三氧化二砷對人胃癌裸鼠皮下移植瘤的作用機制

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1、三氧化二砷對人胃癌裸鼠皮下移植瘤的作用機制作者：梁軍，高永麗，趙園園，姚如永，尚慶軍，高士芳，胡曉曉【摘要】目的：探討不同劑量As203對人胃癌細胞株SGC7901裸鼠皮下移植瘤的體內(nèi)抑瘤作用及作用機制.方法：建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，隨機分為實驗組即As203低（1.0mg/kg）中（2.5mg/kg）高（5.0mg/kg）劑量組、空白對照生理鹽水組及陽性對照5FU組（20mg/kg），腹腔連續(xù)給藥10d，計算抑瘤率，檢測用藥后裸鼠的肝腎功能及血常規(guī)，觀察用藥前后裸鼠體重改變，實時定量RTPCR檢測移植瘤內(nèi)ca

2、spase3基因相對表達量.結(jié)果：低劑量As203組及5FU組抑瘤率分別為60.6%和78.2%，與生理鹽水組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）,中高劑量組及5FU組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）.用藥后低劑量As203組caspase3的基因表達顯著增高，與生理鹽水組比較有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,中高劑量組在數(shù)值上caspase3表達增高，但無統(tǒng)計學差異（P>0.05）.各劑量組均出現(xiàn)白細胞抑制，但較5FU組輕，肝腎功能未見異常.結(jié)論：低劑量As203表現(xiàn)出抑制腫瘤生長的作用,其機

3、制可能與上調(diào)caspase3基因的表達有關；As203對肝腎無明顯毒性.【關鍵詞】三氧化二砷；胃腫瘤；小鼠，祼；腫瘤移植；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3　0引言　　　　胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及癌癥相關死亡率高［1］，現(xiàn)有化療藥物有效率低緩解期短，延長生存有限［2］，因此探索新的化療藥物具有重要的臨床意義.目前在細胞及小鼠體內(nèi)水平的研究均發(fā)現(xiàn)As203能抑制體外培養(yǎng)胃癌細胞及小鼠胃癌的生長［3-5］，在此基礎之上，本實驗通過建立人胃癌裸鼠移植瘤模型在體內(nèi)水平對As203的體內(nèi)抗人胃癌作用進行療效觀察及機制研究，為

4、As203用于臨床治療提供實驗依據(jù).　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1細胞株和實驗動物人胃癌細胞株SCG7901,購自中國科學院上海生物研究所.Balb/cnu裸小鼠，25只，4~6ePCR反應試劑盒購自日本TaKaRa公司.　　1.2方法　　1.2.1細胞培養(yǎng)和動物模型的建立胃癌細胞株SCG7901培養(yǎng)于含100mL/L標準胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，在37℃,50mL/LCO2的條件下培養(yǎng)，收集對數(shù)生長期的細胞制備成濃度為3×1010/L的單細胞懸液，在超凈工作臺內(nèi)于裸鼠腹股溝區(qū)皮下注射0.15

5、mL的單細胞懸液，注射局部出現(xiàn)明顯皮丘，7d后所有裸鼠均出現(xiàn)直徑大于5mm的皮下結(jié)節(jié)，移植瘤模型建立.　　1.2.2裸鼠分組和給藥于接種后8d將已建立皮下移植瘤模型的25只裸鼠隨機分為5組，即生理鹽水組（空白對照組）,5FU組（陽性對照組）、As203高中低劑量組（1.0,2.5及5.0mg/kg）,每組5只.并于當日將As203及5FU注射液稀釋適當濃度腹腔給藥，生理鹽水組生理鹽水0.4mL,ip,連續(xù)給藥10d，給藥期間每天觀察各組裸鼠的精神、飲食、活動、大小便等一般情況于停藥后第2日處死裸鼠，剝離瘤組織，稱取瘤重

6、并按下面公式計算抑瘤率：瘤重抑瘤率=(1一實驗組平均瘤重／對照組平均瘤重)×100％.采用摘眼球取血方法采集血樣以備血常規(guī)及生化檢測.腫瘤組織于-70℃冰箱保存.　　1.2.3RealtimeRTPCR按照Trizol說明書提取瘤組織中總RNA，分光光度計檢測260/280吸光光度比值，選取比值在1.8~2.1之間的RNA樣本.采用TaKaRa的反轉(zhuǎn)錄反應體系進行反轉(zhuǎn)錄反應以合成cDNA，以管家基因GDPH為對照，采用Taq探針法應用LightCyclerRealTimePCR(RocheDiagnostics公司)擴

7、增儀進行PCR反應，用20μLTaKaRaPCR反應體系，反應條件為95℃5s變性，60℃30s退火及延伸，40個循環(huán).用RocheLightCyclerprobedesignsoftRNA的數(shù)目.　　統(tǒng)計處理：數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS12．0統(tǒng)計學軟件進行分析，多樣本均數(shù)比較采用方差分析，兩組間比較采用SNKq檢驗，以P<0.05為檢驗水準.2結(jié)果　　2.1As203的抑瘤作用用藥后低劑量As203組及5FU組腫瘤生長明顯減慢，移植瘤的重量顯著低于其他組(表1)，與生理鹽水組相比較差異有統(tǒng)計學意義（P&l

8、t;0.05），但5FU組及低劑量As203組腫瘤重量差異無統(tǒng)計學意義且中高劑量組與生理鹽水組比較差異無顯著性（P>0.05），提示低劑量As203有顯著的抑瘤作用而中高劑量的As203未表現(xiàn)出抗腫瘤作用.　　表1As203對胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用（略）　　aP<0.05vs生理鹽水.