jié)論碳納米管作為日益重要的納米材料的代表，具有獨(dú)特的幾何、機(jī)械、電子和化學(xué)性能。這些優(yōu)點(diǎn)使其在電化學(xué)檢測中受到極大的關(guān)注。碳納米管的吸附性能反映其巨大的比表面積。石墨稀片層結(jié)構(gòu)已經(jīng)被開發(fā)用于延長吸附溶出伏安法對(duì)重要分析物的檢測范圍。由于碳納米管修飾電極的獨(dú)特性質(zhì)，其己經(jīng)被用于硝基４８ｔ］２４６－王硝。工作電極上納米結(jié)構(gòu)的修飾可苯類爆炸物，，基甲苯的超痕量測定一個(gè)策略或多個(gè)組合來構(gòu)造通過下：直接靜電組裝、共價(jià)連接、聚合物包被、－共同混合、溶膠凝膠和電沉積技術(shù)。隨著電化學(xué)ＤＮＡ傳感器的不斷發(fā)展，其在臨床診斷、食扁安全和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域的應(yīng)用前景會(huì)越來越好。４６ 館醫(yī)科大學(xué)碩丈研勝學(xué)位論文參考文獻(xiàn)－ＲａｍａｒａＲ．Ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｍｅｔａｌａｒｔｔｒｔｔｔｉｃｌｅｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｏｄｅｓ仿ｒｅｔｅｃｒｏｃａａｌｉｃ［Ｕｊｐｙ－ａｎｄｓｅｎｓｏｒａｌｉｃａｔｈｅｍＬｉｏｎｓＪ．Ｊ．Ｃ．Ｓｃ２００６１１８６：５９３６００．ｐｐ［］，，（）［２］ＧａｙａｔｈｒｉＳＢ，ＫａｍａｒａｊＰ，ＡｒｔｈａｎａｒｅｅｓｗａｒｉＭ，ｅｔａｌ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｅｎｚｅｎｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｕｓｉｎｇｃａｒｂｏｎｂａｓｅｄｕｒｉｎｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｔｈｒｏｕｈｐｇｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｍｅｄａｎｃｅｓｅｃｔｒｏｓｃｏＪ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２０１４９１１：ｐ［］，ｐｐｙ，（）６－１１３６１２３．口］ＧａｙａｔｈｒｉＳＢ，ＫａｍａｒａｊＰ，ＡｒｔｈａｎａｒｅｅｓｗａｒｉＭ．Ｍｕ化ｉｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｂａｓｅｄｐｕｒｉｎｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｆｏｒｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂｅ打ｚｅｎｅａｎｄｉｔｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｕｓｉｎｇ－Ｄｉｌｌｌｉ祗ｒｅｎｔａＰｕｓｅＶｏｔａｍｍｅｔｒＪ．ＩＪＭＣＲ２０１４２：２１１２１７．ｙ，［］５＾［４］ＧａｙａｔｈｒｉＳＢ，ＫａｍａｒａｊＩ，ＡｒｔｈａｎａｒｅｅｓｗａｒｉＭ，ｅｔａｌ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｒａｃ－ｃｈａ１：ｅｒｚａｔｏｎｏｆｕａｎｎｅａｎｄｂｓｅｔｉｉｇｉｇｕａｎｏｓｉｎｅａｄｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓｏｖｅｒｍｕｌｉｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｍ〇（Ｈｆｉｅｄｇｒａｐｈｉｔｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅ口？Ｃｈｅｍ．ＳｃＬＴｒａｎｓ．，２０１４，３４：］（）－１４４６１４５４．［５］ＴｕｒｎｅｒＡＰＦ，ＫａｒｕｂｅＩ，ＷｉｌｓｏｎＧＳ．Ｅｍｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ：ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｍ］．ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７．＇ｉｌｍａｎｕａ６ＭａｎｉａｔｉｓＴＦｒｂｃｈＪＳａｒｂｒｕｃｋＥＦ．Ｍｏｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎ：ａｌａｂｏｒａｔｏｒｌＭ，，，ｇｙ［］［］ＮｅｗＹｏｒｋｌｉｎ；ＣｏｄＳｐｒｇＨａｒｂｏｒ１９８２．，［７］ＤｏｗｎｓＭＥＡ，ＷａｒｎｅｒＰＪ，ＴｕｒｎｅｒＡＰＦ．ＯｐｔｉｃａｌａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡＪＢｏｒｍｔｅａ１１６６－７０．ｉｒｉｌｓ９８８９：．［］，），（８ＰａｉｖｅｔｒａｎｓｆｅｒｓｌｌｅＳｅｋＥ．Ａｄｓｏｒｔｉｎｖｏｔａｍｍｅｔｒ：Ｄｅｔｅｒｍｉｎ過ｔｉｏｎｏｆｎａｎｏｒａｍ［］ｐ帥ｐｇｙｇｑｕａｎｔｉｔｉｅｓｏｆＤＮＡｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄａｔｔｈｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｕｒｆｅｃｅＪ．Ａｎａｌ．良ｉｏｃｈｅｉｕ，１９８８，［］－１７０２：４２４１．）１３（９Ｐ－ａｌｅｃｅｋＥＦｒＤＮＡｔｉｌｉｉｌｉｉｄｉ．ｏｍｏｌａｒｏｒａｈｏｆｏｍｃｒｏａｎａｓｓｗｔｈｎｕｃｅｃａｃｍｏｄｆｉｅｄ［］ｐｇｐｙｙ－ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓＪｌｉ．Ｅｅｃｔｒｏａｎａｌｙｓｓ１９９６８１：７１４．［］，，（）１０ＤｚｄａｒｏｌｕＭＪａｒｕＰＢｒｎｃｏｉＭｅｔａＦｒｅｅｒａｃａｅｄｄａｍａｅｌｘ）ＤＮＡｉｇｉｉｉｌ．ｄｉ＾ｉｎｄｕｃ：［］，ｇａ，ｇｋ，ｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｙ．Ｆｒｅｅ民ａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，２００２３２１１：］，（）－１１１５１１０２．４７ 動(dòng)醫(yī)科大學(xué)碩主研觸學(xué)位論文－１ｌＫａｍｅｌＡＨＭｏｒｅｉｒａＦＴＣＤｅｌｅｒｕｅＭａｔｏｓＣｅｔａｌ．Ｅｌｅｃ社ｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ［］，，，ｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｉｅｓｉｎｆｌａｖｏｒｅｄｗａｔｅｒｓｂｙｕａｎｉ打ｅａ打ｄａｄｅ打ｉｎｅｂｉｏｓｅ打ｓｏｒｓＪ．ｇ［］ＢＢｏｅｔｅｃ－ｔｒｏｎ５９９ｉｏｓｅｎｓ．ｉ．２００８２４（４：５９１．，，）［。］ＢｏＹ，Ｙａ打ｇＨ，ＨｕＹ，ｅｔａｌ．ＡｎｏｖｅｌｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄｏｎｒａｈｅｎｅａｎｄｏｌｌａｎｉｌｉｎｅｎａｎｏｗｉｒｅｓＪ．Ｅｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．Ａｃｔａ２０１１５６６：ｇｐｐｙ［］，，（）２６７６－２６８１．１３ＰｅｄａｎｏＭＬＲｉｖａｓＧＡ．Ａｄｓｏｒｔｉｏｎａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓａｔｃａｒｂｏｎ［］，ｐｎａｎｏＣ－ｔｕｂｅｓａｓｔｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓＪ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．ｏｍｍｕｎ．２００４６１：１０１．，，６ｐ［］（）［１４］ＭａｒｒａｚｚａＱＣｈｉａｎｅｌｌａＩ，ＭａｓｃｉｎｉＭ．ＤｉｓｐｏｓａｂｌｅＤＮＡｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｂｆｏｓｅｎｓｏｒｓ－ｆｏｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｍｏｎｉｔｏｒｉｎＡｌＣｈｉｍＡｃｔａ１９９９３８７２９７３０７．