資源描述：
《消痰散結方對人胃癌mkn45裸鼠移植瘤生長及細》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、消痰散結方對人胃癌MKN45裸鼠移植瘤生長及細【關鍵詞】胃腫瘤;中藥;增殖細胞核抗原;表皮生長因子受體;裸小鼠 中醫(yī)學認為惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移與痰邪為病有密切關系。魏品康教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗研制出消痰散結復方治療胃癌，取得較好療效［1，2］。本研究建立裸鼠胃腺癌模型，觀察該藥對裸鼠胃腺癌體內生長的抑制作用及其對胃癌組織中增殖細胞核抗原（proliferatingcellnuclearantigen,PA）和表皮生長因子受體（epidermalgrol，0.25g，由上海旭東海普藥業(yè)有限公司出品（批號0604
2、04），購自長征醫(yī)院藥房。主要試劑鼠抗人PA單抗（稀釋度1∶100，代號M0879）和EGFR單抗（稀釋度1∶20，代號M0886）購自美國DAKO公司?？股锼氐鞍祖溇鬲策^氧化物酶（streptavidinperoxidase,SP）連接法試劑盒和顯色試劑盒，購自福建邁新公司。 1.1.2實驗動物BABL/c裸鼠，雄性，共45只，體質量（20～22）g，8～10周齡，由中國科學院腫瘤生物技術研究所提供。醫(yī)學實驗動物合格證書，編號0742；裸鼠動物合格證書，醫(yī)動字第02492號。 1.2實驗方法 1.2.
3、1裸鼠MKN45胃腺癌模型建立裸鼠MKN45人胃腺癌細胞株由中國科學院腫瘤生物技術研究所提供。制備接種細胞懸液，無菌操作。體外培養(yǎng)MKN45細胞生長密集時，用0.05％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸（ethylenediamietraaceticacid,EDTA）消化1～2min，傾出消化液，加入無血清1640液洗滌，離心，用無血清1640液配成接種細胞，濃度為2×106/L。用相差顯微鏡觀察呈均勻的單細胞懸液。皮下接種：無菌操作，消毒皮膚，取lml注射器，抽吸出0.4ml細胞懸液，接種在裸鼠右前肢根部皮下
4、。裸小鼠皮下移植傳代，取傳代后14d左右的裸小鼠，無菌操作，從腋部皮下剝取腫瘤組織，剔除纖維包膜，切開，選取生長良好、呈淡紅色、魚肉狀瘤組織，切成1mm×1mm×1mm小塊，置于生理鹽水中備用。裸鼠稱質量后以75mg/kg氯胺酮腹腔注射麻醉，沿上腹正中線切開約1cm，將備好的腫瘤組織塊植入。術后逐日觀察腫瘤生長情況，以小鼠腹部出現(xiàn)可觸及的包塊作為成瘤標志，觀察小鼠一般活動及營養(yǎng)狀態(tài)等變化?！ ?.2.2實驗動物分組及用藥將接種后的BABL/c裸鼠隨機分為3組，消痰散結方組、化療組及荷瘤對照組，每組各15只，無特定病原
5、菌（specificpathogenfree,SPF）條件下分籠飼養(yǎng)于層流架內。消痰散結方組，于接種后次日開始每只裸鼠灌服消痰散結方濃縮煎劑0.4ml/次（相當于生藥9.2g/kg體質量）1次/d，連續(xù)灌胃6周?？瞻缀闪鰧φ战M，亦于接種后次日開始每只裸鼠灌服生理鹽水0.4ml/次，1次/d，連續(xù)灌胃6周?；熃M，5FU以生理鹽水稀釋成7.5mg/ml，參照文獻及本組以往研究經(jīng)驗按60mg/kg腹腔注射，1次/周，連續(xù)用藥3周?！ ?.2.3移植瘤生長、小鼠活動及營養(yǎng)狀況觀察接種后觀察小鼠活動、進食及營養(yǎng)情況。6周后
6、拉頸處死裸鼠,從腋部皮下完整剝取腫瘤組織，剔除纖維包膜，于電子天平上稱取瘤質量。運用公式抑瘤率（%）＝（對照組治療后平均瘤質量－用藥組治療后平均瘤質量）/對照組治療后平均瘤質量×100計算抑瘤率。完成觀察及稱取質量的瘤組織用中性福爾馬林固定，石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。 1.2.4移植瘤組織PA、EGFR的測定SP法，蘇木素伊紅染色，石蠟切片脫蠟至水，微波修復抗原。每張切片滴加一抗（鼠抗人PA、EGFR）1滴，4℃冰箱過夜，PBS沖洗3次后滴加生物素化二抗，每張切片上加1滴抗生物素蛋白鏈菌素過氧化物酶溶液，3，3
7、'二氨基及聯(lián)苯胺底物顯色10min，二甲苯透明，中性樹膠封閉。PA染色陽性物質呈棕黃色，顆粒狀，位于胃癌細胞核內，在×200油鏡下，隨機計數(shù)200個以上的細胞作為分析基數(shù)，計數(shù)標記PA指數(shù)，即被標記細胞在一細胞群中所占的百分率。EGFR陽性染色大多位于胞漿及胞膜上，個別位于胞核上，為棕黃色顆粒，按染色深度和陽性細胞所占比例分別計分。（1）染色深度：0分，無著色；1分，淺著色；2分，深著色。（2）陽性細胞比例：0分，無著色；1分，著色≤1/3；2分，1/3＜著色≤2/3；3分，著色＞2/3。兩項結果相加＞3分為陽性。
8、 1.3統(tǒng)計學處理采用多個樣本均數(shù)間兩兩比較F檢驗與不配對資料t檢驗，不同組間表達比率采用四格表資料的χ2檢驗，運用SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理。 2結果 2.1消痰散結方對裸鼠MKN45胃腺癌生長的影響荷瘤對照組在MKN45人胃腺癌接種于裸鼠皮下后14d左右，腹部開始觸及結節(jié)型腫塊，以后逐漸增大。中藥組晚于對照組觸及腫塊，化療組又稍
