eb病毒相關(guān)胃癌組織中的tmem130基因甲基化狀態(tài)與表達(dá)的研究

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1、EB病毒相關(guān)胃癌組織中TMEMl30基因甲基化狀態(tài)與表達(dá)的研究中文摘要EB病毒(Epstein．Barrvirus，EBV)是公認(rèn)的DNA致瘤病毒，EBV感染誘導(dǎo)抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化被認(rèn)為是EBV相關(guān)腫瘤抑制基因功能失活的關(guān)鍵機(jī)制。EBV感染與胃癌的關(guān)系已經(jīng)得到確認(rèn)，但EBV相關(guān)胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma，EBVaGC)的發(fā)病機(jī)制有待于深入研究。目的探討EBV感染對(duì)TMEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響，為進(jìn)一步研究TMEMl30基因在EBV

2、aGC發(fā)生中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法采用甲基化特異性PCR(Methylation．SpecificPCR，MSP)及基于焦亞硫酸氫鹽修飾的基因組測(cè)序法(Bisulfitegenomicsequencing，BGS)檢測(cè)EBV陰性和陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系以及EBVaGC和EBVnGC(EBV-negativedgastriccarcinoma，EBVnGC)組織中TMEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)，并比較TMEMl30基因甲基化率與胃癌標(biāo)本臨床病理特征的關(guān)系。同時(shí)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real．tim

3、equantitativePCR)檢測(cè)EBVaGC和EBVnGC組織中TMEMl30基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。結(jié)果@MSP．結(jié)果顯示4種EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系PT,GT38，GT39和SNU719以及5種EBV陰性胃癌細(xì)胞系SGC7901，HGC-27，BGC-823，AGS和MKN-43中TMEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)均成M+U型。@EBVaGC病例癌組織和相應(yīng)癌旁組織中TMEMl30基因啟動(dòng)子的甲基化率分別為87．7％(43／49)幣122．6％(7／31)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，EBVaGC組織中TMEMl30基

4、因啟動(dòng)子的甲基化率明顯高于相應(yīng)癌旁組織()c：2：20．56，P

5、基化率明顯高于EBVnGC(x2=5．88，P=0．018)。@BGS結(jié)果顯示同一胃癌組織標(biāo)本中TMEMl30基因啟動(dòng)子的58個(gè)CpG位點(diǎn)呈現(xiàn)不同的甲基化狀態(tài)，不同組織標(biāo)本間甲基化程度存在一定的差異；其中17例EBVaGC組織中TMEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)有更多的CpG位點(diǎn)呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)，總體甲基化程度高于17例EBVnGC。(亙)TMEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)是否發(fā)生甲基化與患者性別、年齡、腫瘤直徑大小、腫瘤浸潤(rùn)深度、組織學(xué)分化程度以及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯關(guān)系，僅與是否存在EBV感染有關(guān)(聾值=14．2

6、78，P<0．005)。@TMEMl30基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平在兩組胃癌樣本間存在一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(仁．2．619，P=0．01)。經(jīng)2計(jì)算AACt=ACt陽(yáng)性組．ACt陰性組=2．14，提示EBVaGC與EBVnGC組織中TMEMl30基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的差異倍數(shù)為2以△C‘=0．227，說(shuō)明EBVaGC癌組織中TMEMl30基因mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平估值為EBVnGC的0．227倍，即EBVnGC癌組織中的表達(dá)水平是EBVaGC的4．41倍。@MSP結(jié)果顯示TMEMl30基因?yàn)榧谆癄顟B(tài)的EBVaGC組織中T

7、MEMl30基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平明顯低于非甲基化狀態(tài)的EBVaGC組織標(biāo)本(t：．3．03，P=0．011)，兩者的差異表達(dá)倍數(shù)約為O．122，即EBVaGC樣本中未甲基化標(biāo)本中TMEMl30基因的表達(dá)是高甲基化標(biāo)本的8．20倍。而在EBVnGC標(biāo)本中甲基化樣本與非甲基化樣本兩者之間的差異倍數(shù)為0．452，即未甲基化EBVnGC癌組織中TMEMl30基因的表達(dá)僅是高甲基化標(biāo)本的2．21倍(t．．2．01，P=0．027)。結(jié)論胃癌組織中存在TMEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)的異常甲基化，EBV感染可進(jìn)一步誘導(dǎo)T

8、MEMl30基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化，并通過(guò)高甲基化導(dǎo)致EBVaGC組織中下調(diào)TMEMl30基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，進(jìn)而在EBVaGC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用。碩士研究生：胡順霞(病原生物學(xué))指導(dǎo)導(dǎo)師：羅兵教授關(guān)鍵詞：EB病毒；EBV相關(guān)胃癌；EBV陰性胃癌；DNA甲基化；TMEMl30基因StudyofTMEMl30geneonmethylationstausandexpressioninEpstein-—BarrVirus-·associatedGastric