ｎａ．．：．ｇ陰，，口）１５ＣａｒｂＭＤＭａｒｃｅｌｌｏＤＰｅｒｕｎｉＭｅｔａＬＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｃａｌＤＮＡｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒ，Ｍ，ｇｉ，ｉｂｉ［］ｏｔｔＪ－ｌｃｃｌｉｃａｒｏｍａｔｉｃｈｄｒｏｃａｒｂｏｎｄｅｅｃｉｏｎ，Ｍｉｃｒｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ２００８３４：ｐｙｙｙ［］，６３，１（）－１６３１６９．［１６］Ｗｏ打ｇＥＬＳ，ＭｅａｒｎｓＦＪ，ＧｏｏｄｉｎｇＪＪ．Ｆｕｒｔｈｅｒｄｅｖｅｔｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｂ－ＤＮＡｈｒｉｌｙｉｄｉｚａｔｏｎｂｉｏｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄｏｎｏｎｇｒａｎｇｅｅｌｅｃｔｒｏｎｔｒａｎｓｆｅｒＪ，Ｓｅｎｓ．［］－ＡｔｔＢ２００５１１－ｃｕａｏｒ．ｒＣｈｅｍ．１１１２：５１５５２１．，，１７ＬｕｃａｒｅｌｌｉＦＫｉｃｅｌａＡＰａｌｃｈｅｔｉＩｅｔａｌ．Ｅｌｅｃ化）ｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒ仿ｒａｎａｌｓｉｓ［］，，，ｙ－ｏｆｗａｓｔｅｗａｔｅｒｓａｎｌｅｓＪ．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍ２００２５８：１１３１１８．ｐ［］，，ｙ）［ｌ＾ＣｈｉｔｉＱＭａｒｒａｚｚａＱＭａｓｃｉｎｉＭ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒｅｎｖｒｏｎｍｅｎｔａｔｒｎ－ｍｏｎＡｎａｉｍＡｃｔａ２００１４２７２５５ｉｌｉｏｉｇＪ．ｌ．Ｃｈ．，；１１６４．［］，（）Ａ－１ａｎＪ民ｉｖａｓＱＬｕｏＤｅｔａｌＤＮｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｆｏｒｔｈｅｄｅ化ｃｔｉｏｎｏｆ［可，，Ｗｇ－ａｒｏｍａｔｉｃａｍｉｎｅｓＪｌｈｅｍ６６８２４．Ａｎａ．Ｃ．１９９：４３６５４３６９．，，（）［］２０ＺｈｅｎＹＹａｎＣＰｕＷ－．ＣａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｂａｓｅｄＤＮＡｂｉｏｓｅｎ仿ｔｉｇ，ｇ，ｓｏｒｒｍｏｎｉｏｒｎ［］ｇ－－ｉｍ２００９１６１１ｐｈｅｎｏｌｉｃｏｌｌ山ａｎｔｓ陰．Ｍｉｃｒｏｃｈ．Ａｃｔａ６：２２６．ｐ，，（巧［２１ｉｕＹ，ＦａｎＨ，ＬｉｕＸ，ｅｔａＬＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｄａｍａｇｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙ］Ｑｎｓ－ｉｔｕｅｎｅｒａｓＡｒａｓｔｈｒｏｕｈｅｌｅｃｔｒｏｔＪｉｇ化ｄｂｉｐｈｅｎｏｌｄｉｃａｌｇｏｘｉｄａｉｏｎ．Ｍｉｃｒｏｃｈｉｍ．［］Ａｃｔａ２０１０７１－４－１３：％３％９．，，（）２２ＰａｎｃｋＰＣｌｌＨＨｔｙＷｅｅｔａ．巨ｖａｎｅｓｃｅｎｆｌｕｏｒｏｂｉｏｓｅｎｓｏｒ位ｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ［］，ｐｏｌｙａｒｏｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｂａｓｅｄｏｎＤＮＡｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｐｐＬＢｉｏｃｈｅｍ．４８ 載醫(yī)科大學(xué)社研巧生學(xué)位論文Ｂｂ－ｔｅｃｈｎｏＬ１９９５５５２：８７９４．，，（）２３Ｄｏ－Ｔｏ－ｎａｌＢＵｓｌｕＢ０濁ａｎＳＡＶｏＩｔａｍｍｅｔｒｉｃｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＨＩＶ１ｉｎｈｉｂｉｔｒ：．