cathepsin l新型抑制劑clik148對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡的機(jī)制

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1、本課題得到下列基金的資助：國家自然科學(xué)基金項目(30973510)、蘇州中藥研究所及教育部留學(xué)回國人員基金項目(K513400110)蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：—牟扯日蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使

2、用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻(xiàn)信息情報中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所(含萬方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在——年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名：毖日期：導(dǎo)師簽名：1＼Ii≮j遺。驗逸．∑j避CathepsinL新型抑制劑Clikl4

3、8對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡的機(jī)制中文摘要L新型抑制劑Clikl48對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡的機(jī)制中文摘要目的：觀察CathepsinL新型抑制劑Clikl48對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其保護(hù)缺血缺氧性星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的機(jī)制：抑制CathepsinL．Caspase信號機(jī)制的激活。方法：采用大鼠永久性大腦中動脈阻塞(permanentmiddlecerebralarteryocclusion，pMCAO)方法，建立腦缺血的大體模型。大鼠腦缺血前10min或缺血后6h側(cè)腦室給予Cl

4、ikl48，以腦梗塞體積和行為學(xué)癥狀等指標(biāo)以及Westernblot法檢測Clikl48對缺血皮層MAP2蛋白表達(dá)水平的影響來評價Clikl48對腦缺血性損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。采用原代培養(yǎng)大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucosedeprivation，OGD)方法，建立腦缺血的細(xì)胞模型。免疫熒光法和LDH法分別檢測OGD誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽性細(xì)胞數(shù)和乳酸脫氫酶漏出率；采用WestemBlot法和免疫組化法檢測體內(nèi)和體外缺血缺氧對星形膠質(zhì)細(xì)胞CathepsinL和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，以及Clikl48對CathepsinL和凋亡相關(guān)

5、蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：在大鼠局灶性腦缺血體內(nèi)模型中，Clikl48(12．5、25、50nm01)可顯著減小腦梗塞體積和改善行為學(xué)體征以及上調(diào)缺血皮層MAP2、GFAP蛋白的表達(dá)水平(P

6、MCAO大鼠誘導(dǎo)的缺血模型中，WesternBlot結(jié)果顯示：大鼠大腦缺血皮層活性CathepsinL、tBid、Caspase．3上調(diào)以及線粒體的Cyt．C下調(diào)和細(xì)胞漿中Cyt．C上調(diào)。Clikl48給藥組可對抗大鼠局灶性腦缺血模型大鼠缺血皮層中活性CathepsinL、tBid、Caspase-3的上調(diào)以及線粒體內(nèi)的Cyt．C下調(diào)和細(xì)胞漿中中文摘要CathepsinL新型抑制劑Clikl48對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡的機(jī)制Cyt．c上調(diào)。免疫組化結(jié)果顯示：大鼠大腦缺血皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞中CathepsinL從溶酶體釋放到

7、細(xì)胞質(zhì)中以及Caspase．3陽性細(xì)胞增多；Clikl48給藥組可抑制大腦缺血皮層中CathepsinL釋放以及Caspase．3的陽性細(xì)胞數(shù)目。在OGD誘導(dǎo)的體外缺血模型中，WesternBlot結(jié)果顯示：星形膠質(zhì)細(xì)胞在OGD后，活性CathepsinL、tBid、Caspase-3上調(diào)以及線粒體的Cyt．c下調(diào)和細(xì)胞漿中Cyt．g上調(diào)。WesternBlot結(jié)果亦顯示：Clikl48可對抗OGD引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞中活性CathepsinL、tBid、Caspase．3和Cyt．C蛋白表達(dá)的變化。結(jié)論：CathepsinL新型抑制劑Clikl48對大鼠

8、局灶性腦缺血和OGD導(dǎo)致的星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷有顯著保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抑制C