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《喜樹內(nèi)生真菌及其次級代謝產(chǎn)物的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在在論文中作了明確的說明。作者簽名：關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。中
2、南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要喜樹堿作為特異性DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，是一種具有良好抗癌效果的有效成分。但是由于其在喜樹植物中含量極低，提取困難，而且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，難以通過化學(xué)合成的方法得到。因此，植物內(nèi)生真菌作為喜樹堿新型的藥用資源已引起了廣泛的關(guān)注。本文從喜樹樹皮中共分離得到約50株內(nèi)生真菌。以喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品為對照，利用薄層色譜、紫外分光光度法以及高效液相色譜法，篩選出一株產(chǎn)喜樹堿的內(nèi)生菌株EFCI．13。通過形態(tài)學(xué)鑒定，將其歸為青霉屬。為了提高喜樹堿的產(chǎn)量，對菌株EFCI．13的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。通過單因素實(shí)驗(yàn)選定的最佳碳源為葡萄糖，氮源為酵母膏和硫酸銨。Plack
3、ett-Burman實(shí)驗(yàn)表明影響喜樹堿的主要因素為葡萄糖，磷酸二氫鉀和L．色氨酸。最陡爬坡實(shí)驗(yàn)確定了這些主要因素的零點(diǎn)值。通過Box-Behnken實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面分析，得到最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖10．489／L，磷酸二氫鉀2．919／L，L．色氨酸O．14Sg／L，酵母膏159／L，硫酸鎂0．5g／L，硫酸銨0．8g／L，氯化鈣0．1g／L，在此條件下喜樹堿的最大產(chǎn)量為80．41耀皿。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在該培養(yǎng)基條件下，喜樹堿產(chǎn)量達(dá)80．39耀．幾，比優(yōu)化培養(yǎng)基前的產(chǎn)量提高了43．9％。隨機(jī)選擇了36對PCR-SRAP引物對喜樹內(nèi)生真菌進(jìn)行研究，篩選出了6對穩(wěn)定性好，
4、擴(kuò)增條帶多的引物組合。這6對引物組合共擴(kuò)增出425條條帶，其中365條為多態(tài)性條帶，多態(tài)性條帶的比例為85．9％。在相似系數(shù)為0．54時，菌株可分為三大類。說明了SRAP方法可用于喜樹內(nèi)生真菌的多態(tài)性分析。關(guān)鍵詞喜樹堿內(nèi)生真菌響應(yīng)面法培養(yǎng)基SRAP中南大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTCamptothecin(CPT)，specificallyinhibitsDNAtopoisomeraseI，isapotentantineoplasticagent．However,it’SdifficulttoobtainCPTtomeetthelargeneedbyextra
5、ctionaswell裙chemicalsynthesisduetothelOWcontentinplantsandcomplexstructure．Thus，endophyticfungihavebecomeimportantsourcesforCPTproduction．About50endophyticfungiwereisolatedfrombarksofCacurninata．ThemetaboliteswerescreenedbyTLC，UVandHPLC，EFCI．13wasconsideredtoproduceCPT．ThefungusWasid
6、entifiedasaPenicilliumbasedonit’smorphologicalfeatures．Statisticalexperimentaldesignswereusedtooptimizethefermentationmediumformaximumcamptothecin(CPT)production．Glucose．yeastextractandsulfateammoniumwereselected嬲thesuitablecarbonsourcesandnitrogensourcesviaone．factor-at-a-timedesign
7、．111emostimportantfactorsinfluencingCPTproduction,asidentifiedbyPlackett-Burmandesign(PBD)，wereglucose，KH2P04andL．Trp．SteepestascentmethodWasusedtodeterminethecenterpointofthesesignificantvariables．Box-Behnkendesign(BBD)andresponsesurfaceanalysispredictedamaximumCPTyieldof80．41嵋／Latg
8、lucose10．489
