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1、木棗病原真菌抑菌試驗(yàn)研究No.59■48?陜西科技大學(xué)J0URNAL0FSHAANXIUNIVERSITY0FSCIENCE8UTECHN0I0GY0ct.2010Vol
2、28文章編號(hào)：1000—5811(2010)05—0048—04木棗病原真菌抑茵試驗(yàn)研究劉青，許牡丹,曾令軍，劉艷(陜四科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，陜西西安710021)摘要:從病變的鮮棗屮分離出兩種茵，以4種植物為原料，以抑菌圈直徑為指標(biāo)，對(duì)病原茵植物抑菌劑進(jìn)行了篩選?分別以丁香，良姜，苦參和甘草為原料，用水和70%乙醇做浸提劑，之后分別用水,
3、20乙醇,20甘油為溶劑定容，研究其對(duì)青霉和酵母的抑茵效果，同時(shí)考察了4種屮草藥抑菌效果好的最佳溶劑.結(jié)果顯示，青霉抑茵效果好的為丁香，甘草提取液;酵母抑茵效果好的為苦參，廿草提取液;醇提抑茵效果好于水提.關(guān)鍵詞:木棗;病原真菌;中草藥;抑菌中圖法分類號(hào):TS201.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A0前言果蔬采后因貯藏溫度，濕度不適而極易腐爛變質(zhì).木棗由于其質(zhì)構(gòu)緊密，含水量少,采后極易酒化變質(zhì)，采后病害是影響貯藏的重要因素，但由于品種多，貯藏環(huán)境不同,因此許多研究了者分離鑒定的致病菌不盡相同?有研究報(bào)道鮮棗在生產(chǎn)和貯藏過程屮引起病
4、害的病原菌主要有鏈格泡菌，擬莖點(diǎn)霉菌，歐氏干菌，梭殼也菌，根菌索菌,根霉菌等口].木試驗(yàn)從木棗貯藏后期分離出致病菌,用可食中草藥做抑菌劑，研究了其對(duì)木棗病原菌的抑菌效果以及最佳的浸提劑和溶劑.1材料與方法1.1試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料:丁香，良姜，苦參，甘草購于西安市未央?yún)^(qū)景家中西藥店.菌種:青霉和酵母菌，在生命學(xué)院實(shí)驗(yàn)室從病變的鮮棗組織中分離純化得到.培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基.1.2儀器與設(shè)備超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）,電熱恒溫培養(yǎng)箱（成都紅星電烘箱廠），手提式壓力滅菌
5、鍋（浙江新豐更療器械有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）,BK5000型奧特偏光顯微鏡（重慶奧特光學(xué)儀器有限公司）.1.3試驗(yàn)方法131木棗病原菌的分離1二2]將貯藏過程中發(fā)病的木棗病果表面用水清洗，然后切取與病害鄰近的4?5mm見方的組織小塊，用體積分?jǐn)?shù)75%的酒精浸泡30s,迅速用滅菌濾紙吸出酒精后移人2的次氯酸鈉溶液中浸泡1min,再用*收稿日期:2010-07—16作者簡(jiǎn)介汶IJ青（1985一），女，陜四省商洛市人，在讀碩士生，研究方向:果蔬加工與保鮮基金項(xiàng)目:陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)0（2008K03—1
6、5）第5期劉青等:木棗病原真菌抑菌試驗(yàn)研究?49?無菌水沖洗3次，用消毒濾紙吸干表而水分，最后將組織小塊接在PDA培養(yǎng)基上于25?28°C下培養(yǎng)3?5d,當(dāng)培養(yǎng)出的菌落直徑為lcm吋，用接種針挑取菌落邊緣菌絲接人另一PDA培養(yǎng)皿上，并于25?28°C培養(yǎng).重復(fù)上述操作3次，所得菌落即可作為純化菌種回接果實(shí)，如發(fā)病癥狀與前相同,便可作為采后病原菌轉(zhuǎn)接人試管,4°C冰箱保存，作為供試菌種進(jìn)行進(jìn)一步鑒定.132木棗病原菌的鑒定根據(jù)病害癥狀，菌落形態(tài)及菌絲，淪子等的特征來確定感染木棗的病原真菌.1.4植物粗提物的制備將4種
7、中草藥原料粉碎后，過40目篩，分別稱取2.0g粉末，用溶劑浸提丁香,良姜,苦參和甘草，于60°C的恒溫振蕩儀中振蕩24h,濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，再用不同溶劑定容濃縮液至lOOmL,使最后質(zhì)量濃度相當(dāng)于20mg/mL.(1)水提水溶中草藥:按粗提物制備方法，用水做溶劑，濃縮后用水定容至lOOmL.(2)醇提水溶屮草藥:方法同上，用70乙醇做溶劑，濃縮后用水定容至lOOmL.(3)醇提醇溶中草藥:方法同上，用70乙醇做溶劑，濃縮后用20乙醇定容至lOOmL.(4)醇提油溶中草藥:方法同上，用70%乙醇做溶劑，濃縮后
8、用20丙三醇(甘油)定容至lOOmL.1.5菌懸液制備將分離純化的菌種接入平板培養(yǎng)基上，在28°C培養(yǎng)5d,進(jìn)行活化,然后挑1壞菌放人9mL0.9無菌牛理鹽水中，震蕩搖勻,制成濃度約為107?108cfu/mL的菌懸液.1.6抑菌劑篩選取直徑為6mm濾紙圓片,放人到抑菌劑溶液中，浸泡30min,取出晾干.用注射器吸取菌懸液0.6mL于平板培養(yǎng)基上，將晾干的濾紙片貼在培養(yǎng)基表面，每皿3片，重復(fù)3次，在28°C培養(yǎng)28?72h,取出測(cè)量抑菌圈直徑，取平均值,篩選有效的抑菌劑.2結(jié)果與討論2.1病原菌鑒定從貯藏的木棗果實(shí)
9、上分離出A,B兩種病原真菌，挑取各菌落少許到載玻片上，用顯微鏡觀察，測(cè)量，根據(jù)各病原菌的形態(tài)特征對(duì)其進(jìn)行鑒定.(1)病原真菌A.培養(yǎng)該菌，在PDA培養(yǎng)基上菌落如圖1所示，菌落呈圓形，青綠色,粉狀霉層菌落，菌落邊緣白色.顯微鏡觀察可見分牛泡子梗叢生，量大，小梗為瓶形梗，泡子大小均勻,近球形或橢圓形.細(xì)胞形態(tài)在400倍光學(xué)顯微鏡下觀察如圖2所示,根據(jù)以上特征及文
