dc-cik細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞周期、凋亡、增殖和遷移的影響研究

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1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文DC--CIK細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞周期、凋亡、增殖和遷移的影響研究姓名：項(xiàng)穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：秦波201205DC．cIK細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞周期、凋亡、增殖和遷移的影響研究1摘要目的：研究在各種細(xì)胞因子作用下，通過(guò)一定的試驗(yàn)方法將從原發(fā)性肝癌病人PBMC誘導(dǎo)出的樹突狀細(xì)胞(DC)與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)對(duì)人肝癌HEPG2細(xì)胞系周期、凋亡、增值、遷移的影響，了解DC—CIK細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞作用的規(guī)律，更好地為臨床治療原發(fā)性肝癌提供試驗(yàn)基礎(chǔ)依據(jù)。方法：用原發(fā)性肝癌患者肝癌組織裂解物(腫瘤

2、抗原)致敏經(jīng)GM—CSF、TNF—a及IL一4等誘導(dǎo)該患者PBMC產(chǎn)生的DC。用IFN一¨IL．2和人CD3單克隆抗體等誘導(dǎo)該P(yáng)BMC的懸浮細(xì)胞產(chǎn)生CIK細(xì)胞。用TaIlswell培養(yǎng)小室將DC．CIK細(xì)胞與HEPG2細(xì)胞在同一培養(yǎng)體系內(nèi)經(jīng)該小室膜分隔培養(yǎng)24、48h。流式細(xì)胞儀檢測(cè)該HEPG2細(xì)胞的周期；Ame)(inV．PI雙染法檢測(cè)其凋亡。RT．PCR、Westemblot分別檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bax及其編碼蛋白的表達(dá)。CCK一8法檢測(cè)HEPG2細(xì)胞生長(zhǎng)變化，并繪制其生長(zhǎng)曲線；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其增殖、遷移能力。RT．PCR、West

3、emblot分別檢測(cè)其增殖細(xì)胞核抗原PCNA基因及其編碼蛋白的表達(dá)。結(jié)果：DC．CIK細(xì)胞可明顯影響人HEPG2細(xì)胞生長(zhǎng)周期，經(jīng)兩者共同培養(yǎng)，可將HEPG2細(xì)胞系阻滯于G1期。DC．CIK細(xì)胞能顯著誘1本課題受重慶市衛(wèi)生局科研基金資助，項(xiàng)目批號(hào)：csTc2010—2—30l2導(dǎo)HEPG2細(xì)胞的凋亡(與對(duì)照相比，其凋亡誘導(dǎo)率差異顯著，P<0．011?；蚺c蛋白水平檢測(cè)表明，DC—CIK細(xì)胞可致HEPG2細(xì)胞系的凋亡相關(guān)基因BaX表達(dá)明顯上調(diào)。CCK一8法檢測(cè)顯示，DC．CIK細(xì)胞對(duì)人HEPG2細(xì)胞生長(zhǎng)具顯著殺傷作用(與對(duì)照細(xì)胞比較，P

4、

5、DWITHDENDRITICCELLSoNTHECYCLE，APoPToSIS，PRoLIFERATIoNANDMIGRATIoNoFHEPAToM已父CARCINoⅣ【ACELLSABSTRACTObjectiVe：ToeXploratetheeffectofcytol(ineinducedkiller(CIK)cellaIlddendnticcell(DC)舶mpe訂pheralbloodmononuclearcell(PBMC)ofpadentwithprima巧liVercanceronthecycle，印optosis，p

6、rolifera矗onaIld面礦ationofhumanHEPG2cell1ineofliVercaIlcerMethods：ThePBMCwereinducedbyGM-CSF、TNF一僅andIL-4inordertoproduceDC，whichweresensitizedwithaIltigenofautologoustissueofprimarylivercancer．Meanwllile，CIKcellswereobtained白∞mthesuspendedPBMCinducedbyIFN小IL一2andhumaJlC

7、D3monoclonal枷ibody(hCD3mAb)．TheDC，CIKcellsandHEPG2ceU1iIlewereculturedi11as鋤ecirculnstancebutdif詫rentpartsofacultllrillgcabinnamedTranswell氨貿(mào)24hand48hrespectively．SubsequentlythecycleofhumanHEPG2celllineweretestedbynowcytomeny(FCM)．The加meXinV—PIstajniIlgwas鋤ployedtoana

8、lysis廿1eapoptosisoft11esameceUline．TheeXpressionofBaxgenewhichrelatedwitl：1apoptosisofthiscellsanditscodedproteinwere