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《三株植物內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、上海交通大學博士學位論文三株植物內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物的研究姓名：胡德軍申請學位級別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學工程指導(dǎo)教師：趙鳳生20081101HCCBl778．3為4’，5，7．三羥基異黃酮，分子量270，對A549、LoVo細胞均具有很強的抑制作用，其中HCCBl778．3對LoVo細胞的抑制率最高，可達78．95％，目前HCCBl778．3已經(jīng)開發(fā)為藥物；HCCBl778．4為鏈格孢毒素(Altertoxin．I)，分子量為352，具有較強的誘變作用和一定的抑制血小板聚集的作用；HCCBl778．5(新化合物)化學命名為1，4，9，
2、12．四羥基．1，2，12，12a．四氫茈．3，IO(1lH，12bH)．二酮，為HCCB01778．4同系物，分子量352，是首次分離得到的新化合物，具有一定的抗腫瘤活性。對菌株HCCB2310次級代謝產(chǎn)物的分離研究得到兩個化合物，分別為3，22，24．三羥基．齊果墩烷．12．烯和琥珀酸。為了快速分離得到菌株HCCBl614活性成分，本研究利用傳統(tǒng)方法和高速逆流色譜法結(jié)合對其活性代謝產(chǎn)物進行了分離。選取兩相溶劑系統(tǒng)為正己烷．乙酸乙酯．甲醇．水(1：3：3：3)，體系上相為固定相，下相為流動相。成功地從內(nèi)生真菌HCCBl614的次級
3、代謝物中快速分離得到一細胞毒活性組分。經(jīng)高效液相色譜分析，其純度為99％以上。其化學結(jié)構(gòu)由1H-NMR和13C．NMR鑒定確認為CytochalasinN。從菌株HCCB1778次級代謝產(chǎn)物中分離得到的AltertoxinI(ATXI)是一種鏈格孢霉菌產(chǎn)生的真菌毒素，一直被認為是一種重要的食品和糧食的污染物。最近研究表明AltertoxinI具有很好的抗凝血作用，能夠阻止血小板聚集，IC50為29I．tM，因此具備作為藥物開發(fā)的潛力。為了得到足夠量的AltertoxinI用于進一步的研究和開發(fā)，本研究首次建立了一種利用高速逆流色譜一
4、次性分離制備ATXI的方法。實驗利用溶劑體系正TT己烷．乙酸乙酯．甲醇．水(2：5：5：6)對發(fā)酵產(chǎn)物的萃取物進行分離，利用HPLC分析以及質(zhì)譜和核磁共振波譜對目標產(chǎn)物進行鑒定。結(jié)果表明該方法每次可以分離得到毫克級的目標產(chǎn)物。本研究從18L發(fā)酵產(chǎn)物中共分離得到45mgAXTI，純度可以達到95％以上。因此該方法將為以后AXTI的快速分離制備提供有效的幫助。關(guān)鍵詞：植物內(nèi)生菌，篩選，分離，純化，次級代謝產(chǎn)物，高速逆流色譜，抗腫瘤活性IIISTUDYoNTHEMETABoLITESPRoDUCEDBYTHREEBIOACTIVEENDo
5、PHYTICFUNGIABSTRACTEndophyteisaspecialandimportantgroupofmicroorganismswithtaxonomicdiversity,whichcanproducevariousbioactivesubstances，includinginsecticidal，antimicrobialandantitumorcompoundsetc．Inthisresearchwork，alargeamountofendophyteshadbeenscreenedbasedonseveralm
6、odelsanddozensofstrainsshowedactivities．Threeofthemweretaxonomicallyidentifiedandtheirsecondarymetaboliteswerestudied．Thefermentationsampleswerepreparedfrom1280strainsofendophytes．Afterprimaryandsecondaryscreeningontwomodels，28samplesshowedhi曲andstableantitumoractiviti
7、eswhile8samplesshowedstrongantibioticactivities．Amongthem，thestrainsHCCB1614，HCCB1778andHCCB2310wereselectedforfurtherstudy．Accordingtotheirmorphology,culturalcharacteristics，18SrDNAandITSsequences，thestrainsHCCB1614，HCCB1778andHCCB2310wereindentifiedasPhomopsissp．，Alt
8、ernariasp．a(chǎn)ndAscospermumsp·，respectively．Fivecompoundsfromthemetabolites，namedasHCCB1778-1～5IVrespectively,werepurifi
