消痰散結(jié)方對(duì)人胃癌mkn45裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

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1、消痰散結(jié)方對(duì)人胃癌MKN45裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白表達(dá)的影響【關(guān)鍵詞】胃腫瘤;中藥;增殖細(xì)胞核抗原;表皮生長(zhǎng)因子受體;裸小鼠　　中醫(yī)學(xué)認(rèn)為惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移與痰邪為病有密切關(guān)系。魏品康教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)研制出消痰散結(jié)復(fù)方治療胃癌，取得較好療效［1，2］。本研究建立裸鼠胃腺癌模型，觀察該藥對(duì)裸鼠胃腺癌體內(nèi)生長(zhǎng)的抑制作用及其對(duì)胃癌組織中增殖細(xì)胞核抗原（proliferatingcellnuclearantigen,PA）和表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermalgrol，0.25g，由上海旭東海普藥業(yè)有限公司出品（批號(hào)0

2、60404），購(gòu)自長(zhǎng)征醫(yī)院藥房。主要試劑鼠抗人PA單抗（稀釋度1∶100，代號(hào)M0879）和EGFR單抗（稀釋度1∶20，代號(hào)M0886）購(gòu)自美國(guó)DAKO公司?？股锼氐鞍祖溇鬲策^(guò)氧化物酶（streptavidinperoxidase,SP）連接法試劑盒和顯色試劑盒，購(gòu)自福建邁新公司?！　?.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BABL/c裸鼠，雄性，共45只，體質(zhì)量（20～22）g，8～10周齡，由中國(guó)科學(xué)院腫瘤生物技術(shù)研究所提供。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證書，編號(hào)0742；裸鼠動(dòng)物合格證書，醫(yī)動(dòng)字第02492號(hào)?！　?.2實(shí)驗(yàn)方法　　1.2.1裸鼠MKN

3、45胃腺癌模型建立裸鼠MKN45人胃腺癌細(xì)胞株由中國(guó)科學(xué)院腫瘤生物技術(shù)研究所提供。制備接種細(xì)胞懸液，無(wú)菌操作。體外培養(yǎng)MKN45細(xì)胞生長(zhǎng)密集時(shí)，用0.05％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸（ethylenediamietraaceticacid,EDTA）消化1～2min，傾出消化液，加入無(wú)血清1640液洗滌，離心，用無(wú)血清1640液配成接種細(xì)胞，濃度為2×106/L。用相差顯微鏡觀察呈均勻的單細(xì)胞懸液。皮下接種：無(wú)菌操作，消毒皮膚，取lml注射器，抽吸出0.4ml細(xì)胞懸液，接種在裸鼠右前肢根部皮下。裸小鼠皮下移植傳代，取傳代后

4、14d左右的裸小鼠，無(wú)菌操作，從腋部皮下剝?nèi)∧[瘤組織，剔除纖維包膜，切開，選取生長(zhǎng)良好、呈淡紅色、魚肉狀瘤組織，切成1mm×1mm×1mm小塊，置于生理鹽水中備用。裸鼠稱質(zhì)量后以75mg/kg氯胺酮腹腔注射麻醉，沿上腹正中線切開約1cm，將備好的腫瘤組織塊植入。術(shù)后逐日觀察腫瘤生長(zhǎng)情況，以小鼠腹部出現(xiàn)可觸及的包塊作為成瘤標(biāo)志，觀察小鼠一般活動(dòng)及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等變化?！　?.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及用藥將接種后的BABL/c裸鼠隨機(jī)分為3組，消痰散結(jié)方組、化療組及荷瘤對(duì)照組，每組各15只，無(wú)特定病原菌（specificpathogenfree,S

5、PF）條件下分籠飼養(yǎng)于層流架內(nèi)。消痰散結(jié)方組，于接種后次日開始每只裸鼠灌服消痰散結(jié)方濃縮煎劑0.4ml/次（相當(dāng)于生藥9.2g/kg體質(zhì)量）1次/d，連續(xù)灌胃6周?？瞻缀闪鰧?duì)照組，亦于接種后次日開始每只裸鼠灌服生理鹽水0.4ml/次，1次/d，連續(xù)灌胃6周。化療組，5FU以生理鹽水稀釋成7.5mg/ml，參照　　表2各組瘤組織中PA陽(yáng)性表達(dá)（略）　　Table2PositiveexpressionofPAindifferentgroups　　*P＜0.05,**P＜0.01,vscontrolgroup.　　圖2各組瘤組織中PA陽(yáng)性

6、表達(dá)（SP，×200）（略）　　Figure2PositiveexpressionofPAindifferentgroups(SP,×200)　　A:Controlgroup;B:XiaotanSanjieRecipegroup;C:5FUgroup.　　圖3各組瘤組織中EGFR陽(yáng)性表達(dá)（SP，×200）（略）　　Figure3PositiveexpressionofEGFRindifferentgroups(SP,×200)　　A:Controlgroup;B:XiaotanSanjieRecipegroup;C:5FUgrou

7、p.　　表3各組瘤組織中EGFR陽(yáng)性表達(dá)（略）　　Table3PositiveexpressionofEGFRindifferentgroups　　*P＜0.05,**P＜0.01,vscontrolgroup.　　3討論　　腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖在一定程度上反映腫瘤細(xì)胞代謝和DNA合成狀態(tài)。PA相對(duì)分子量為36000，既是控制細(xì)胞DNA合成的必需非組蛋白核內(nèi)多肽，也是細(xì)胞DNA合成期DNA多聚酶δ輔助蛋白。靜止細(xì)胞中PA含量很少，細(xì)胞進(jìn)入增生周期開始逐漸增加，S期達(dá)到高峰，G2期和Ml期明顯下降，對(duì)DNA合成的調(diào)節(jié)和復(fù)制起重要作用。Tao

8、等［3］發(fā)現(xiàn)PA標(biāo)記指數(shù)與胃癌的浸潤(rùn)、分期密切相關(guān)，國(guó)內(nèi)