ｏ［］ｇａｐ，，ｙｄｒｕｆｅｖｒｅｎｚ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｄｓＤＮＡａｎｄｄｒｕｕｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｇＥｉＴｈｅｇｇＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒａｎｄａｄｓｏｒｐｔｉｖｅｓｔｒ料ｐｉｎｇＶＯｆｔａｍｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏ打ｏ打ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅｅｎｃｔｒＪＢＢｔｒ２００９２４８２－ｉｌｒａｈｉｔｅｅｌｅｃｏｄｅ．ｉｏｓｅｎｓ．ｉｏｅｌｅｃｏｎ．：３５８２３６４．ｐｇｐ［］，，（）［２４］ＲａｕｆＳ，ＮａｗａｚＨ，ＡｋｈｔａｒＫ，ｅｔａｌ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｓｉｌｄｅｎａｆｉｌｃｉｔｒａｔｅ（Ｖｉａｇｒａ）ｉｎｔｅｒａｃ１：ｉｏｎｗｉｌｂｉｉｉｉｔｈＤＮＡｕｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｃａＤＮＡｏｓｅｎｓｏｒＪ．Ｂｏｓｅｎｓ．Ｂｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２００７ｇ［］，，２２１１７１－２４７７：２４．（）２５ＲａｕｆＳＧｏｏｄｉｎＪＪＡｋｈｔａｒＫ巧ａｌＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌａｒｏａｃｈｏｆａｎｔｉｃａｎｃｅｒ［］，ｇ，，ｐｐｒｕｓ－ＤＮＡ－ｄｇｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＪ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ，２００５，３７２：２０５２１７．［］（）［２６］Ｗａ打ｇＪ，Ｏｚｓｏ之Ｍ，ＣａｉＸ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｏｆａｎｔ化ｕｍｏｒｄｒｕｇｄａｕｎｏｍｙｃｉｎｗｉｔｈＤＮＡｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄａｔｔｈｅｓｕｒ拉ｃｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｔｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇ．，１９９８，４５（Ｕ：３３－４０．２７ＮａｗａｚＨＲａｕｆＳ，ＡｋｈｔａｒＫ，ｅｔａＬ巨ｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒ仿ｒｔｈｅｓｔｕｄｏｆ［］，ｙ－－ｃｒｏｆｌｏｘａｃｉｎＤＮＡｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＪ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００６３５４１：２８３４．ｐ［］，，（）＇＊－ＩＣＫＭＫＤＮＡｉｒｏｕｓｉＳＴＧｈｅｉｈｉａｒａｖａ．ｍｏｄｉｆｉｅｄｃａｒｂｏｎａｓｔｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅＰＷＧ，ｇ，ｐａｅｔｏｔｓｔｕｏｆｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｅｔｗｅｃ打艮ｉｆｅｍｉｃｉｎＲＩＦ泣ｎｄＤｉ打ｓｏｌｕｔｉｏｎｐｐｌｉｄｈｅｄｙｂｐ）ＮＡ（ｔ－ａｎｄａｔｈｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｕｒｆａｃｅＪａｉｍＢｏｍｅｄＡｎ２００４４５１８５８．Ｐｈｉ．ａＬ；３６：８．［叮，，（）２ＰｅｄａｎｏＭＬ民ｉｖａｓＧＡ．Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａ化ｎｏｆＤＮＡｏｎ虹ｓｓｃａｒｂｏｎｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｆｏｒ，ｇｙ［刊－ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆａｆｆｉｎｉｔｙｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ？Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．２００３，１８３：ｐ口］，口）２６９－２７７．［３０］ＧｏｙａｌＲＮ，ＢｉｓｈｎｏｉＳ．Ｓｕｒｆａｃｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌｙｓｉｓ：Ｐａｓｔ，ｐｒｅｓｅｎｔａｎｄＪ－－ｆｕｔｕｒｅ．Ｉｎｄｉａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｎｘ２０１２５１Ａ２：２０５２２５．［］，，＾）３ＧａｓａｒａｃＴａｆｔＢＪＬａ－ＤＭｔＵｔｔｒｔｔ氏ｉｅｒｒｅｅｖｌｉｎＡｅａｌ．ｌｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｅｌｅｃｏｃａａｌｉｃ［Ｕｐ，ｐ，ｙＤＮＡ－ｔ－ｔｒＪＪＡＣｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｔｔｗｏａｎｄｈｒｅｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｎａｎｏｅｌｅｃｏｄｅｓ，．ｍ．ｈｅｔｎ．Ｓｏｃ，［］，２００４７０－１２２７１１２６３９：１２２．，（）３２ＬｉＦＨａｎＸＬｉｕＳ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｗｂｈａｈｉｇｈ［］，，ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｏｆ￡ＭｂｙｄｅｎｄｒｉｔｉｃｏｌｄｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｍｃｘＵｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅＪ．Ｂｉｏｓｅｎｓ．ｙｇ［］Ｂｂｅ２６２６１９－ｌｅｃｔｒｏｎ２０１１５：２６２５．，，（）４９ 賊醫(yī)稱大學(xué)賦研猶學(xué)位論文３ＣｈａｎｇＨＹｕａｎＹ，ＳｈｉＮ，ｅｔａｌ？巨ｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄｏｎ［引，ｃｏｎｄｕｃｔｎｏａｎｎｅｎａｎｏ－ｉｌｉｌｉｔｕｂｅａｒｒａＪＡｎａｌＣｅｍ２００７７９１：５１１５１１５ｇｐｙｙ．．ｈ．３１．，，［］（）［３４］ＨｕＫ，ＬａｎＤ，ＬｉＸ，幻ａｌ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｂａｓｅｄｏ打ｎａｎｏｐｏｒｏｕｓｏ－ｕｂｒｇｌｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｎｄｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｎｃｏｄｅｄＤＮＡＡｉｏｂａｃｏｄｅｓＪ．Ａｎａｌ．［］ｅｍ８０２３－Ｃｈ２００８：９１２４９１３０．，，（）［３５］ＬｉｕＳ，ＬｉＹ，ＬｉＪ，ｅｔａｌ．ＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆＤＮＡｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｏｎｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｍｏｃＨｆｉｅｄｂｎａｎｏｏｌｄａｒｅａｔｅｓＪＢｉｏｓｅｎｓＢｉｏｅｔｅｔｒ．．ｃｏｎ．２００５ｇｙｇｇｇｇ［］，，－２１５：７８９７９５．（）３６ＺｈａｎｇＺＦａ打ＨＺｈａｏＫｅｔａｌ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓｂａｓｅｄｏｎ［］，，，ｐａｌｌａｄｉｕｍ打ａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌｙｓｉｓ，２００８，－２０２：１３１１３６（）．［３７］ＷｕＳ，ＧｕＸＱ，ＬｉＪＭ，ｅｔａｌ．