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《大豆根腐病致病鐮孢菌的多重pcr檢測技術(shù)》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大豆根腐病致病鐮砲菌的多重PCR檢測技術(shù)何宛芹付瑤魯雯璐常小麗楊文錘四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院四川省作物帶狀復(fù)合種植工程技術(shù)研究中心摘要：為建立大豆根腐病鐮他菌的多重PCR檢測方法，以四川大豆根腐病致病菌包括尖也鐮也菌、腐皮鐮孑包菌、禾谷鐮刀菌和木賊鐮泡菌為對象，設(shè)計(jì)鐮泡菌翻譯延伸因子基因EF-la的種特異引物，建立多重PCR擴(kuò)增體系，并進(jìn)行優(yōu)化與驗(yàn)證。結(jié)果表明:25uL體系為最優(yōu)鐮孑包菌多重PCR擴(kuò)増?bào)w系，4種鐮抱菌等體積混合DNA4.0nL,各鐮抱菌特異正向引物l.OuL,共用反向引物4.0nL,最佳退火溫度為54°C,當(dāng)循環(huán)30次時(shí)，能清
2、晰地?cái)U(kuò)增出各鐮抱菌EF-la條帶，對4種鐮也菌混合DNA的檢測靈敏度可達(dá)0.1ng/卩Lo室內(nèi)環(huán)境樣木驗(yàn)證結(jié)果表明，依據(jù)EF-la擴(kuò)增片段大小，該體系能夠特異地檢測出大豆黃化苗與致病鐮砲菌混合樣本屮的鐮抱菌，但無法從其它真菌的DNA屮擴(kuò)增獲得目的片段。表明基于EF-la基因特異引物建立的鐮砲菌多重PCR檢測技術(shù)可快速、特異地檢測大豆根腐病鐮他菌。關(guān)鍵詞：人豆根腐病;鐮孑包菌;多重PCR;翻譯延伸因子基因;病原菌鑒定;作者簡介：常小麗，E-mail:xl_cha.ngkit@126.com;作者簡介：楊文乍玉，E-mai1:mssiyan
3、gwy@sicau.edu.cn收稿日期：2016-12-26基金：四川省科技支撐項(xiàng)目(2015NZ0040)AmultiplexPCRdetectiontechniqueforthepathogenicFusariumspeciescausingsoybeanrootrotHeWanqinFuYaoLuWenluChangXiaoliYangWenyuSichuanEngineeringResearchCenterforCropStripIntercroppingSystem,CollegeofAgriculture,SichuanA
4、griculturalUniversity;Abstract：ToestablishamultiplexPCRdetectiontechniqueforFusariumspeciescausingsoybeanrootrot,thefourmajorpathogenicFusariumspecies,Fusariumoxysporum,F.solani,F?equisetiandF?graminearum,insouthwestChinawereselected.Basedonthesequeneeofthetranscriptione
5、longationfactorgeneEFTci,theFusariumspecies-specificprimersweredcsigned,andthemultiplexPCRwereestablished.Thereactionandamplificationparameterswereoptimized,andthesensitivityandspecificitywereverified.TheresultsshowedthatallspecificEFTagenefragmentsoffourFusariumspeciesw
6、ereamplifiedbythemultiplexPCRinatotalvolumeof25uLwith4.0uLmixedDNA,1.0uLspecificforwardprimerforeachFusariumspecies,and4.0uLcommonreverseprimeratanannealingtemperatureof54°Cand30cycles.ThemultiplexPCRsystemwascapableofdetectingthemixedDNAwithaconcentration0.1ng/uL.Thepat
7、hogenicFusariumspecieswassuccessfullytestedfromthemixedsamplesofsoybeanetioldtedseed!ingswithFusariumspeciesbyusingtheoptimizedmultipicPCRaccordingtofragmentsizeofEFTagene,whereasthisgenewasnotamplifiedfromDNAsamplesofothertestedfungi.ThestudyindicatedthatthemultiplexPCR
8、techniquebasedonspecificEFTageneprimerpairsoffourspeciesofFusariumcouldbeusedfortherapidandprecisedetec
