擬南芥體細(xì)胞胚胎發(fā)生的機(jī)理研究

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1、中英文縮略表英文縮寫英文全稱中文解釋LBmiRNAM．MLV．RTNPAODPCRpHRifRNARNaseART．PCRSAMSDSSSCssDNASTETE啊sLuria-BertanimediumLB培養(yǎng)基microRNAMoloneymurineleukemiavirusreversetranscriptase‘N-1-naphthyphthalamicacidopticaldensityPolymerasechainreactionPondushydrogeniiRifampicin。IUbonucleicacidR

2、ibonucleaseAReversetranscriptionPCRShootapicalmeristem小分子RNA鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶N-1．萘基鄰氨甲酰苯甲酸光密度聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)氫氧離子濃度指數(shù)利福平核糖核酸核耱核酸酶A反轉(zhuǎn)錄PCR莖端分生組織十二烷基硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)檸檬酸鹽溶液鮭精DNASodiumchloride，Tris·CI，氯化鈉、Tris·CI、EDTAEDTAbufferTris·C1，EDTAbuffer．Tris．(31·EDTA緩_沖液Trishydroxymethylaminomethane三羥甲基氨基

3、甲烷Tween-20Polyoxyethene·-20··sorbitumX-galYEP5-BromoM-chloro一3-indoxyl-D—galactopyranosideYeastextractandpeptonemedium聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯5一溴．4．氯-3，吲哚一p-D一半乳糖苷YEP培養(yǎng)基關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全

4、了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：蘊肆導(dǎo)師簽名．．燃19期：剮．／‘山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文擬南芥體細(xì)胞胚胎發(fā)生的機(jī)理研究專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：張憲省教授博士研究生：蘇英華摘要植物的各種器官、組織以及懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞和原生質(zhì)體均可誘導(dǎo)形成類似合子胚的結(jié)構(gòu)

5、，但它們與合子胚起源不同，稱為胚狀體(Embryoid)。由體細(xì)胞發(fā)生的胚狀體稱為體細(xì)胞胚(SomaticEmbryo，SE)。體細(xì)胞胚胎發(fā)生是植物發(fā)育過程中的特殊現(xiàn)象，并在一定程度上重現(xiàn)了合子胚形態(tài)發(fā)生的特性，是植物細(xì)胞潛能完全表達(dá)的一種方式。因此，研究體細(xì)胞胚胎發(fā)生與發(fā)育的機(jī)理對于揭示細(xì)胞全能性與研究合子胚的分化和發(fā)育具有重要意義。本論文著重研究了擬南芥體細(xì)胞胚胎發(fā)生和發(fā)育的分子基礎(chǔ)，研究結(jié)果為理解體細(xì)胞胚胎發(fā)生的分子機(jī)理提供了重要信息。主要研究結(jié)果如下：1．體細(xì)胞胚胎發(fā)生體細(xì)胞胚的產(chǎn)生首先需要胚性愈傷組織的形成，這個過程

6、是在外源生長素的作用下完成的。除去外源生長素，在愈傷組織表面誘導(dǎo)形成突起狀的體細(xì)胞原胚，然后體細(xì)胞原胚兩側(cè)產(chǎn)生子葉原基，最終形成具有兩片子葉、胚軸和胚根的成熟體細(xì)胞胚。2．胚特征基因的表達(dá)通過胚特征基因LECl，LEC2，F(xiàn)US3，PEll和ABl3的表達(dá)模式分析，發(fā)現(xiàn)它們的表達(dá)去除激素的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)階段表達(dá)明顯上調(diào)。利用G礬；報告基因Xe丁LEC2基因的表達(dá)進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示它在體細(xì)胞原胚形成的早期開始表達(dá)，以后集中在子葉原基和子葉中表達(dá)。說明在體細(xì)胞胚再生過程中，胚特征基因的表達(dá)受到調(diào)節(jié)。3．reus和CLV3基因的表達(dá)

7、為了研究體細(xì)胞胚胎發(fā)生和發(fā)育過程中干細(xì)胞的起始，我們對刪口CZ乃的表達(dá)模式進(jìn)行了分析。研究結(jié)果顯示，體細(xì)胞胚發(fā)生早期，在胚性愈傷組織表面4--一6層細(xì)胞(組織中心)中首先檢測到彤U法因的表達(dá)。然后在新形成的體細(xì)胞原胚表面1"--3層細(xì)胞中出現(xiàn)干細(xì)胞特征基因CLV3的表達(dá)，并在此位置形成體細(xì)胞原胚的突起狀結(jié)構(gòu)。體細(xì)胞擬南芥體細(xì)胞胚胎發(fā)生的機(jī)理研究胚發(fā)育過程中，兩基因的表達(dá)均逐漸集中在子葉之間的苗端分生組織中。誘導(dǎo)反義WUS基因表達(dá)，體細(xì)胞胚的產(chǎn)生受到抑制，胚發(fā)育基因的表達(dá)也受到影響。表明在體細(xì)胞胚發(fā)生過程中，組織中心的細(xì)胞先于干

8、細(xì)胞形成，朋，贓此過程中起關(guān)鍵作用。4．生長素極性運輸及分布體細(xì)胞胚胎發(fā)生需要生長素誘導(dǎo)。生長素在體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程中呈極性分布。如果在誘導(dǎo)過程中添加生長素極性運輸抑制劑NPA，不僅破壞了生長素的極性分布，還影響了WUS的表達(dá)，最終不能產(chǎn)生體細(xì)胞胚。生長素外運蛋白PINl在體