Ａｒｅａｇｅｎｔｌｅｓｓａｎ５）ｅｒｏｍｅｔｒｉｃｉｍｍｕ打ｏｓｅ打ｓｏｒｂａｓｅｄｏｎ＊ｎａｎｏ－ａｕａｎｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ仿ｒｄｅｔｅｃｔｂａｏｆａｈａｆｅｔｏｒｏｔｅｎＪＡｆｉＪｂｐｉ．．．［］－ＢｉｏｔｅｃｈｎｏＬ２０１１１０４０８９６１．：７７９０，，（）３ＢｏｌｌｏＳＦｅｒｒｅｒａ艮ｉｖａｓＧＡ．Ｅｌｅｃｔ陽ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆＤＮＡａｔｌａｓｓｃａｒｂｏｎ，ｙＮＦ［巧，ｇｙｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｍｏｄｉ巧ｅｄｗｋｈｍｕｌｔｉｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｄｉｓｐｅｒｓｅｄｉｎｃｈｉｔｏｓａｎＪ．［］Ｅ－－ｌｅｃｔｒｏａｎａｌｓｉｓ２００７１９７８８３３８４０：．ｙ，（），３９ＨｅＤａ－ｉＬ．ＡｌｉｎｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅＤＮＡｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｅｎｓｏｒｓＪ．Ｃｈｅｍ．［］ｇ［］Ｃｏｍｍｕｎ２００４３－：３４８３４９．．，，［４０］ＭｏｓｅｒＩ，ＳｃｈａＵｃｈａｍｍｅｒＴ，ＰｉｔｔｎｅｒＦ，ｅｔａｌ．Ｓｕｒｆｅｃｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ仿ｒａｎＢ－ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒＪ．ｉｏｓｅｎｓ？艮ｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．１９９７１２：．［］，７２９７３７，巧）－４ＣａｉＨｕＣｅＰｅｔａｌ．ＣｏＵｏｉｄＡｕｅｎｈａｎｃｅｄＤＮＡｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ仿ｒｔｈｅ，Ｘ，Ｈ，［Ｕｅ－ｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｂ打ｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡＪ．Ｊ．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌ．Ｃｔｅｍ［］，２００１５１０－８５：７８．，４２ＬｉｕＳＬｉｕＪ，ＨａｎＸ，ｅｔａｌ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｅｂｒｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈｈｏｌｌｏｗ［］，ｇｏｌｄｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｎｄｉｔｓｅ打ｈａｎｃｅｍｅｎｔｉｎＤＮＡｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｔｏｎＪＢｏｓｅｎｓＢｏｅｅｃｔｒｏｎ２０１０２５７－ａｎｄｈｂｒ：１６４０１６４５ｉｄｉｚａｉ［］，ｉ．ｉｌ．ｙ，，（）４？ＳａｎＳｅＰＪｔＤＮＡ－；ＷａｎＧＷｌｌｉｎｅａｌ．ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓｂａｓｅｄｏｎｓｅｌｆａｓｓｅｍｂｌｅｄ［］ｇｇ氏，ｃａｒｂｏｎ－ｎａｎｏｔｕｂｅｓＪ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｈｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００４３２５４：１４４．［］ｐｙ，，３３１３７（）５０ 輸醫(yī)科大學(xué)碩壬研勝學(xué)位論文［４４］ＺｈｕＮ，ＺｈａｎｇＡ，ＷａｎｇＱ，ｅｔａｌ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｕｓ－ｉｎｇｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｕｅａｎｄｅｔｅｃｔｒｏｄｅｏｓｋｅｄｚｉｒｃｏｎｉａｔｈｉｎｆｉｌｍｓ０打ｇｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｐ－ＪＡｎａＬＣｈｉｍ．