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《抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬的初步研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、APreliminarystudyonproductingoftransgenicpigforresistclassicalswinefeverVlrusinlecUon一■●n』■Thesissubmittedto(躉ngdao內(nèi)以c“厲“紀廠U佗勿P船Z砂InFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomyQuHonglei(CollegeofAnimalScienceandTechnologySupervisor：SongXuexiongQingdao．ChinaJune，
2、2012學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。如不實，本人負全部責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名：均凌磊簽字日期少／≯年多月矽日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)校可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫
3、進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：均澎、磊簽字日期：．M)，年夕月彤日導(dǎo)師簽字：拜鋤I『五簽字日期：年月日青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬的初步研究摘要豬瘟(ClassicalSwineFever，CSF)是一種由豬瘟病毒(ClassicalSwineFevervirus，CSFV)91起的急性、熱性和高度接觸性的傳染病，流行廣泛，發(fā)病率及死亡率高，危害極大，給養(yǎng)豬業(yè)尤其規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)造成嚴重經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將本病列入A類法定傳染
4、病，在我國制定的《家畜家禽防疫條例實施細則》中也被列為一類傳染病。因此加快抗豬瘟病毒豬新品種的培育研究，控制豬瘟病毒的廣泛傳播具有重大的現(xiàn)實意義，本研究通過精子介導(dǎo)法成功構(gòu)建出抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬。研究一：本研究旨在為構(gòu)建抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因克隆胚胎建立供核細胞系和基因轉(zhuǎn)染體系，為抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因克隆豬的研究提供參考。取體長10．15cm的大白豬胚胎，采用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大白豬胎兒成纖維細胞(Porcinefetusfibroblasts，PFF)，脂質(zhì)體介導(dǎo)法將含有抗豬瘟病毒基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞中，探索影響pGPHl／GFP／Neo
5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染豬胎兒成纖維細胞的最佳條件。結(jié)果顯示，2．5山脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染1．2嵋質(zhì)粒DNA6h轉(zhuǎn)染率最高32．5％。但是超過上述脂質(zhì)體用量和質(zhì)粒DNA濃度以及轉(zhuǎn)染時間，轉(zhuǎn)染率反而降低，引起細胞的皺縮及死亡。本研究成功建立了豬胎兒成纖維細胞系，并有效轉(zhuǎn)染了含有抗豬瘟病毒基因的重組pGPHl／GFP／NeoDNA，優(yōu)化了轉(zhuǎn)染條件，獲得了轉(zhuǎn)抗豬瘟病毒基因的供核細胞。研究二：本研究旨在利用精子介導(dǎo)法構(gòu)建抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬，為抗豬瘟病毒轉(zhuǎn)基因豬新品種培育奠定基礎(chǔ)。將線性化的抗豬瘟病毒重組質(zhì)粒DNA與離心洗滌后的豬精子17"C共孵育2h，周轉(zhuǎn)染后的精子對自然發(fā)
6、情的受體母豬進行人工輸精。在輸精的5頭受體母豬中有4頭妊娠，共分娩42頭仔豬，其中有12頭木乃伊死胎，分娩時成活仔豬30頭。采集成活仔豬耳組織提取DNA進行PCR檢測，共檢測出10頭轉(zhuǎn)基因陽性仔豬，轉(zhuǎn)基因陽性率33．3％。關(guān)鍵詞：精子介導(dǎo)；轉(zhuǎn)基因豬；抗豬瘟病毒；脂質(zhì)體；豬胎兒成纖維細胞青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSl砌LCTProductionoftransgenicpigwhichcanresist-·o●一●^·-’classicalSWlnefeverVlrusiniectionlaysperm—·mediatedgenetransferA
7、bstractClassicalswinefever(CSF)isakindofacute，febrileandhi．ghlycontagiousdiseasethatcausedbytheClassicalSwineFevervirus(CSFV)．CSFcancausegreatdamagestOthedomesticandinternationalpigbreedingindustryasitischaracterizedbyhigh-contagious，highmorbidityandwiderangeoftransmission．Of
8、ficeInternationalDesEpizooties(ore)hascategorizedCSFasAclassinfectio
