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《EB病毒相關(guān)胃癌組織及胃癌細(xì)胞系中LOXL1基因甲基化狀態(tài)與表達(dá)的研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、EB病毒相關(guān)胃癌組織及胃癌細(xì)胞系中LOxLl基因甲基化狀態(tài)與表達(dá)的研究摘要EB病毒(Epstein．Barrvirus，EBV)是公認(rèn)的DNA致瘤病毒，現(xiàn)己確認(rèn)EBV感染與部分胃癌發(fā)生密切相關(guān)，但發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。EBV感染可誘導(dǎo)相關(guān)抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)，這被認(rèn)為是引起EBV相關(guān)腫瘤抑制基因功能失活的重要機(jī)制之一。目的檢測(cè)并比較分析部分胃癌細(xì)胞系及EBV相關(guān)胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)和EBV陰性胃癌(EBV-negativedgastriccarcinoma,EBVnGC)組織中LOXLl基因甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)，探
2、討EBV感染對(duì)LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響，為進(jìn)一步研究LOXLl基因在EBVaGC發(fā)生中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法采用甲基化特異性PCR(Methylation—SpecificPCR，MSP)和亞硫酸氫鹽基因組測(cè)序法(Bisulfitegenomicsequencing，BGS)檢測(cè)EBV陰性5fnISH性胃癌細(xì)胞系以及EBVaGC和EBVnGC組織中LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)。用5．氮雜．2’．脫氧胞苷(5．Aza—CdR)對(duì)EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系進(jìn)行去甲基化處理，MSP及BGS檢測(cè)LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的變化。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real
3、．timequantitativePCR，Real．timeqPCR)檢測(cè)比較EBV陰性胃癌細(xì)胞系、EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系之間以及5-Aza．CdR作用前后EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系之間LOXLl基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的差異。結(jié)果①胃癌細(xì)胞系MSP結(jié)果顯示：3種EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系SNU719，GT38，GT39和4種EBV陰性胃癌細(xì)胞系MKN．45，SGC7901，HGC．27，BGC．823中LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)均呈M+u型。②胃癌細(xì)胞系BGS結(jié)果顯示：3種EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系中LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)有大多數(shù)CpG位點(diǎn)呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)，EBV陰性胃癌細(xì)胞系中未發(fā)現(xiàn)甲基化位點(diǎn)，EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系甲基
4、化程度明顯高于EBV陰性胃癌細(xì)胞系。③胃癌組織MSP結(jié)果顯示：EBVaGC和EBVnGC組織中LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)也均表現(xiàn)為M+U型，但EBVaGC組織中LOXLl基因啟動(dòng)子的甲基化程度較EBVnGC組織高。④部分胃癌組織BGS測(cè)序結(jié)果顯示：不同胃癌組織標(biāo)本中LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)的20個(gè)CpG位點(diǎn)呈現(xiàn)不同的甲基化狀態(tài)，甲基化程度存在一定的差異；其中EBVaGC組織中LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)有更多的CpG位點(diǎn)呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)，總體甲基化程度高于EBVnGC組織。⑤5．Aza．CdR處理后EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系MSP及BGS結(jié)果顯示：LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度降低。@Real．timeqP
5、CR結(jié)果顯示：通過(guò)比較差異倍數(shù)2-AAu，EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系和EBV陰性胃癌細(xì)胞系間LOXLl基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平存在一定的差異，EBV陰性胃癌細(xì)胞系LOXLl基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系的4．35倍；5-Aza．CdR去甲基化處理后EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系中LOXLl基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平比處理前有2．33倍的升高。結(jié)論EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系及EBVaGC組織中存在LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)的異常甲基化，EBV感染可誘導(dǎo)LOXLl基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化狀態(tài)，并通過(guò)高甲基化下調(diào)細(xì)胞中LOXLl基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，進(jìn)而在EBV相關(guān)腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用。碩士研究生：SE海娟(臨床檢驗(yàn)診斷學(xué))指導(dǎo)
6、導(dǎo)師：李慧教授關(guān)鍵詞：EB病毒；胃癌細(xì)胞系；EBV相關(guān)胃癌；DNA甲基化；LOXLl基因；5-Aza．CdRStudyofmethylationstatusandexpressionononLOXL1geneinEpstein-Barrvirus—associatedgastriccarcinomatiussesandgastriccarcinomacelllinesAbstractEpstein-Barrvirus(EBV)isknownasanimportantDNAtumorvirus．EBVinfectionISrelatedtogastriccarcinoma，butpathog
7、enicmechanismofthatisnotwellunderstood．MethylationoftumorsuppressorgeneinducedbyEBVinfectionisknownasanimportantmechanismforthescilenceoftumorsuppressorgene．ObjectiveThestudyaimedtoexploretheinfluenceofEBVinfecti