Ａｃｔａ２００４５１０２：１６３１６８，．［］，，（）４５ＬｉＪＬｉｕＬｉｕＹＪｅｔａｌＤＮＡｂｉｂｉｒ］．ｏｓｅ打ｓｏｒａｓｅｄｏｎｃｈｔｏｓａｎ打Ｉｍｄｏｅｄｗｉｔｈｃａｂｏｎ［，Ｑ，，ｐｎａｎｏ－ｔｕｂｅｓＪ，ＡｎａＬＢｉｏｃｈｅｍ．２００５１：１０１４．［，，３４６７１］（）Ｌ－－－４６ｉｕＹＷｅｉＷ．ＬａｅｒｂｙｌａｅｒａｓｓｅｍｂｌｅｄＤＮＡｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄｓｉｎｌｅｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎ［］，ｙｙｇｎａｎｏｔｕｂｅｈｙｂｒｉｄｓｆｏｒａｒｓｅｎｉｃ（ＩＩＩ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎＪ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００８［］，１０６７２－：８８７５．（）［４７］ＺＭｎｇＹＺ，ＷａｎｇＪ，ＸｕＭＬ．ＡｓｅｎｓｉｔｉｖｅＤＮＡｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｅｂｒｉｃａｔｅｄｗｉｔｈｇｏｌｄｎａｎｏａｒ－ｔｃｓ／ｏａｎｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃａｃａ打ｏｔｕｂｅＪｐｉｔｅｐｌｙｐｉｉｄ／ｃｒｂｏｎｎａｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅ．（）［］Ｃｏ－ｌｌｏｉｄｓＳｕｒ￡Ｒ２０１０７５１：１１８．，，（）７９５４８ＪＨｏｃｅｖａｒＳＢＯｏ防ｖｃＢｔ－Ｗａｎ．Ｃａｒｂｏ打打ａｎｏｕｂｅｍｏｄｉｆｉｅｄａｓｓｃａｒｂｏｎ［］，，ｌｇｇｇｙｅｌｅｃｔｒｏｄｅｆｏｒａｄｓｏｒｔｉｖｅ巧ｒｉｉｎＶＯｋａｍｍｅｔｒｉｃｄｅｌｅｔｉｏｎｏｆｕｔｒａｔｒａｃｅｖｅｓｏｆ２４ｐｐｐｇｌｌｅｌ，，－－６ｔｒｉｉｔｒｏｔｏｌｕｅｎｅＪ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００４６２１７６１ｎ］：７乂［，，（）５１ 醫(yī)獻(xiàn)學(xué)頂：ｂ研她學(xué)位論文致謝時(shí)光如白狗過隙，我的碩±研究生生涯即將步入尾聲。謹(jǐn)向所有關(guān)也和幫助過我的人表示最真擎的謝意！衷也感謝我的導(dǎo)師下世家教授。Ｈ年來，下老師在我的課題選題、完成到論、血文寫作中傾注了大量的屯。我獲得的點(diǎn)滴成果都離不開下老師的幫助和支持。Ｔ老師思想眷智、治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)、學(xué)識(shí)淵博，不僅在學(xué)術(shù)上常給予我指導(dǎo)，在生活上也時(shí)常給予我無微不至的關(guān)懷。下老師教會(huì)了我很多為人處事的道理，是我人生的榜樣?。崳?。在此再次向恩師致Ｗ誠挈的謝意和崇高的敬意深深感謝顏玉蓉老師對(duì)我的關(guān)也和幫助。顏老師時(shí)常在學(xué)業(yè)上給予我指導(dǎo)，在生活中更是對(duì)我多加關(guān)懷和幫助。再次向顏老師表達(dá)我誠擎的謝意！特別感謝程偉師兄對(duì)本諫題的幫助和指導(dǎo)！程偉師兄為我解答了很多實(shí)驗(yàn)上的疑惑，使我的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌瓿?。感謝師姐趙丹、李她慧、窗曉娟、李丹丹和師兄張偉、許永杰對(duì)我的關(guān)懷與＝幫助。特別感謝這年來與我互勉互勵(lì)，幫助與支持我的同口申波、雷品華和董芳、。感謝師弟張嘩李勝強(qiáng)和師妹了小娟對(duì)我的大力幫助。感謝重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院對(duì)我多年的培養(yǎng)！