ebv相關胃癌組織中cthrc1基因甲基化及表達的研究

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1、青島大學碩士學位論文EBV相關胃癌組織中CTHRC1基因甲基化及表達的研究姓名：王新穎申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：羅兵20120602EBV相關胃癌組織中CTHRCI基因甲基化及表達的研究中文摘要EB病毒(Epstein．Ban"vires，EBV)屬皰疹病毒屬丫皰疹病毒亞科成員，與人類多種腫瘤的發(fā)生相關。DNA甲基化是目前最為前沿以及最受關注的表觀遺傳學機制，抑癌基因啟動子區(qū)高度甲基化被認為是導致其功能失活進而腫瘤發(fā)生的重要原因。CTHRCl基因在血管重塑過程中可抑制TGF信號通路，減少膠原沉積并促進細胞遷移，目前

2、已在人類多種實體腫瘤組織中檢測到CTHRCl基因的異常表達。目的檢測EBV陽性細胞系和EBV相關胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)組織中CTHRCl基因的甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達，并與EBV陰性細胞系和EBV陰性胃癌(EBV-negafivedgastriccarcinoma,EBVnGC)組織@CTHRCI基因的甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達情況進行比較分析，探討EBV感染對CTHRCl基因甲基化及其轉(zhuǎn)錄表達影響。方法選取EBV陽性和陰性胃癌細胞系以及EBVaGC和EBVnGC患者作為研究對象

3、，采用甲基化特異性PCR(Methylation．SpecificPC氏MSP)及亞硫酸氫鹽基因組測序法(Bisulfitegenomicsequencing，BGS)檢測細胞和組織中CTHRCl基因啟動子區(qū)域CpG島甲基化情況。同時采用實時熒光定量PCR(Real．timequantitativePCR,real—timeqPCR)檢測EBV陽性和陰性胃癌細胞系以及EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRCl基因的表達。結(jié)果①MsP檢測結(jié)果顯示，4種EBV陽性胃癌細胞系PT、GT38、GT39和SNU719，以及4種EBV陰性細胞

4、系SGC7901、HGC．27、BGC．823和MKN．45均表現(xiàn)為M+U型；EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRCl基因的甲基化率分別為95．4％和38．1％，統(tǒng)計學分析表明，EBVaGC組織中CTHRCl基因的甲基化率明顯高于EBVnGC(f=16．099，P

5、基因的甲基化程度無顯著性差異。③胃癌組織中CTHRCI基因甲基化率在患者不同性別、發(fā)病部位、病理分型以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間均無顯著性差異(P值均>0．05)，而在不同年齡組中CTHRCl基因甲基化率有顯著性差異(f=8．972，P=0．03)。④qPCR檢測結(jié)果顯示，EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRCl基因表達的ACt值分別為10．30士4．24和5．364-3．60，兩組數(shù)據(jù)經(jīng)2伽轉(zhuǎn)換后進行統(tǒng)計學分析，EBVnGC組織中CTHRCl基因的轉(zhuǎn)錄表達明顯高于EBVnGC，差異有顯著性忙．2．38，P---0．022)。⑤胃癌組織

6、中CTHRCl基因的表達在性別、年齡及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移中無顯著性差異(P值均>O．05)。{l㈣嬲結(jié)論@EBVaGC組織中CTHRCl基因的甲基化率明顯高于EBVnGC組織，表明EBV感染可能是導致CTHRCl基因調(diào)控區(qū)域甲基化的重要原因，可能為EBV參與EBVaGC發(fā)生的一種機制。②EBVaGC組織中CTHRCl基因的轉(zhuǎn)錄表達明顯低于EBVnGC組織中CTHRCl基因的轉(zhuǎn)錄表達，提示EBV感染可能通過誘導EBVaGC組織中CTHRCl基因的甲基化下調(diào)其轉(zhuǎn)錄表達，從而可能參與EBVaGC的發(fā)生。③EBVaGC組織中CTHRCl基因甲基

7、化率明顯高于EBVnGC組織，而EBVnGC組織中CTHRCl基因的轉(zhuǎn)錄表達水平明顯高于EBVaGC，推測CTHRCl基因介導的信號傳導通路可能在EBVaGC的發(fā)生發(fā)展中起負性調(diào)控作用，但具體調(diào)控機制有待進一步研究闡明。碩士研究生王新穎(病原生物學)指導導師羅兵教授關鍵詞：EB病毒；胃癌；甲基化；CTHRCl基因StudyofCTHRC1geneonmethylationandexpressioninEpstein-·BarrVirus·-associatedGastricCarcinomaAbstractEpstein．Barrv

8、irus(EBV)isagammaherpesvirusandassodateswithmultiplehumantumors．DNAmethylationisthemostcutting-edgeepigeneticmechanis