順鉑對(duì)沉默β-catenin的卵巢細(xì)胞癌skov3細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲的影響

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文順鉑對(duì)沉默β--catenin的卵巢細(xì)胞癌SKOV3細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲的影響姓名：衛(wèi)曉娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：吳小華201203中文摘要順鉑對(duì)沉默13-catenin的卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲的影響摘要目前，卵巢上皮性癌(epithelialovariancancer,EOC，以下簡(jiǎn)稱(chēng)卵巢癌)的病死率居于婦科惡性腫瘤之首。因卵巢的解剖位置隱匿，且早期癥狀多不典型，使多數(shù)患者確診時(shí)已處于晚期，5年生存率不超過(guò)30％11I。目前治療卵巢癌的最大難點(diǎn)是化療耐藥問(wèn)題，這就需要更具有針對(duì)性的靶向治療來(lái)提高治療效果和五年生存率。目前研究證

2、實(shí)【2】人類(lèi)的多種癌癥中普遍存在Wnt／13一catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活，如乳腺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌、喉癌等，該通路作為腫瘤基因靶向治療的新靶點(diǎn)已經(jīng)成為分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和新抗腫瘤藥物研發(fā)領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)【3，41顯示在卵巢癌中，Wnt／13．catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路起著重要作用，但是其機(jī)制還沒(méi)有完全被認(rèn)知【5】。13-catenin是Wnt／13一catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的核心蛋白，其在細(xì)胞漿內(nèi)的的聚積是Wnt／13．catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活的標(biāo)志。Rask等【3】用復(fù)合免疫沉淀法發(fā)現(xiàn)在低分化的III期漿液性卵巢癌中存在13．catenin的胞

3、漿高表達(dá)，而正常卵巢組織中未發(fā)現(xiàn)，表明Wnt／13一catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在卵巢癌中被異常激活。因此降調(diào)或沉默Wnt／13．catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的核心蛋白13-catenin是否可以阻斷該通路，從而引起腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的變化?Verma等【6】通過(guò)siRNA沉默13-catenin蛋白后，發(fā)現(xiàn)在體外可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖，而且還能夠降低結(jié)腸癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力，延長(zhǎng)荷瘤裸鼠的生存期，提示13-catenin參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡等過(guò)程，可以作為腫瘤治療的靶點(diǎn)。近來(lái)，有證據(jù)顯示f7J13．catenin與腫瘤化療的耐藥產(chǎn)生有一定的相關(guān)性，它可以通過(guò)激活Wnt／

4、13．catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游靶基因(如MDRl、c—myc、MRP2、cyclinDl等)，從而影響腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性。本實(shí)驗(yàn)利用包含有13一catenin特異序列RNA的慢病毒沉默13．catenin蛋白后觀察順鉑對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲力的影響。目的：通過(guò)沉默Wnt／15一catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵蛋白p．catenin，觀察順鉑對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖、凋亡以及侵襲力的影響，從而為卵中文摘要巢癌的耐藥逆轉(zhuǎn)提供新思路。方法：1分別用p．catenin．RNAi．LV(13-catenin．RNAi慢病毒液)、13-catenin—negati

5、ve．LV(空載體慢病毒液)轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞，采用westernblot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后卵巢癌SKOV3細(xì)胞中D．catenin蛋白的表達(dá)水平；2實(shí)驗(yàn)分為六組，分別為：SKOV3、SKOV3．cDDP(單用順鉑處理的SKOV3)、SKOV3．neg(轉(zhuǎn)染空載體慢病毒的SKOV3)、SKOV3．neg—cDDP(轉(zhuǎn)染空載體慢病毒并用順鉑處理的SKOV3)、SKOV3一RNAi(轉(zhuǎn)染13-catenin—RNAi慢病毒的SKOV3)及SKOV3．RNAi—cDDP(轉(zhuǎn)染13-catenin．RNAi慢病毒并用順鉑處理的SKOV3)。3MTT法檢測(cè)不同濃度順鉑對(duì)SKOV3的增殖抑制

6、率的變化、轉(zhuǎn)染p．catenin—RNAi．LV后不同濃度順鉑對(duì)SKOV3的增殖抑制率的變化、轉(zhuǎn)染13．catenin．negative．LV后不同濃度Jimtfl對(duì)SKOV3的增殖抑制率的變化；4采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率情況；5利用Transwell小室分別進(jìn)行體外各組細(xì)胞遷移力及侵襲力的測(cè)定；6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)4-標(biāo)準(zhǔn)差表示，方差齊性檢驗(yàn)，多組間的比較采用方差分析，以a=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，當(dāng)P<0．05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；當(dāng)P>0．05時(shí)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：lWesternblotting結(jié)果顯示：13-ca

7、tenin在SKOV3高表達(dá)，轉(zhuǎn)染13-catenin—RNAi．LV后p．catenin在SKOV3中的表達(dá)量下降，統(tǒng)計(jì)Westernblotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)13．catenin蛋白的表達(dá)量下降大于70％，證實(shí)B．catenin被13-catenin-RNAi．LV有效沉默。2MTT結(jié)果：通過(guò)半數(shù)抑制濃度(IC50)計(jì)算軟件得出順鉑對(duì)SKOV3、SKOV3一RNAi的IC50值，每組重復(fù)三次，得出順鉑對(duì)SKOV3的IC50是(13．7±5．24)“∥ml