感謝檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院的所有老師和同學(xué)！感謝國家自然科學(xué)基金（２１０７５１４１和８１３７１９０４）對(duì)本課題的支持。感謝我的家人給予我的巨大支持和理解。正是因?yàn)橛屑胰说膼?，我才有了今天的成績。感謝所有未提及的曾經(jīng)關(guān)也我，，同學(xué)和朋友們支持我的老師。５２ 獻(xiàn)醫(yī)科大學(xué)碩主研巧生學(xué)位論文巧讀碩±期間撰寫的文章目錄１ＤａｎＺｈｕＹｕｒｏｎｅｏＳｈｅｎＷｅ．Ｙａ化ＰｉｎｈｕａＬｉｉＣｈｅｎｕａ打ｘｉａｎＪａＳｈｉｉａ，ｇＢ＾換Ｈ＾ｇｊＤ＊ｉｎｇ．Ａｎｏｖｅｌｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｅｎｓｉｎｇｓｔｒａ把ｆｂｒｒａｉｄａｎｄｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｇｙｐ斯－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔＤＮＡ．／／ｗｏｗｅ／／ｏｂｙｒｏｌｌｉｎｇｃｉｒｃｌｅａｍｌｉｆｉｃａｉｏｎａｎｄＡｕＮＰｓｒｏｂｅｐｐ…Ａｎａ－ｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ２０１４；４４５０．ＩＦ：４．５１７，８４６，（）Ｗ＊２．ＷｅｉＣｈｅｎｇ，ｅｉＺｈａｎｇ，ＹｕｒｏｎｇＹａｎ，ＢｏＳｈｅｎ，ＤａｎＺｈｕ，ＰｉｎｈｕａＬｅｉ，ＳｈｉｊｉａＤｉｎｇ．Ａｎｏｖｅｌｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｂｉｏｓｅｎｓｏｒ拉ｒｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｅｃｉｆｉｃｄｅ化ｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｐｂａｓｅｄｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎｍｅｄｉａ化ｄｃｉｒｃｕｌａｒｓｔｒａｎｄｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔａｎｄｒｏｌｌｉｎｇｃｉｒｃｌｅａｍｃａｔｏｎＪＢｏｓｅｎＢｏｅｅｃｔｒｏｎ２０１４－：ＩＦ４５１ｐｌｉｆｉｉ．ｉｓ．ｉｌ．６２２７４２７９．：６．）［］，，（＊３．簡曉娟，黃平，陳進(jìn)，趙丹，朱丹，Ｔ世家．反相高效液相色譜法同時(shí)測定肝－Ｊ２０－癌相關(guān)酪氨酸．重１４３９１：１７１８１７２２．繳氨酸對(duì)映體［］慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，，（巧４．Ｇｈｅｎｙａｎｇ了ａｏ，Ｙｕｒｏ打ｇＹａｎｉｊＨｍｙｉａｎｇ，ＤａｎＺｈｕ，ＷｅｉＧｈｅ打ｇ，Ｈｕａ打ｇｘｉａｎＪｕ＾Ｓｈ＾ｉａ＊Ｄｉｎｇ．ＡｎｅｗｍｏｄｅｆｏｒｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｂａｓｅｄｏｎ－ｔｅｘｏｎｕｃｌｉｆｉｔｌｅａｓｅＩＨａｓｓｉｓｅｄｔａｒｅｔｒｅｃｃｌｉｎａｍｃａｉｏｎａｎｄｍｉｓｍａ化ｈｅｄｃａｔａｔｉｃｇｙｇｐｌｙｈａ－ｉｒｉｎａｓｓｅｍｂｌＪ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１５５１：４２２０４２２２．ＩＦ：６．７１８ｐｙ，［］，（）５．ＰｉｎｈｕａＬｅｉ，ＨｕａＴａｎｇ，ＳｈｉｊｉａＤｉｎｇ，ＸｉａｏｊｕａｎＤｉｎｇ，ＤａｎＺｈｕ，ＢｏＳｈｅｎ，Ｑｕａｎ＊ＣｈｅｎＹｕｒｏｎＹａｎ．ＤｅｔｅｒｍｎａｔｏｎｏｆｔｈｅｉｎｖＡｅｎｅｏｆａｍｏｎｅａｕｓｎｓｕｒｃｅｇ，ｇｉｉＳｌｌｌｉｇｆｅｇｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅａｗｔｓｔｒｅｔａｖｎａｔａｍｅｒａｍｃａｔＭｐｔｏｎｇｉｈｐｉｄｉｐｐｌｉｆｉｉｏｎＪ．ｉｃｒｏｃｈｉｍ，［］Ａｃｔａ２０１５１８２１－２－：２８９２９６ＩＦ：３７１９：．．，（），（）５３
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