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《eb病毒相關胃癌組織中vegf表達的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、EB病毒相關胃癌組織中VEGF表達的研宄孫萍1(通訊作者)羅兵2周冬梅3(1煙臺毓璜頂醫(yī)院山東煙臺264000)(2青島大學醫(yī)學院微生物教研室山東青島266003)(3煙臺市煙臺山醫(yī)院山東煙臺264001)【摘要】目的:檢測EBV相關胃癌(EBVassociatedgastriccarcinomas,EBVaGC)和與之匹配的EBV陰性胃癌(EBVnetativegastriccarcinomas,EBVnGC)VEGF的表達，同時檢測EBV相關基因的表達，探討它們在EBVaGCs發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：選取13例EBVaGCs、4
2、5例與之相兀配的EBVnGCs和58例相應癌旁組織作為研宄對象，采用免疫組化技術檢測VEGF蛋白的表達；RT-PCR和Southern雜交技術檢測EBV相關基因(核抗原EBNA1和EBNA2編碼基因，潛伏膜蛋白LMP1編碼基因，早期基因BARF1和BHRF1)的表達。結果：①癌組織VEGF陽性率為72.41%(42/58),明顯低于相應癌旁組織87.93%(51/58)(P=0.022)；EBVaGC組織中VEGF陽性表達率為84.61%(11/13),明顯高于EBVnGC組織68.9%(31/45),兩組間差別有統(tǒng)計學意義(&ch
3、i;2=3.928,P=0.047｝②13例EBVaGCsEBNA1mRNA均為陽性，而EBNA2和LMP1mRNA均為陰性；早期基因中有6例BARF1表達陽性，2例BHRF1表達陽性。結論:①EBVaGC及EBVnGC中高表達VEGF，但是EBVaGC中VEGF的表達與血管牛.成和淋巴結轉移關系密切程度不如EBVnGC②EBVaGC組織中LMP1和EBNA2表達陰性，與c-myc的表達和細胞增殖無明顯相關性，早期基因BARF1和BHRF1可通過轉化細胞等作用促進腫瘤的發(fā)牛.發(fā)展?！娟P鍵詞】胃癌EB病毒VEGFRT-PCR【中圖分類
4、號】R730.2【文獻標識碼】A【文章編號】2095-1752(2012)20-0128-03EB病毒(Epstein-BarrVirus,EBV)是重要的致瘤病毒，以往的研宄多集中在EBV與Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和免疫缺陷病人的B淋巴細胞瘤等的關系，近年來研宄發(fā)現(xiàn)約7?16%的胃癌組織EBV陽性，EBV感染在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用也愈來愈受到重視。本研宄采用免疫組化方法檢測13例EBVaGCs、45例與之相匹配的EBVaGCs以及相應癌旁組織中VEGF的表達，RT-PCR檢測EBV相關胃癌組織中病毒潛伏期基因EBNA
5、1、EBNA2、LMP1以及早期基因BARF1和BHRF1的表達，以探討EBVaGC中EBV相關基因與PCNA和c-myc基因表達的關系及在胃癌發(fā)生發(fā)展的作用。1材料和方法1.1研究對象：隨機選取青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院、青島市立醫(yī)院及煙臺毓璜頂醫(yī)院2008年1月?2009年12月間185例胃癌患者手術切除的新鮮胃癌組織和相應癌旁組織（距離癌組織5cm以上）制備組織切片，經PCR-Southern和原位雜交檢測證實185例胃癌中奮13例EBVaGCs，同吋選擇年齡、性別、病理類型和臨床分期與之相匹配的45例EBVnGCs作為研究對象。
6、58例胃癌病人平均年齡58歲（31?81歲），其中男性48例，女性10例，全部病例均經病理診斷證實。1.2主要試劑和耗材：ReverseTranscriptionkit（美國Promega公司），TRIzol試劑（美國GIBCO公司），PCR反應體系（上海生工生物技術服務有限公司），HybOnd-N+尼龍膜（美國Amershampharmacia公司），DigOligonucleotide3’-EndLabilingkit、CSPD、DNAMolecularWeightMarkerVlII,Digoxigenin-Lab
7、eled（徳國Roche公司），VEGF兔抗人單克隆抗體、SP通用型染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。1.3EBV相關基因的RT-PCR及Southernblotting檢測TRIzol法提取組織總RNA,參照逆轉錄試劑盒要求的標準條件進行cDNA合成，反轉錄所得cDNA用作PCR反應的模板。EBV潛伏期基因和早期基因特異性引物和探針均參照文獻設計［1-3］，由北京賽百勝公司合成，引物和探針序列以及PCR產物長度見表1。應用Roche公司提供的DigOligonucleotide3’-endLabelingKi
8、t對寡核符酸探針進行標記,具體步驟按試劑盒要求的標準條件進行。PCR反應體積為30μl,反應體系為10×buffer3μl，MgCI21.5mmol/l，dNTPO.lmmol/L,上下游引物各0.5μm
