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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文BRG1基因在乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲中的作用及分子機(jī)制研究姓名：張翠朋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：鄭駿年2012-03徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文BRGl基因在乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲中的作用及分子機(jī)制研究中文摘要目的體外研究BRGl基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響及其分子機(jī)制。方法siRNA技術(shù)降低乳腺癌細(xì)胞MDA．MB．231和BT-549中BRGl蛋白表達(dá)水平，并用West鋤Blot驗(yàn)證干涉效果；用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)分析BRGl基因?qū)煞N乳腺癌細(xì)胞增殖能力的
2、影響；利用流式細(xì)胞分析技術(shù)研究BIⅪl基因在兩種乳腺癌細(xì)胞周期進(jìn)展中的作用，并利用W-estemBlot研究BRGl對(duì)多種細(xì)胞周期蛋白(CDK)及細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDKIs)的影響；利用Trallswell細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)分析BRGl基因?qū)煞N細(xì)胞株遷移及侵襲能力的影響；并利用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)分析兩種乳腺癌細(xì)胞分泌至胞外的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的變化情況，利用west鋤Blot檢測(cè)MMPs及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(TMPs)蛋白表達(dá)水平的變化情況。結(jié)果siI斟A技術(shù)能明顯降低MDA．MB一231和
3、BT-549兩種乳腺癌細(xì)胞BRGl基因的表達(dá)；CCK．8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BRGl基因干涉后明顯抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的增殖能力；流式細(xì)胞分析技術(shù)及westemBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BRGl通過調(diào)節(jié)CyclinE、CyclinE2、CyclinB1和p27的蛋白表達(dá)參與細(xì)胞周期調(diào)控；TraIlSwell細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BRGl表達(dá)降低后明顯抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力；westemB10t及明膠酶譜實(shí)驗(yàn)顯示BRGl通過上調(diào)MMP．9和MMP．2的活性水平和下調(diào)TIMPl和TIMP2表達(dá)水平來促進(jìn)
4、乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)論BRGl基因表達(dá)降低通過下調(diào)CyclinE、CyclinE2、CyclinB1蛋白的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)p27蛋白的表達(dá)，而使MDA．MB．231和BT．549兩種乳腺癌細(xì)胞徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文均停滯在Gl期，最終抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的增殖能力。BRGl基因表達(dá)降低通上調(diào)TMP2和Tm01的表達(dá)抑制相應(yīng)的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP．2和MMP．9的表達(dá)，下調(diào)MMP．2和MMP．9的酶活性水平，發(fā)揮抑制兩種乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力的作用。關(guān)鍵詞BRGl；乳腺癌；增殖；遷移；侵襲4徐州醫(yī)學(xué)院碩
5、士學(xué)位論文一———————————————————————————————————————————————————一ThemolecularmechanismofB1]}-G1generegulateshumanbreastcancerceUprolifleration，migraⅡonandinVasionAbstractobjec伽eTheaimofthisstIldyistoinVcstigatemeroleofBRGlgeneinⅡlehllmallbreastcaIlcercdlprolif．erat
6、ion，mi孕．a(chǎn)tionandiIlVasioninVi缸．o．MethodsWeutilizedsmallnerf撕ngI斟A(siIⅢA)t9chnologyto墨ileIlceBRG1expressioninMDA-MB．231andBT．549breaStcancercellsandidentifiedtllel(Ilockdowne虢ctbyWbstenlB10t．CCK-8cellproli蠡瀚tionassaywasusedtodetectt11einnuenceon廿1epr01if砒iono
7、f廿lesetwocellsaRerBRGlknockdown．F10wtypeCellanalysistechnology(FACS)andWbst锨B10twllichwasdoneby戚ngamultitlldeofcyclin趾dcyclin—d印c11dentl(inasei1111ibitorantibodysamplerl(itswereusedtostIJdymem01ecularmechaIlismsofBRGlinthecellcyCleprogrcss．TrallswellceUmi孕at
8、ionassayandmatrigdcdlinVasionaSsaywereperfomedt0studywhemerBRG1isinVolVedinbreastcancercellmigration鋤dinVasionabilities．TIo6盯廿lercon6nnmeresult，wealsodetectedMMPsactiVitiesa11dMMPsa11dTIMPsprote
