eb病毒相關(guān)胃癌組織中nf―κb和bcl―2蛋白表達(dá)探究

《eb病毒相關(guān)胃癌組織中nf―κb和bcl―2蛋白表達(dá)探究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、EB病毒相關(guān)胃癌組織中NF-kB和bcl—2蛋白表達(dá)探究【摘要】目的探討NF-kB及bcl-2蛋白在EB病毒相關(guān)性胃癌(EBVaGC)與非EB病毒相關(guān)性胃癌(EBVnGC)中的表達(dá)及意義。方法應(yīng)用原位雜交技術(shù)(ISH)檢測(cè)84例胃癌組織中EB病毒小RNA(EBER)表達(dá)情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法(S-P法)檢測(cè)84例胃癌組織中NF-kB及bcl-2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果(1)9例(10.7%)胃癌組織EBER原位雜交陽(yáng)性，屬于EBVaGC；75例(89.3%)胃癌組織EBER原位雜交陰性，屬于EBVnGCo(2)9例EBVaGC中7例(77

2、.8%)NF—kB表達(dá)陽(yáng)性,75例EBVnGC中28例(37.3%)NF-kB表達(dá)陽(yáng)性,NF-kB的表達(dá)在EBVaGC及EBVnG間存在差異(P0.05)。結(jié)論EBVaGC中NF-kB蛋白的高表達(dá)，提示EB病毒可能通過(guò)影響細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控而參與了EBVaGC發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程。【關(guān)鍵詞】EB病毒相關(guān)性胃癌；非EB病毒相關(guān)性胃癌;NF-kB；bcl-2【中圖分類號(hào)】R735.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1005-0019(2013)12-0015-01基金項(xiàng)目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(合同號(hào)：Z2011113)EB病毒(EBV)

3、屬于DNA皰疹病毒，該病毒編碼大于85個(gè)基因組，大部分人群都感染過(guò)EB病毒，而且EB病毒與很多淋巴源性及上皮源性腫瘤密切相關(guān)。有研究表明，約有10%的胃癌與EB病毒感染有關(guān)[1],故這類胃癌又被稱為EB病毒相關(guān)性胃癌（EBVaGC）。NF-kB作為重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,起著核心樞紐作用，它可以調(diào)控很多基因表達(dá)，而這些基因又與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、免疫反應(yīng)、轉(zhuǎn)化有著密切的聯(lián)系；bcl-2能抑制細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)細(xì)胞生存期，進(jìn)而引發(fā)腫瘤。胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多步驟、多因素影響的過(guò)程，涉及的機(jī)制非常復(fù)雜，本文通過(guò)原位雜交方法檢測(cè)胃癌中EBER表達(dá)

4、情況及免疫組化方法檢測(cè)NF-kB和bcl-2的表達(dá)情況，探討它們與胃癌臨床病理特征的關(guān)系及意義。1材料與方法1.1一般資料選擇廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院2008年1月?2013年6月手術(shù)切除并經(jīng)病理檢測(cè)證實(shí)為胃癌的蠟塊標(biāo)本84例，所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療，病理類型均為腺癌。其中男性48例，女性36例；年齡32?87歲,平均年齡56歲。1.2EBER原位雜交EBER原位雜交試劑購(gòu)于PanPath公司。組織蠟塊切成4uni粘附于防脫片上，常規(guī)脫蠟及水化，蛋白酶K消化。滴加適量雜交液，551下孵育1.5小時(shí)，轉(zhuǎn)移至37*下孵育12小時(shí)，

5、PBS浸泡洗滌，滴加適量一抗，于379下孵育30分鐘，拭去組織周圍的液體，滴加適量二抗，于室溫下孵育20分鐘。拭去組織周圍的液體，滴加適量HRP聚合物，室溫下孵育30分鐘，PBS浸泡洗滌后滴加適量DAB顯色液，在室溫下孵育約3-10分鐘，同時(shí)在鏡下觀察顯色程度。1.3免疫組織化學(xué)法NF-kB及bcl-2單克隆抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。5um厚切片。常規(guī)脫蠟水化后，檸檬酸高壓修復(fù)，3%H202阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，其余步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。用PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。1.4結(jié)果判讀EBER原位

6、雜交結(jié)果判定：EBER陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕黃色。免疫組化采用Volm使用的半定量法[2]：NF-kB陽(yáng)性表達(dá)部位為胞質(zhì)和（或）胞核，bcl-2陽(yáng)性表達(dá)部位為胞質(zhì)和（或）胞膜。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P0.05）（詳見(jiàn)表1）。圖1胃癌中EBER的表達(dá)X200圖2胃癌中NF-kB的表達(dá)X200圖3胃癌中bcl-2的表達(dá)X200表1胃癌組織中NF-kB及bcl-2蛋白表達(dá)情況3討論胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在消化道的惡性腫瘤中居首位。主要分布在亞洲、拉丁美洲和中歐地區(qū)，我國(guó)胃癌發(fā)病率很高。胃癌的發(fā)生與發(fā)展是

7、一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及基因異常表達(dá)、細(xì)胞傳導(dǎo)異常及細(xì)胞凋亡抑制等機(jī)制。EB病毒是與人類關(guān)系最密切的病毒之一，而且它與很多惡性腫瘤關(guān)系密切，例如鼻咽癌、伯基特淋巴瘤等等。自1991年Shibata等[3]首次在胃癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)EB病毒以來(lái)，EB病毒相關(guān)性胃癌逐漸成為研究熱點(diǎn)，國(guó)外研究報(bào)道胃癌EBV感染檢出率7.3%?16.9%[4],而且不同地區(qū)胃癌中EB病毒感染率存在明顯差異。本研究中84例胃癌標(biāo)本，有9例胃癌EBER陽(yáng)性，陽(yáng)性率為10.7%,與文獻(xiàn)報(bào)道相符。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),胃癌里大部分癌細(xì)胞都有EBER表達(dá)，由此推測(cè)EB病毒感染可能在EBV

8、aGC形成早期發(fā)揮作用---感染了EB病毒的腫瘤細(xì)胞發(fā)生單克隆性增殖，最后促使癌變進(jìn)一步發(fā)展并導(dǎo)致幾乎所有癌細(xì)胞均有EBER表達(dá)，這提示EB病毒與胃癌發(fā)生有密切關(guān)系。正常時(shí)，位于胞漿內(nèi)的NF-kB與NF-k