豬細小病毒弱毒苗的免疫原性及豬體載量研究

豬細小病毒弱毒苗的免疫原性及豬體載量研究

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1、StudiesonImmunogenicityofPorcineParvovirusAliveVaccineandTissueLoadDistributionsinPigsThesi:submittedt011eslssUDmlttel:1toQ籮ngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomy,一一WangXiaoling(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Superviso

2、r:Prof.BiKedongProf.CuiShangjinQingdao.ChinaJune,2012獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:主凇時間:ag-.oo_@6月國日關于論文使用授權的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定,即:學校有權保留

3、送交論文的復印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。(保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議)研究生簽名:互茹淞時間:^,>年占月邃日導師簽名:聽≥巨.f帥‰旺釓1日一I刪嬲監(jiān)豬細小病毒弱毒苗的免疫原性及豬體載量研究摘要本研究主要評價研制的豬細小病毒弱毒苗的免疫原性及在豬體的組織分布。選擇PPV.BQ連續(xù)傳代致弱的毒株免疫接種后備母豬和仔豬,試驗選PPV陰性的11月齡母豬和30-40日齡的仔豬,隨機分為2組,即健康對照組和免疫接種組。免疫組

4、于第0d肌肉注射接種PPV.BQ弱毒株(TCID50=104.5/mL)的10倍稀釋液10mL,健康對照紐接種DMEM細胞培養(yǎng)液10mL。在o、7、14、21、28、35、42d采集血液并分離血清,.20℃保存。分別在試驗第7、21、42d處死仔豬,母豬于免疫接種后第10d配種,于免疫后第35d處死,收集主要臟器,.20℃保存。血凝抑制、ELISA、病毒中和抗體試驗檢測抗體的變化水平;WST-8方法檢測脾淋巴細胞增殖情況;PCR檢測前21d的病毒血癥情況;血凝試驗檢測臟器的病毒分布情況。主要臟器制成病理切片HE染色,觀察豬體的組織病理學變化.根據(jù)PPV-VP2

5、基因設計了一對特異性引物,建立了檢測PPV的實時熒光定量PCR方法,對該毒株在后備母豬和仔豬的體內組織的病毒載量進行測定。結果如下:1.臨床癥狀及剖檢結果顯示,對照組無臨床癥狀和病理變化,免疫組母豬和仔豬無臨床癥狀和無可見的病理損傷。2.抗體變化水平顯示,對照組抗體水平一直處于陰性狀態(tài),母豬在免疫后7d產(chǎn)生保護,炷抗體,一直持續(xù)到試驗結束;免疫組仔豬抗體水平較低,沒有達到保護性抗體水平。淋巴細胞增殖試驗結果顯示,病毒性刺激可使免疫組豬體脾淋巴細胞增殖水平顯著提高,對照組淋巴細胞在特異性刺激時不能產(chǎn)生明顯增殖。3.組織免疫形態(tài)學檢測結果顯示,對照組母豬和仔豬各臟

6、器均未發(fā)現(xiàn)明顯的免疫形態(tài)學損傷;免疫組母豬和仔豬的子宮未發(fā)現(xiàn)明顯的免疫形態(tài)學損傷,其它組織有輕微損傷。4.病毒組織分布結果顯示,對照組母豬及仔豬臟器中均未檢出PPV病毒。免疫組母豬心臟和子宮中檢出PPV病毒,免疫組仔豬在心臟、脾臟和腎臟中檢出了PPV病毒。本試驗探討了PPV.BQ弱毒株接種后備母豬及仔豬的免疫原性,為豬細小病毒病弱毒株的后續(xù)研究奠定了基礎。關鍵詞:豬細小病毒弱毒株;免疫原性;組織免疫形態(tài)學;病毒組織分布StudiesonImmunogenicityofPorcineParvovirusAliveVaccineandTissueLoadDistr

7、ibutionsinPigsAbstractGiltsandpigletswereinoculatedwithPPV-BQattenuatedstraininthisstudytoevaluatetheitsimmunogenicityanddistributionintissues.Threegiltsandsixpigletswererandomlydividedintotwogroups.Theimmunizationgroupandthecontrolgroupwerehousedinindividualisolationrooms.Theimmuni

8、zationgroupwereinoc

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