去勢(shì)對(duì)人前列腺癌裸鼠移植瘤mir-301a表達(dá)水平的影響

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文去勢(shì)對(duì)人前列腺癌裸鼠移植瘤miR--301a表達(dá)水平的影響姓名：胡現(xiàn)斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：張勇201203中文摘要去勢(shì)對(duì)人前列腺癌裸鼠移植瘤miR-301a表達(dá)水平的影響摘要目的：前列腺癌(prostaticcarcinoma，PCA)是泌尿系常見(jiàn)的腫瘤。近年來(lái)，隨著我國(guó)人口老齡化和飲食結(jié)構(gòu)的改變，前列腺癌的發(fā)病率有上升趨勢(shì)。在我國(guó)前列腺癌患者被確診后往往已經(jīng)有骨及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，而存活時(shí)間往往不超過(guò)5年，因此早期診斷及治療已迫在眉睫。在局限性前列腺癌的患者實(shí)施根治性前

2、列腺切除術(shù)，大約有30％'-'40％會(huì)復(fù)發(fā)，這很有可能是在實(shí)施手術(shù)前已經(jīng)有轉(zhuǎn)移。早期前列腺癌為雄激素依賴性，通過(guò)積極的抗雄激素治療能夠延緩病情，而晚期卻往往發(fā)展成為非激素依賴性的前列腺癌。在前列腺癌發(fā)展變化的過(guò)程中，向非雄激素依賴性的轉(zhuǎn)化是最為惡性的事件，使得前列腺癌成為不可治愈的疾病。隨著芯片技術(shù)的發(fā)展，人們通過(guò)對(duì)microRNA表達(dá)譜的研究，在不同的癌癥以及癌癥的不同階段miRNA的表達(dá)出現(xiàn)顯著差異，并且在許多癌癥的早期階段和發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中起到了至為關(guān)鍵的作用。在前列腺癌中也有異常表達(dá)的miRNA，并

3、通過(guò)研究證實(shí)miRNA在前列腺癌的發(fā)病機(jī)制中占有重要作用，這對(duì)疾病的診斷和靶向治療顯示出良好的應(yīng)用前景。我們選用人類前列腺癌LNCaP細(xì)胞株建立了人類前列腺癌裸鼠動(dòng)物模型，探討人前列腺癌LNCaP細(xì)胞荷瘤裸鼠去勢(shì)后miR-301a和其宿主基因SKAT2的表達(dá)變化。方法：雄激素依賴的人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞用含有10％胎牛血清的RPMll640的培養(yǎng)基于37℃、5o％oC02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用0．25％胰蛋白酶消化后離心并計(jì)數(shù)，PBS稀釋至細(xì)胞數(shù)量為5×108／mL。取備好的LNC

4、aP細(xì)胞懸液與等量的Ma仃igel混合均勻后，立即接種到裸鼠的右前肢腋部皮下，0．2mL／只，細(xì)胞的最終接種量為5X107／只。每4天用游標(biāo)卡尺測(cè)量一次腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算腫瘤體積，繪制腫瘤體積變化曲線圖。待腫瘤長(zhǎng)至體積為200mm3時(shí)，將LNCaP荷瘤裸鼠隨機(jī)分成4組，每組6只。其中兩組裸鼠按0．012ml／g的劑量給予4％水合氯醛腹腔麻醉后進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)，常規(guī)切除雙側(cè)睪丸。另外兩組裸鼠作為對(duì)照組僅按睪丸切除術(shù)方法進(jìn)行操作，開(kāi)腹但不切除睪丸。手術(shù)過(guò)程在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下進(jìn)行。觀察到去勢(shì)組腫瘤體積逐漸縮小的過(guò)

5、程中選擇一個(gè)時(shí)間中文摘要點(diǎn)，處死一組去勢(shì)荷瘤裸鼠和對(duì)照裸鼠，取出皮下腫瘤在電子天平上稱取腫瘤濕重，作為第一次取材的腫瘤。然后在腫瘤縮小后又再次增長(zhǎng)的過(guò)程中選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，處死一組去勢(shì)荷瘤裸鼠和對(duì)照裸鼠，取出腫塊稱重，作為第二次取材的腫瘤。兩次取材均計(jì)算抑瘤率，剝離的腫瘤組織凍存于．80℃冰箱，留待抽提RNA。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)移植瘤的miR-301a和SKA2的表達(dá)。結(jié)果：LNCaP荷瘤裸鼠去勢(shì)組自去勢(shì)的第二天開(kāi)始，腫瘤體積就隨時(shí)間逐漸減小，而正常對(duì)照的荷瘤裸鼠瘤體積隨時(shí)間變化逐漸上升。到去勢(shì)后的第13天，

6、去勢(shì)組裸鼠腫瘤體積縮4,N(62．54-21．5)mm3，而對(duì)照組為(384．5-+60．6)mm3，前者是后者的20％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

7、g，是對(duì)照組的11．7％。然后去勢(shì)組裸鼠腫瘤體積逐漸增大，到去勢(shì)后的第41天，去勢(shì)組的腫瘤體積增長(zhǎng)到(364．54-97．3)mm3，對(duì)照組的體積增長(zhǎng)到(925．84-143．6)mm3。此時(shí)處死裸鼠，取出腫瘤塊，此為第二次取材。稱量腫瘤塊重量，去勢(shì)組為(368．94-59．5)mg，對(duì)照組為(975．34-162．7)mg，抑瘤率為62．2％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(JP

8、5倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0．05)。利用realtimePCR技術(shù)，檢測(cè)腫瘤組織中SKA2的mRNA表達(dá)水平。第一次取材的去勢(shì)組裸鼠，SKA2的mRNA表達(dá)水平下降到對(duì)照組的O．5倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P