生物鐘基因hclock在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究

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1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文生物鐘基因hClock在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究姓名：陳伯贊申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：傅德良；華魯純2012-04-102012年復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文生物鐘基岡hCIock在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究生物鐘基因hClock在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究中文摘要目的生物鐘基因是設(shè)定并調(diào)控機(jī)體出現(xiàn)晝夜節(jié)律周期的系統(tǒng)，是一種以近似24小時(shí)為周期的振蕩器。Clock基因處于生物鐘基因家族的核心地位。結(jié)直腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)生是多因素、多步驟的復(fù)雜生物學(xué)過程。許多研究表明，結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與生物鐘基因表達(dá)的異常存在關(guān)系，但其分子機(jī)制還知之甚少。本實(shí)驗(yàn)采

2、用分子生物學(xué)方法，研究hClock基因在人結(jié)直腸癌及正常腸道粘膜組織中的表達(dá)，hClock基因表達(dá)與腫瘤相關(guān)基因以及與腫瘤轉(zhuǎn)移、病理分級、臨床分期的關(guān)系。通過研究，為結(jié)直腸腫瘤的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)，并為腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)。樣本本實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本共30例，取自復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院病理研究中心腫瘤組織庫。標(biāo)本采集于復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普通外科自2007年1月至2008年9月行結(jié)直腸癌根治術(shù)患者的手術(shù)切除大體標(biāo)本。標(biāo)本采集于10：00～14：00時(shí)間段。在手術(shù)切除標(biāo)本自體內(nèi)切斷所有血供后15分鐘內(nèi)，自腫瘤侵犯處腸壁粘膜面取材作為實(shí)驗(yàn)組，自遠(yuǎn)離腫瘤近標(biāo)本切緣處腸壁粘膜面取材作為對照組，所取

3、標(biāo)本立即投入液氮中妥善保存。并且完整收集所有患者的臨床病史資料進(jìn)行分析。所有病例術(shù)前均未發(fā)現(xiàn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，未行放療、化療。所有病例經(jīng)石蠟病理證實(shí)為結(jié)直腸腺癌，切緣均未見腫瘤累及。方法1．蛋白免疫熒光染色組織化學(xué)方法檢測hCLOCK蛋白在癌組織與配對正常組織中表達(dá)的差異；2．熒光定量實(shí)時(shí)PCR方法檢測hClock基因及腫瘤相關(guān)基因(Bak、Bax、Bid、HIF一1Q、ARNT、TNFRI、TNFR工I及VEGF)在癌組織與配對正常組織中表達(dá)的差異。2012年復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文生物鐘基因hCIock在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究結(jié)果1．所有標(biāo)本中均有hCLOCK蛋白的表達(dá)；hCLOCK蛋白在人

4、結(jié)直腸癌中表達(dá)水平較正常組織明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；hCLOCK蛋白在腫瘤分化差、TNM分期晚期的腫瘤中表達(dá)升高水平更為明顯；64．3％有腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中hCLOCK蛋白高表達(dá)；2．所有標(biāo)本中均有hClock基因的表達(dá)；hClock基因在人結(jié)直腸癌中表達(dá)水平較正常組織明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

5、)；Bak基因表達(dá)水平增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；Bax、Bid表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)；ARNT、HIF一1Q及VEGF在腫瘤分化差、TNM分期晚期的腫瘤中表達(dá)升高水平更為明顯；所有14例有腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中均有VEGF高表達(dá)；4．在人結(jié)直腸癌中，hClock基因表達(dá)水平與ARNT、HIF—lQ及VEGF基因表達(dá)水平呈線性正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；與Bak、Bax、Bid、TNFRI及TNFR工工表達(dá)無明顯線性相關(guān)性(P>O．05)。結(jié)論1．生物鐘基因hClock在人結(jié)直腸粘膜中存在表達(dá)；2．生物鐘基因hClock在人結(jié)直腸癌中表達(dá)水

6、平較正常組織明顯升高，并且與腫瘤進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；3．牛物鐘基因hClock可能屬于原癌基因；4．在人結(jié)直腸癌中生物鐘基因hClock與HIF-1Q／ARNT及VEGF等腫瘤相關(guān)基因表達(dá)呈正相關(guān)。關(guān)鍵詞結(jié)直腸癌，晝夜節(jié)律生物鐘，生物鐘基因，hClock中圖分類號R62StudyonthepressionofclockgenehClockexpreSSlonObjectiveinhumancolorectalcarcinomaAbstractCircadiangeneiSasystemthatsetsandregulatescircadianrhythminorganisms，asan

7、oscillationwithanapproximate24一hourcycle．GenehClockiSatthecorepositionofthecircadiangenefamily．Colorectalcarcinomaisacommonmalignancyaffectinghumanhealthworldwide．Themolecularmechanismgoverningthedevc、lopmentofcolorect